江苏省青年科技基金(BK2007608)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用蛋白组方法筛选血浆中乙肝病毒PreS1结合蛋白被引量：2
- 2009年
- 目的筛选血浆中乙型肝炎病毒PreS1结合蛋白。方法表达纯化了PreS1-谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione—S-transferase，GST）融合蛋白，利用该蛋白与血浆进行Pull—down实验，并设立GST与血浆Pull—down，GST、PreS1-GST与PBS Pull—down对照，Pull-down产物进行双向电泳分离（2-DE），差异蛋白点通过质谱鉴定。结果成功表达纯化出PreS1-GST融合蛋白，通过双向电泳分析发现一个PreS1特异结合蛋白，经质谱鉴定为含锚蛋白重复序列的蛋白57（ANKRD57）。结论锚蛋白重复序列的主要功能是介导蛋白质与蛋白质之间的相互作用，ANKRD57与PreS1特异结合后的生理功能值得深入研究。
- 崔仑标葛以跃史智扬焦永军唐震单云峰单军汪华
- 关键词：PRES1结合蛋白蛋白组学
- 应用蛋白组学方法筛选和鉴定乙型肝炎病毒PreS1结合蛋白被引量：3
- 2009年
- 前S1蛋白(PreS1)在乙型肝炎病毒与宿主的相互作用中起至关重要的作用.为筛选乙型肝炎病毒PreS1结合蛋白,进一步探讨其在病毒感染过程中的作用,原核表达、纯化了PreS1-谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)融合蛋白,利用此蛋白与HepG2细胞裂解液进行Pull-down实验,其产物进行双向凝胶电泳分离.结果发现2个PreS1特异结合蛋白,经质谱鉴定为分子伴侣蛋白——葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和葡萄糖调节蛋白75(GRP75).通过免疫共沉淀和Western印迹分析证实,PreS1与GRP75之间存在相互作用.实验结果表明,GRP75为新发现乙型肝炎病毒PreS1特异结合蛋白,其与PreS1结合后的生理功能以及在HBV感染过程中的作用值得深入研究.
- 葛以跃崔仑标史智扬焦永军张文帅汪华
- 关键词：前S1蛋白结合蛋白蛋白组学葡萄糖调节蛋白75
- Stx1B基因克隆、表达及重组蛋白的纯化被引量：2
- 2009年
- 目的构建志贺样毒素1B亚单位(Stx1B)的原核表达载体,获取高纯度的Stx1B重组蛋白。方法用PCR法扩增Stx1B,通过基因重组技术克隆入原核表达载体pGEX4T-2,将该重组质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析及Westernblot检测。结果重组质粒经诱导后表达分子量为34kD的重组蛋白,Western blot检测显示特异性条带,亲和层析柱纯化后得到重组蛋白的纯度在90%左右。结论成功构建了Stx1B重组质粒,表达并纯化出高纯度重组蛋白,为进一步的生物性质研究奠定了基础。
- 马明葛以跃崔仑标史智扬曾晓燕焦永军唐震单云峰汪华
- 关键词：志贺样毒素原核表达蛋白纯化
