国家自然科学基金(51267014)
- 作品数：15 被引量：57H指数：5
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- 相关机构：内蒙古大学内蒙古农牧业科学院内蒙古自治区离子束生物工程重点实验室更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 漆酶基因异源表达及其酶活性的研究进展被引量：4
- 2016年
- 近年来由于漆酶在生物漂白和农作物秸秆利用等方面具有广阔的应用前景,对漆酶的研究越来越受到国内外学者的重视。然而,自然界漆酶的产量和酶活较低,难以适应工业化生产需求。此外,漆酶的产酶效率低,成本高。实现漆酶的异源高效表达是解决这一问题的有效途径。目前,国内外已有多种来源的漆酶基因被成功克隆,并在不同的宿主细胞中实现异源表达,但迄今为止漆酶基因异源表达结果仍然不理想,离真正实现漆酶的高效表达还有一定距离。
- 刘晓庆那日郭九峰
- 关键词：漆酶宿主细胞异源表达基因克隆酶活性
- γ-聚谷氨酸的基因克隆与序列分析
- 2017年
- 本研究通过基因组DNA提取和PCR扩增分别得到Bacillusnatto20646的原初始菌株N-1、高压电晕电场和不同种类稀土元素诱变的突变株N-2、N-3、N-4、N-5及N-6的pgsBCA合成酶基因序列,利用BioEdit软件对6株菌株的pgsB、pgsC和pgsA的基因序列及合成酶蛋白PgsB、PgsC和PgsA蛋白酶的氨基酸序列对比后得出:pgsB、pgsC和pgsA基因分别约含1170个、450个和1140个核苷酸,分别编码约390个、150个和380个氨基酸。高压电晕电场和稀土元素使得菌株γ-PGA合成酶基因簇pgsBCA核苷酸发生了碱基的置换和颠换、插入和缺失,合成酶蛋白PgsBCA氨基酸序列发生了氨基酸的替换、插入和缺失,且对序列的开端和尾端的影响较大,PgsA在30~40个氨基酸区间变化显著,使该处氨基酸残基的跨膜区发生变化,准确的膜锚定,γ-PGA高效地从活性中心位点移开,加快实现了链的延长,为γ-PGA产量的提高提供理论基础。
- 吉美萍那日郭九峰肖志婷庞艳波付丽丽
- 关键词：Γ-PGA
- 蒙古口蘑担孢子萌发及初生菌丝生物学特性研究被引量：5
- 2016年
- 以蒙古口蘑(Tricholoma mongolicum)为试材,采用光学显微镜观察担孢子及菌丝体形态的方法,研究了不同培养基对蒙古口蘑担孢子萌发及初生菌丝生长情况的影响。结果表明:蒙古口蘑担孢子呈肾形或椭圆形,大小约为(4~6)μm×(6~9)μm;担孢子在培养基上萌发出肉眼可见的微小菌落至少需要1周的时间;MS培养基中添加1.5g·L^(-1)酵母粉和1.5g·L^(-1)酸水解酪蛋白,对担孢子萌发有明显的促进作用;根据初生菌丝菌落生长速度和菌落形态等有关特征,发现有5种明显不同类型的初生菌丝,分别为菌丝绒毛型、菌丝贴生型、菌丝稀薄型、成簇生长型、缓慢生长型。另外,采用rDNA-ITS方法、PCR产物测序及NCBI-Blast比对,证明试验材料为蒙古口蘑。该试验提供了一种食用菌菌丝体直接PCR的方法,为进行有关食用菌DNA分子方面研究提供了便利;该研究结果可为蒙古口蘑担孢子交配型研究提供依据,为珍稀食用菌研究积累资料。
- 刘晓婷郭九峰王淑妍李亚娇袁丽丽那日
- 关键词：生长发育有性繁殖单核菌丝生物学习性
- 纳豆芽孢杆菌的相关研究进展被引量：17
- 2016年
- 纳豆芽孢杆菌是一种好氧型革兰氏阳性益生菌,具有较强的热、酸碱稳定性,进入肠道后迅速发育成营养性细胞,抑制肠杆菌、肠球菌、致病菌等的生殖,促进双歧杆菌、乳酸杆菌和梭菌等厌氧菌的生长,调节微生态平衡,代谢分泌出多种促进营养物质消化吸收的酶类,强化消化机能,同时刺激机体内的免疫系统产生干扰素等抗菌物质和高强溶栓功效的纳豆激酶,增强动物细胞免疫功能.纳豆芽孢杆菌可作为天燃防腐剂、微生态制剂、饲料添加剂、酶活性增强剂、免疫增强剂,提高食品的保藏期、动物的日增重和产奶率,运用到水体中可起到净化水质、改良底质等的作用.本文对纳豆芽孢杆菌的菌落结构、生长曲线、发酵产物及其功能应用进行综述,为充分发挥纳豆芽孢杆菌的功能,生产新型绿色国民生活所需品,降低生产成本提供理论支撑.
