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猪Setd8基因不同转录本的鉴定及其表达谱分析: ＜正＞引言/目的Setd8（SET domain containing lysine methyltransferase）是一种组蛋白去甲基化酶,可影响PCNA和Wnt等基因的表达,参与精原干细胞增殖分化等的调控,进而影...; 于帅潘传英

猪睾丸间质干细胞的分离、鉴定及短期培养: ＜正＞引言/目的睾丸间质干细胞（SLCs）是睾丸间质内的一种成体干细胞,可以分化成成熟睾丸间质细胞,后者主要合成和分泌体内约95%的睾酮,参与精子发生的调控,影响动物的繁殖性能。猪作为重要的模式动物和经济动物,关于其繁殖...; 于帅潘传英

利用特定因子诱导293T细胞的重编程研究: 引言将体细胞重编程为诱导多潜能干细胞(iPS细胞)是近年来干细胞研究的热点领域,iPS细胞带来了为患者提供"个性化"的自体干细胞的可能,同时也为研究疾病的发生发展、基因与蛋白的功能提供了重要的细胞模型,有助于对基础科学和...; 潘传英蓝贤勇陈宏Colin E Bishop; 文献传递

牛c-Myc/TAT/9R融合表达载体构建及其原核表达研究: 2013年; 原癌基因c-Myc虽然在许多肿瘤组织中特异性高表达,但它也是机体正常细胞生长与增殖所必需的因子,然而目前家畜诱导多潜能干细胞(iPS)研究中关于多功能转录因子cMyc的报道很少。为此,研究拟利用蛋白转导区域(PTD)的跨膜作用,构建TAT-bc-Myc-9R融合表达载体,并对其进行原核表达,旨在为转录因子蛋白重编程牛体细胞奠定基础。试验以牛c-Myc基因编码区序列为参考,设计并合成含酶切位点、跨膜转导肽TAT和9R的引物,利用PCR等基因工程方法获得包括牛c-Myc、TAT和9R的重组原核表达载体(pTAT-HA-bcMyc-9R);酶切鉴定和DNA测序结果表明,试验成功获得bc-Myc-9R重组序列,成功构建重组质粒pTAT-bc-Myc-9R;不同IPTG浓度和诱导时间条件对该重组载体的诱导表达和SDSPAGE分析表明,TAT-bc-Myc-9R在0.6mmol/L IPTG和37℃诱导6h条件下表达约57KDa的目的蛋白。这些结果为PTD介导的转录因子蛋白直接重编程牛体细胞以获得iPS研究积累了科学资料。; 甘鹏熊亮贾文超潘传英蓝贤勇陈宏; 关键词：C-MYC基因 TAT 原核表达

Oct4基因12-bp插入/缺失(indel)对公猪繁殖相关性状的影响: 引言/目的研究发现,Oct4作为重编程的关键因子,其表达不仅对于哺乳动物生殖细胞的形成和维持是必需的,它的缺失还会引起原始生殖细胞的凋亡,从而影响哺乳动物的繁殖性能。目前,对于Oct4基因的研究主要集中在多能性细胞的干性...; 任发潘传英

猪Setd8基因不同转录本的鉴定及其表达谱分析: 引言/目的Setd8(SET domain containing lysine methyltransferase)是一种组蛋白去甲基化酶,可影响PCNA和Wnt等基因的表达,参与精原干细胞增殖分化等的调控,进而影响雄性...; 于帅潘传英

猪睾丸间质干细胞的分离、鉴定及短期培养: 引言/目的睾丸间质干细胞(SLCs)是睾丸间质内的一种成体干细胞,可以分化成成熟睾丸间质细胞,后者主要合成和分泌体内约95%的睾酮,参与精子发生的调控,影响动物的繁殖性能。猪作为重要的模式动物和经济动物,关于其繁殖性能调...; 于帅潘传英

Oct4基因12-bp插入/缺失（indel）对公猪繁殖相关性状的影响: ＜正＞引言/目的研究发现,Oct4作为重编程的关键因子,其表达不仅对于哺乳动物生殖细胞的形成和维持是必需的,它的缺失还会引起原始生殖细胞的凋亡,从而影响哺乳动物的繁殖性能。目前,对于Oct4基因的研究主要集中在多能性细胞...; 任发潘传英

利用诱导因子Oct4、Sox2和SV40T的mRNA介导体细胞重编程研究被引量：4: 2012年; 为利用特定诱导因子Oct4、Sox2和SV40T的体外转录mRNA实现安全的成纤维细胞重编程,本研究成功构建了特定诱导因子Oct4、Sox2和SV40T的mRNA体外转录载体,并对体外转录mRNA进行了5′和3′端加工修饰;进行了诱导因子mRNA的293和IMR90细胞转染试验,利用免疫细胞化学、免疫荧光和Real-Time PCR分别检测了Oct4、Sox2、SV40T和Nanog的表达情况。结果显示,以上2种细胞以Oct4∶Sox2∶SV40T=2∶1∶1的mRNA比例转染后均表达这3种特定诱导因子,且相应蛋白都正确地定位在细胞核上。转染细胞中Oct4和Nanog的表达都特异性地增高。结果提示,3种诱导因子的体外转录mRNA能够在体内协同作用,激活细胞内源性干性标志基因Nanog的表达,为开启重编程过程奠定了坚实的基础。; 潘传英陈宏BISHOP E.Colin; 关键词：MRNA 重编程

跨膜转导肽TAT、9R和牛Sox2融合蛋白原核表达载体的构建与表达研究: 2013年; 【目的】构建pTAT-bSox2-9R融合表达载体,并对其进行原核表达研究,为利用TAT和多聚精氨酸(9R)的跨膜作用实现转录因子蛋白直接重编程牛体细胞提供科学资料。【方法】以GenBank上公布的牛Sox2基因编码区序列为基础,设计并合成含酶切位点、跨膜转导肽TAT和9R的引物;利用PCR扩增方法获得包括Sox2、TAT和9R的重组DNA序列,并将其克隆到空质粒pTAT-HA上,从而构建pTAT-HA-bSox2-9R重组表达载体;将经酶切鉴定和测序验证后的重组表达载体转化大肠杆菌,在不同IPTG浓度和诱导时间等条件下进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。【结果】成功获得bSox2-9R重组序列,成功构建重组质粒pTATbSox2-9R;pTAT-bSox2-9R在0.6mmo/L的IPTG于37℃诱导4h的条件下表达目的蛋白约36ku,经Western blot验证为目的蛋白。【结论】成功获得了pTAT-bSox2-9R融合蛋白,为多聚精氨酸蛋白转导域(PTD)介导的转录因子蛋白直接重编程黄牛体细胞以获得诱导多潜能干细胞的研究积累了原始资料。; 贾文超甘鹏熊亮潘传英蓝贤勇陈宏; 关键词：黄牛体细胞重编程 TAT SOX2

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