国家自然科学基金(31070705)
- 作品数：9 被引量：15H指数：2
- 相关作者：关一夫阎敬贺安宁郝凤进李黎明更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院东北大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科技厅基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 无镍不锈钢金属支架材料对血管内皮细胞凋亡的诱导机制被引量：2
- 2014年
- 目的研究高氮无镍不锈钢(HNNF SS)材料对血管内皮细胞凋亡的影响。方法应用Annexin V.FITC/PI染色和流式细胞分析术检测贴附于HNNF SS和对照组316L不锈钢(316L SS)材料表面的人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)的凋亡水平;实时定量PCR检测凋亡相关基因和microRNA(miRNA)的表达水平。结果流式细胞结果表明316L SS比HNNF SS能更有效地激活细胞凋亡(P<0.05),生长在316L SS上的HUVECs中Fas、Caspase.3和Caspase.8基因过表达,2种材料上生长的HUVECs中miR.133a、186、210、34a和124含量高于空白对照组(P<0.05)。结论316L SS激活细胞凋亡的机制可能与镍离子激活Fas.Caspase.8.Caspase.3外源性凋亡通路相关,此信号通路也受miRNA调节,实时定量PCR检测结果显示了相关基因及miRNA的表达差异。提示HNNF SS在避免细胞凋亡,减缓支架植入再狭窄方面优于16L SS材料。
- 唐苏铭周晓航李黎明关一夫
- 关键词：血管内皮细胞凋亡MICRORNA
- 正反向Penetratin转导肽细胞穿膜效率的初步比较
- 2013年
- 目的:实验致力于研究正反向细胞穿膜肽Penetratin携带工具的穿膜效率,为进一步解决大分子药物的临床应用奠定基础。方法:通过质粒构建重组成融合质粒载体pET-28a-EGFP,pET-28a-Penetratin(+)-EGFP和pET-28a-Penetratin(-)-EGFP,分别在BL21(DE3)中进行表达、经过His标签蛋白纯化柱纯化,得到比较纯的融合蛋白,然后用这些蛋白与HeLa细胞共同孵育,进行蛋白质的穿细胞功能检测。结果:His-Penetratin(+)-EGFP和His-Penetratin(-)-EGFP穿细胞膜能力类似,而His-EGFP不具有细胞穿膜功能。结论:经过研究验证正向和反向序列Penetratin穿膜能力类似,并且两种融合蛋白穿膜机制与膜受体无关,属于被动运输的一种,两种融合蛋白对细胞无创伤作用,为开发新药成功建立了技术平台。
- 郭庆国徐影琪叶翠
- 关键词：质粒构建绿色荧光蛋白
- 原癌基因启动子中G-四链体的研究进展被引量：1
- 2015年
- G-四链体是富含G的核酸序列形成的一种非典型的DNA二级结构,在多个原癌基因启动子中能够负调控基因表达,进而抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡及减缓肿瘤细胞迁移等,为肿瘤靶向治疗提供了新靶点。本文阐述了多个原癌基因启动子G-四链体结构特点、小分子配体对G-四链体的稳定作用以及启动子中的G-四链体的基因表达调控作用。
- 阎敬关一夫
- 关键词：原癌基因启动子肿瘤靶向治疗调控基因表达基因表达调控肿瘤细胞迁移
- MET启动子中的G-四链体结构在基因表达调控中的作用
- 2016年
- 目的分析原癌基因MET启动子中的G-四链体结构的基因表达调控功能。方法采用双荧光素酶报告基因系统、荧光定量PCR和蛋白印迹实验分析MET启动子的G-四链体结构的功能。结果 50μM和100μM TMPyP4在双荧光素酶检测系统中能够显著抑制MET启动子活性,而对其突变体没有抑制作用;50μM和100μM TMPyP4显著下调MET mRNA和MET蛋白表达水平。结论小分子配体TMPyP4能够稳定启动子的G-四链体结构而抑制MET基因的表达,这为肿瘤的靶向治疗提供了新思路。
- 阎敬关一夫
- 关键词：基因表达调控
