国家自然科学基金(30030130)
- 作品数：19 被引量：56H指数：6
- 相关作者：金伯泉张新海贾卫李琦欧阳为明更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人CD226(PTA1)分子胞膜外区截短体真核表达载体的构建、表达及其识别结构域的分析被引量：1
- 2003年
- 目的 确定一套CD2 2 6单克隆抗体 (McAb)识别CD2 2 6分子胞膜外区结构域的部位。方法 应用计算机软件分析CD2 2 6分子蛋白质序列疏水性 ,确定其亲水性区域。采用PCR方法扩增CD2 2 6分子基因序列 ,分别缺失相应亲水性区域 ,构建CD2 2 6截短体重组真核细胞表达载体pcDNA3 PTA1T1和pcDNA3 PTA1T2。测序正确后 ,转染COS7细胞 ,抗CD2 2 6分子多克隆抗体间接免疫荧光染色 ,流式细胞术检测CD2 2 6分子截短体的表达。表达成功后 ,采用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析 ,用一套CD2 2 6McAb检测与截短突变体的免疫反应性 ,从而确定CD2 2 6McAb识别CD2 2 6分子结构域的部位。结果 PCR扩增出CD2 2 6分子相应目的片段序列 ,定向克隆入pcDNA3真核表达载体 ,DNA序列测定正确。转染COS7细胞后 ,流式细胞术检测CD2 2 6截短体分子有较高水平的表达。CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1和FMU1～ 7均可识别CD2 2 6全长分子 ;LeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU4和FMU5与截短突变体PTA1T1和PTA1T2均无反应性 ;FMU3可结合PTA1T1分子 ,不结合PTA1T2分子 ;FMU6和FMU7均可结合PTA1T1及PTA1T2分子。结论 CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU3、FMU4和FMU5识别CD2 2 6分子胞膜外区D1结构域 ,其中FMU3识别的位点位于V1和V2环之间 ;FMU6?
- 贾卫刘雪松张新海朱勇张贇李琦杨琨欧阳为明宁双飞金伯泉
- 关键词：CD226PTA1基因表达
- AP1对人CD226/PTA1启动子的调控作用
- 2005年
- 目的:确定血小板/T细胞活化抗原1(PTA1)基因的转录起始点,及激活蛋白1(AP1)对PTA1启动子的调控作用.方法:采用5′RACE方法确定PTA1基因的转录起始点;将含AP1的真核表达载体和含有PTA1启动子的荧光素酶的报告基因载体共转染人肝癌细胞系HHCC,培养48h后检测其荧光素酶活性.结果:人PTA1基因的转录起始点定位于ATG上游229bp处,AP1可以显著地增强PTA1启动子P1和P2的活性,转录因子ets1对AP1上调P1和P2活性有不同的调控作用.结论:PTA1的转录起始点位于ATG上游229bp处,AP1可能参与调控PTA1的表达.
- 菅金龙陈立杰曹云新欧阳为明金伯泉
- 关键词：PTA1启动子RACE
- 超抗原对NK细胞亚群凋亡诱导配体表达与功能的调节被引量：6
- 2006年
- 目的研究凋亡诱导配体分子在超抗原活化NK细胞CD56bright亚群和CD56dim亚群上的表达规律和功能。方法以超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A/B(SEA/B)活化PBMC为模型,应用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察不同活化模型中凋亡诱导配体分子在NK细胞CD56bright和CD56dim亚群表达的变化;采用51Cr释放实验及抗体阻断实验,观察NK细胞亚群的功能与凋亡诱导配体分子表达的关系;利用激光共聚焦显微镜,观察凋亡诱导配体分子在NK细胞杀伤相的分布。结果当超抗原浓度为0.1μg/mL时,TRAIL和TNF在NK细胞上的表达率及NK细胞杀伤活性于培养第2天时达到高峰,FasL在NK细胞上表达未见明显变化。TRAIL和TNF分子聚集于NK细胞与靶细胞的接触部位,FasL分布未见明显变化。结论超抗原SEA和SEB促进TRAIL和TNF在CD56dim亚群表达,TRAIL和TNF可能参与NK细胞免疫突触的形成。