- 吉美萍肖志婷那日郭九峰庞艳波庞艳波
- 关键词：纳豆芽孢杆菌纳豆激酶微生态制剂Γ-PGA
- 用rDNA-ITS方法鉴别内蒙古多种野生食用菌被引量：11
- 2015年
- 采用rDNA-ITS分子标记对内蒙古地区市场11种常见野生食用菌，以2个已知长期人工栽培可食用菌种香菇和双孢蘑菇为比照进行分子鉴定；通过优化DNA提取方法及PCR反应条件，用通用引物rrSl／rrS4扩增出650~800bp的目的DNA片段，经PCR产物直接测序，然后与DNA序列数据库中的信息资源进行比对，鉴定出11个样品分属于卷边网褶菌、香杏丽蘑、野蘑菇、马鞍菌、杨树口蘑、蒙古口蘑和白鳞蘑菇。利用DNAMAN8软件，分析13个材料rDNA中ITS区序列，做同源性矩阵，绘制NJ树，得出13种常见食用菌亲缘关系的结论。结果表明：rDNA-ITS分析方法可以有效地划分不同种属的菌种，可以区分出常见野生食用菌。
- 刘晓婷郭九峰王淑妍李亚娇那日
- 关键词：野生食用菌同源性分析食品安全
- 一株白桩菇属野生食用菌菌种分离鉴定与培养被引量：6
- 2017年
- 以内蒙古锡林郭勒草原一株野生蘑菇为试材,采用形态特征和生态习性鉴定及分子鉴定的方法,对该蘑菇的菌丝体基因组DNA进行18S和ITS片段的扩增、测序,测序结果经Blast比对,从而对该蘑菇进行分离鉴定。结果表明:该野生真菌属于白桩菇属Leucopaxillus。另外,通过优化的MS平板培养基避光培养,在MS平板培养基上有原基形成,为日后对该菌种的驯化与栽培提供材料,为其开发与利用奠定基础。其ITS序列已上传GenBank,登录号为KY173356。
- 刘晓婷孙国琴李亚娇王淑妍郭九峰
- 关键词：野生真菌ITS序列原基
- 重组布氏乳杆菌漆酶表达的研究
- 2016年
- 本研究将杏鲍菇漆酶基因接入食品级宿主细胞乳酸杆菌中,成功构建重组工程乳酸菌。为筛选出单个转化菌株,将重组工程乳酸菌液涂布到含有红霉素的固体MRS培养基中,挑取白色菌落直接进行PCR,筛选阳性重组子。并提取筛选到的阳性重组子质粒,进一步进行PCR验证。将验证过确实存在漆酶基因的阳性重组子涂布到含有愈创木酚的固体培养基中进行培养,菌落颜色变成红棕色表明具有分泌漆酶的能力,挑取颜色变化较深的菌落,测定其酶活。成功筛选到具有产漆酶能力的重组工程乳酸菌,对其适宜温度、酸碱度进行了研究。具有分泌漆酶能力的乳酸菌若能作为青贮饲料的添加剂,将大大提高青贮饲料的利用率及品质。
- 刘晓庆那日郭九峰薛丹
- 关键词：漆酶乳酸菌酶活性
- 3种食用菌漆酶活性比较及其基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2013年
- [目的]研究食用菌漆酶基因的差异以及漆酶的活性。[方法]利用编码杏鲍菇漆酶基因序列(Genbank No.AY686700)设计特异性引物,采用PCR方法获得3种典型木腐食用菌(杏鲍菇、平菇、白灵菇)漆酶的基因序列。[结果]扩增得到的片段长度均为2 606 bp,通过对基因序列的内含子/外显子分析,获得漆酶编码区的cDNA,该基因的开放阅读框由1 596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽。3种食用菌漆酶基因的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为99.81%,说明漆酶的一级结构序列具有很高的保守性。[结论]序列的差异性、氨基酸跨膜区的不同及蛋白质的构象不同可能导致漆酶活性的高低。
- 刘腾郭九峰那日薛丹
- 关键词：食用菌漆酶基因克隆酶活性
- 杏鲍菇漆酶基因DNA片段的克隆及序列分析被引量：3
- 2013年
- 参照Genbank中发表的杏鲍菇漆酶基因序列(No.AY686700),并根据真菌漆酶氨基酸序列保守区设计特异性引物。以杏鲍菇基因组DNA为模板,PCR扩增出长2 606 bp的漆酶基因片段,DNA经纯化后克隆到pGM-T载体上,经筛选、PCR鉴定和序列分析,证明该片段为完整的杏鲍菇漆酶基因(Genbank注册号KC789846)。通过对基因序列的内含子/外显子进行预测分析,获得漆酶编码区的cDNA,该基因的开放阅读框由1 596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽,分子量大小约为56 682.0,等电点pI为4.56;比对结果发现该基因氨基酸序列与其他真菌漆酶的同源性最高达93%;进一步对X22-12漆酶二级结构进行分析,并通过SWISS-MODEL预测了该酶的三维结构。
- 薛丹郭九峰那日刘腾
- 关键词：杏鲍菇漆酶基因基因克隆
- 杏鲍菇漆酶基因原核表达载体的构建及乳酸菌的遗传转化
- 2015年
- 为获得有效表达的产漆酶乳杆菌工程菌和既可以产乳酸又可以产漆酶的益生菌制剂。以杏鲍菇为试验材料,利用RT-PCR方法,克隆漆酶基因,将其与乳酸菌食品级表达载体质粒p MG36e进行连接,构建漆酶乳酸杆菌表达载体质粒p MG36e-Lacc1,通过电激转化法使其进入从青贮饲料中提取的布氏乳杆菌中,并探究影响布氏乳杆菌电转化的最适条件。试验结果表明:扩增得到长度为1 596 bp的漆酶基因片段,成功构建漆酶乳酸杆菌表达重组质粒,利用电激转化技术使其导入布氏乳杆菌基因组中,研究表明当电场强度达到1.75 k V,用SMRS培养基复苏培养1.5 h后,得到较高的电激转化率。
- 薛丹那日郭九峰刘腾
- 关键词：漆酶表达载体系统
