河北省科技攻关计划(02276401D)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
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- 抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性。方法分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗)。纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶。分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA。结果获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50μg/L的gp36。结论为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗。
- 赵正历王润田王平王从印张征峥邓郁青
- 关键词：HIV-2抗体单克隆酶联免疫吸附测定
- 三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体稳定性的影响
- 2010年
- 目的研究葡萄糖、蔗糖、麦芽糖三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体(简称单抗)稳定性的影响,进一步延长血型试剂的使用期限。方法将葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂,计为葡萄糖组、蔗糖组、麦芽糖组,生理盐水做对照(盐水组),分别加入抗人红细胞A、B抗原的腹水型单抗溶液,37℃、室温、4℃条件下观察抗体效价变化。结果 0.1～0.8 mol/L的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖对抗A、B单抗效价均有一定稳定作用,同种糖高浓度的稳定效果优于低浓度,最佳有效稳定浓度为0.4 mol/L。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂存在时,37℃下腹水单抗的效价稳定性可延长至2～3周,室温下可延长至4～6个月,4℃下可延长至24个月。结论葡萄糖、蔗糖、麦芽糖均可作为单抗的稳定剂,可提高抗体的稳定性,延长使用期限;蔗糖效果更好。
- 张坤娟邓郁青弋国红张红中王从印张雪迎王惠芬
- 关键词：单克隆抗体稳定性蔗糖麦芽糖
- 抗HIV-1 p24单克隆抗体的制备、特性鉴定及初步应用被引量：3
- 2006年
- 目的:制备抗HIV1p24单克隆抗体(mAb)及特性鉴定。方法:采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV1p24mAb的杂交瘤细胞。选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后,分别包被ELISA板及作为酶标记mAb,建立双mAb夹心ELISA法,检测400份正常人血浆,20份抗HIV抗体阳性(p24抗原阴性)的血浆,20份HIV1感染的细胞培养上清及HIV1p24抗原国家参考品,并同时用进口p24抗原检测试剂盒进行对比检测。结果:经细胞融合、筛选、克隆化,共获得10株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选A值≥2.50的2株mAb建立的双mAb夹心ELISA法,敏感性可达2.5ng/L,且与进口试剂盒检测结果的一致性良好。结论:建立了具有高度敏感性和特异性的双mAb夹心ELISA法,为研制可用于检测HIV1p24抗原的试剂盒奠定了基础。
- 张红中王润田王蕙芬张坤娟王从印王丽
- 关键词：HIV-1P24单克隆抗体ELISA
- 多种单抗联合检测HIV抗原被引量：10
- 2009年
- 目的建立多种单抗联合早期检测HIV抗原的夹心ELISA方法。方法以SAS盐析沉淀法和亲和层析法纯化抗HIV-1 p24、gp41、gp120及抗HIV-2gp36的腹水型单克隆抗体（McAb），用高碘酸钠法将纯化的McAb以HRP进行标记。建立针对单个抗原的双抗体夹心ELISA法，对其灵敏度及特异性进行检测。将筛选得到的4株捕获McAb按比例混合作为捕获抗体，4株酶标McAb按比例混合作为检测抗体，建立多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA方法，检测混合HIV抗原。结果按确定的最优反应条件建立的多种McAb联合夹心ELISA方法，检测到的最高稀释度的HIV混合抗原中各抗原的终浓度分别为：重组HIV-1p24：0．625pg／ml，gp41：6．25ng／ml，gp120：6．25ng／ml；HIV-2gp 36：9．25ng／ml。结论建立了具有高度敏感性的鸡尾酒式多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA法，为早期检测HIV抗原提供了新的思路，为后续的研究奠定了一定基础。
- 邓郁青张征峥王平丁军颖张红中王润田
- 关键词：HIV单克隆抗体ELISA
- 抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义
- 2009年
- 目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体(mAb),用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵(SAS)纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的最佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb:7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1μg/L。结论获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。
- 邓郁青张坤娟王从印张征峥宋小天张红中王润田
- 关键词：人类免疫缺陷病毒-1单克隆抗体双抗体夹心ELISA