- 大黄素对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX耐药的逆转作用被引量：2
- 2015年
- 目的研究大黄素(emodin)体外逆转人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX的紫杉醇耐药效应,探讨其可能机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测大黄素对SKOV3/TAX的细胞毒作用,测定非毒性剂量大黄素联合紫杉醇作用后,SKOV3/TAX对紫杉醇耐药性的变化,采用克隆形成实验检测大黄素与紫杉醇联用时,细胞克隆形成能力。采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡情况。结果不同浓度大黄素对紫杉醇耐药细胞SKOV3/TAX有剂量和时间依赖性的抑制作用。选用对细胞抑制率较低浓度的大黄素与紫杉醇联合使用,使紫杉醇对其耐药细胞SKOV3/TAX细胞的IC50明显下降,且逆转倍数随作用时间而延长而增大。大黄素能抑制细胞的克隆形成能力,当大黄素与紫杉醇联用时,大黄素增加紫杉醇对SKOV3/TAX细胞的增殖抑制作用。大黄素在抑制细胞增殖的同时,尚可诱导细胞凋亡,且大黄素与紫杉醇联和用药后诱导细胞凋亡作用更强,大黄素能增加紫杉醇的细胞凋亡指数。结论大黄素可以逆转紫杉醇引发的卵巢癌耐药,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。
- 常世杰李硕李艳秋关一夫
- 关键词：人卵巢癌大黄素紫杉醇耐药逆转
- TMPyP4对肝癌细胞HepG2生长抑制作用的研究被引量：4
- 2016年
- 目的 TMPyP4是G-四链体的配体,能够诱导形成G-四链体结构并增强G-四链体结构的稳定性,加强G-四链体作为负调控因子抑制MET基因的表达;G-四链体结构的形成可以选择性的抑制肿瘤细胞增殖。本研究旨在分析TMPyP4对肝癌细胞HepG2生长抑制作用的研究,为MET高表达的肿瘤靶向治疗提供新思路。方法采用CCK-8方法分析HepG2细胞增殖变化,通过Hoechst 33342细胞核染色和AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术分析HepG2细胞凋亡水平,以及利用流式细胞术分析HepG2细胞周期分布的变化。结果 CCK-8分析HepG2细胞增殖显示,与对照组比较,10μmol/L TMPyP4对HepG2细胞存活率无显著影响,20、50、100和200μmol/L TMPyP4组HepG2细胞存活率分别为(82.28±1.99)%、(68.88±3.06)%、(55.57±2.76)%和(50.32±5.78)%,F=120.542,P<0.001,说明高于20μmol/L的TMPyP4显著抑制细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡不明显,只有高浓度TMPyP4诱导少量HepG2细胞发生了凋亡,并出现了坏死细胞;100和200μmol/L TMPyP4的实验组细胞经Hoechst 33342染色,有少数HepG2细胞表现出细胞核固缩、致密,形态不规则,染色不均一,呈现凋亡表现;不同浓度的TMPyP4处理HepG2细胞使G0/G1期细胞增加了20%,S期细胞减少,G2/M期细胞也减少,表示HepG2细胞发生了G0/G1细胞周期阻滞。结论 G-四链体的配体TMPyP4显著抑制了肝癌细胞HepG2的细胞增殖,诱导少量HepG2细胞凋亡,并使HepG2细胞发生了G0/G1细胞周期阻滞。
- 阎敬贺安宁郝凤进关一夫
- 关键词：细胞增殖细胞凋亡细胞周期阻滞
- 原癌基因MET启动子的G-四链体结构被引量：2
- 2016年
- 目的解析原癌基因MET启动子中的G-四链体结构,并初步探索其功能。方法采用圆二色光谱、紫外吸收光谱、非变性凝胶电泳和PCR Stop实验分析MET启动子富含G的Pu23WT序列的G-四链体拓扑结构特征,并分析该结构的功能。结果 MET启动子的Pu23WT序列形成了分子内平行型G-四链体结构,该结构能够阻滞聚合酶链反应。结论原癌基因MET启动子形成的分子内G-四链体结构在细胞内K^+条件下可能负性调控基因表达。
- 阎敬关一夫
- 关键词：基因表达调控