- 张赟程光韩卫宁曹云新李琦金伯泉
- 关键词：凋亡诱导配体NK细胞亚群超抗原
- 超抗原对NK细胞CD226分子表达与功能的调节被引量：5
- 2006年
- 目的研究超抗原对NK细胞CD226分子表达与功能的调节。方法以超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A/B(SEA/B)活化PBMC为模型,应用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察CD226分子在NK细胞上的变化;采用51Cr释放实验,观察NK细胞在超抗原作用下杀伤功能的改变;利用激光共聚焦显微镜,观察CD226分子在NK细胞杀伤相的分布。结果在静止PBMC中,CD56+NK细胞的百分率为12.3%,CD56+CD226+细胞仅为1.4%。当效靶比为5∶1时,NK细胞对K562细胞的杀伤率为(3.2±0.2)%。当0.1mg/LSEA或SEB刺激PBMC1d后,CD56+NK细胞的百分率分别为13.5%和14.1%,CD226在NK细胞上的表达水平明显升高,且主要表达在CD56dim细胞上。在刺激第2天,SEA组CD56+CD226+占CD56+细胞69.1%,SEB组CD56+CD226+占CD56+细胞64.3%。刺激第3天,CD226在NK细胞上的表达水平均较第2天明显下降。在超抗原0.1mg/L作用3d中,SEA组和SEB组NK细胞杀伤率均明显高于同期未刺激组NK细胞的杀伤率及新鲜分离NK细胞的杀伤率(P<0.05),在作用的第2天,SEA组和SEB组杀伤率均达到峰值分别为(82.3±6.9)%和(80.6±7.5)%。激光共聚焦结果显示,CD226分子与LFA-1分子共定位于NK细胞与K562细胞的接触部位。结论超抗原SEA和SEB可提高NK细胞杀伤活性,可能与其促进CD226分子在NK细胞上的表达相关,CD226分子可能参与NK细胞免疫突触的形成。
- 张赟程光韩卫宁曹云新金伯泉
- 关键词：CD226NK细胞亚群超抗原
- 检测可溶型CD226双mAb夹心ELISA的建立及初步应用被引量：6
- 2003年
- 目的 :建立一种检测可溶型CD2 2 6 (sCD2 2 6 )的双mAb夹心ELISA ,并用于临床标本的检测。方法 :确定包被mAbLeoA1和HRP mAbFMU3的最佳工作浓度及最佳稀释液后 ,建立双mAb夹心ELISA ,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。再以建立的方法检测临床标本。结果 :包被mAbLeoA1的最佳工作浓度为 2 .5mg/L ,HRP mAbFMU3的最佳工作浓度 1∶4 0 0 ,标准品及HRP mAb的最佳稀释液分别为 1g/LBSA 1mL/LTween2 0 PBS和 30 g/LPEG PBS .建立的双mAb夹心ELISA ,其特异性 (与人IgG无交叉反应 ,阻断实验中阻断效应呈剂量依赖性 )、敏感性 (检出下限为 110ng/L标准品CD2 2 6 /Fc融合蛋白 )及稳定性 (CV <10 .2 % )均较良好。对部分临床标本的检测中 ,发现 6例类风湿关节炎(RA)患者血清sCD2 2 6的水平升高 ,与正常人血清sCD2 2 6水平相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :建立一种特异性高、重复性好、较敏感的检测sCD2 2 6的双mAb夹心ELISA 。
- 宁双飞贾卫张新海杨琨李琦刘雪松金伯泉
- 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附试验类风湿性关节炎
