国家科技攻关计划(2002BA711A16)
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
- 相关作者：王富强徐平任志红戴梦赵颖更多>>
- 相关机构：华北制药集团新药研究开发有限责任公司复旦大学更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划国家技术创新计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 新型马尔尼菲青霉菌RhoGTPase激活因子的RNAi研究被引量：2
- 2008年
- 为探讨马尔尼菲青霉菌Rho GTPase激活因子基因的功能,构建了以xylP为启动子,靶基因正反双向序列被550 bpgus序列隔开的干扰该基因表达的载体pCB309A-XRGT.利用根癌农杆菌的介导转化马尔尼菲青霉菌,并以博莱霉素抗性筛选;实时定量PCR(Real-time quantitative PCR)检测发现该载体的干扰效率达83%,Rho GTPase激活因子基因的表达受干扰后,马尔尼菲青霉菌的菌丝生长受到抑制,菌落也较野生型及对照菌株显著变小.
- 钮蓓蓓陶菊红董辉汤生荣任双喜
- 关键词：RNA干扰马尔尼菲青霉RHO实时定量PCR
- 产黄青霉转化载体pPIPKA的构建及青霉素工业生产菌株的转化研究被引量：6
- 2004年
- 以腐草霉素(phleomycin)抗性为选择标记,构建了用于青霉素生产菌—产黄青霉Penicillium chrysogenum的转化载体pPIPKA。 以此转化当前的青霉素生产菌株NCPC-10086,建立了高效的工业生产菌株的基因转化体系,转化效率最高达18个转化子/g DNA。对转化子进行了PCR及Southern杂交分析,结果表明,外源基因整合到了宿主的染色体上。
- 王富强任志红徐平赵颖修建新朱研研贺秉坤
- 关键词：基因转化青霉素
- 产黄青霉工业生产菌种基因报告系统的构建及启动子效率的评价被引量：9
- 2005年
- 本研究以四种不同物种来源,不同代谢途径功能基因的启动子为材料,分别构建了以产黄青霉异青霉素N合成酶(IPNS)基因pcbC的启动子Pipns、构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶基因gpdA的启动子PgpdA、构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的启动子PtrpC、粗糙脉胞霉氨基酸合成交叉途径控制基因cpc的启动子Pcpc为启动子,腐草霉素(phleomycin)抗性基因为报告基因,构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的终止子TtrpC为终止信号的丝状真菌转基因质粒,建立了产黄青霉工业生产菌种启动子筛选、评价体系,调查了这四种启动子的强弱。结果表明选择性标记基因受强启动子驱动可以提高产黄青霉工业生产菌种的转基因效率。研究也显示这四种启动子的强弱的顺序为PgpdA、Pcpc、Pipns和PtrpC。
- 任志红徐平王富强苏彩云丰玫玫张佳戴梦韦春玲穆岷贺建功
- 关键词：调控元件抗性基因
- 酵母绿色荧光蛋白报告载体的构建及其在过氧化物酶体研究中的应用被引量：4
- 2007年
- 以载体pYES2为基础,构建了酵母表达载体pYES2G,该载体含有融合了过氧化物酶体定位信号1(PTS1)的绿色荧光蛋白报告分子GFP-SKL编码基因,该基因以酵母TEF1启动子启动。pYES2转化研究表明,在野生型酵母INVScl中,GFP-SKL蛋白在细胞中呈点状聚集,而在酵母PEX5p缺陷菌株ATCC4003603中,荧光为弥散状,证明报告分子GFP-SKL可通过PEX5p蛋白有效定位到过氧化物酶体。在载体pYES2G的多克隆位点分别连入酵母及产黄青霉PEX5p编码基因得到载体pYES2G/ScPEX5和pYES2G/PcPEX5,转化酵母ATCC4003603,荧光均呈聚集状,证明外源PEX5p基因的表达恢复了缺陷菌株的功能。pYES2G载体为真菌过氧化物酶体相关基因的功能研究提供了直观有效的方法。
- 郑桂珍赵颖戴梦刘静王富强
- 关键词：绿色荧光蛋白过氧化物酶体酵母