- 可溶性细胞因子受体及可溶性粘附分子被引量：11
- 2003年
- 许多免疫细胞膜分子存在可溶性形式 ,能与其配体或受体结合并发挥生物学效应的大多是可溶性细胞因子受体 (sCKR)和可溶性粘附分子 (sAM)。sCKR和sAM通过膜分子的酶切或在mRNA水平的不同剪接而产生 ,可发挥独特的免疫学功能 ,参与机体生理病理过程 ,并可辅助疾病的诊断 ,在一些疾病的治疗上也取得明显进展。
- 宁双飞
- 关键词：可溶性粘附分子生物学效应
- PTA1/CD226亚家族的研究进展被引量：5
- 2009年
- 免疫球蛋白超家族(IgSF)成员占细胞黏附分子(CAM)的一大部分,通过识别细胞表面相应的配体或受体,发挥多方面的免疫学功能。现就一组同源IgSF新成员,包括血小板/T细胞活化抗原1(PTA1/DNAM-1/CD226)和CD96(Tactile)两个受体及其两个配体脊髓灰质炎病毒受体(PVR/CD155)和单纯疱疹病毒受体(nectin-2/CD112)的结构、相互作用、免疫学功能以及与临床的关系作一综述。
- 刘蓉蓉金伯泉
- 关键词：CD226
- 银屑病患者血清中可溶性血小板T细胞活化抗原1的检测被引量：9
- 2003年
- 目的检测银屑病患者血清中可溶性血小板T细胞活化抗原1(sCD226/PTA1)的水平,初步探讨该抗原与银屑病的关系。方法银屑病患者包括疗前30例,其中活动期17例、静止期13例,疗后10例,正常人对照15例。应用双抗体夹心ELISA法测定血清中sCD226/PTA1的浓度。结果银屑病组血清中sCD226/PTA1水平(823.88±569.93pg/mL)显著高于正常人(120.45±58.41pg/mL),t= 4.41,P<0.001。活动期(1036.07±598.97pg/mL)更高,依次高于静止期(546.39±399.28pg/mL)和正常人。疗后组(263.16±207.3pg/mL)显著低于相应的疗前组(751.51±648.07pg/mL),t= 3.42,P<0.005。与正常人比较,疗后组值仍偏高,但差异无显著性,t=2.02,P>0.05。结论银屑病患者血清中存在高水平的sCD226/PTA1,并在活动期、静止期及疗后呈现出不同的变化。提示CD226/PTA1可能参与银屑病的病理过程。
- 周武庆宁双飞贾卫金伯泉崔盘根杨雪源
- 关键词：银屑病CD226病理学
- CD226分子参与内皮细胞黏附功能的形态学证据被引量：3
- 2003年
- 目的 :提供CD2 2 6分子参与内皮细胞黏附功能的形态学证据。方法 :体外培养人脐静脉内皮细胞 ,加入融合蛋白CD2 2 6 Ig,采用倒置显微镜和扫描电子显微镜观测CD2 2 6分子在活化内皮细胞和活化PBMC黏附过程中的作用。结果 :融合蛋白CD2 2 6 /Ig可显著降低活化内皮细胞与活化PBMC间的黏附。结论 :CD2 2 6分子是活化内皮细胞表面一种新的黏附分子 。
- 陈丽华张新海佘义朝刘雪松金伯泉
- 关键词：CD226人脐静脉内皮细胞形态学
- 含3C蛋白酶切位点的人CD226胞膜外区Ig融合蛋白的真核表达及应用被引量：2
- 2003年
- 目的 :构建含 3C蛋白酶酶切位点的人CD2 2 6 (PTA1)分子胞膜外区Ig融合蛋白编码基因的真核表达载体 ,并进行表达和初步鉴定。方法 :将人CD2 2 6分子的胞膜外区基因 ,克隆入含 3C蛋白酶靶序列的Ig真核表达载体 p 3C Ig中。测序证实后 ,转染COS7细胞并进行瞬时表达。表达产物经亲和层析柱纯化 ,并通过免疫荧光染色及 3C蛋白酶酶切反应进行鉴定。结果 :经表达和纯化获得CD2 2 6胞膜外区的Ig融合蛋白。该融合蛋白可与表达于ECV30 4细胞表面的CD2 2 6配体有效结合。同时 ,融合蛋白的Fc段亦经 3C蛋白酶切除 ,从而获得CD2 2 6胞膜外区的真核表达分子。结论 :成功地获得了含有 3C蛋白酶酶切位点的人CD2 2 6分子胞膜外区Ig真核表达产物 ,为进一步对CD2 2 6分子进行结构和功能研究 。
- 张新海杨琨贾卫欧阳为明刘莹许晓光李琦金伯泉
- 关键词：真核表达融合蛋白
