国家自然科学基金(81172172)
- 作品数：13 被引量：36H指数：3
- 相关作者：王保龙罗朋黄琼应美爱魏静更多>>
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- 自体DC-CIK细胞治疗晚期实体瘤患者的疗效分析被引量：2
- 2016年
- 目的研究树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)治疗对晚期肿瘤患者免疫系统影响及临床疗效。方法选取60例患者,分为两组,试验组行两周期DCCIK治疗,对照组未治疗,对比试验前后外周血免疫细胞比例及生活质量变化,观察疗效及不良反应。结果试验组总缓解率为0,疾病控制率约36.67%,外周血CD4+T细胞、自然杀伤细胞(NK)及CIK细胞比例较前升高(P<0.05),CD8+T细胞比例下降(P<0.05),患者生活质量较前改善,不良反应为低热、过敏等;对照组CD4+T细胞、NK细胞及CIK细胞比例较前下降(P<0.05),而CD8+T细胞比例升高(P<0.05),患者生活质量较前下降。两组B细胞比例均无明显变化。结论 DC-CIK可改善晚期实体瘤患者免疫功能和一般状况,在临床治疗中有一定疗效,且副作用小,可作为放化疗失败后的选择之一。
- 冉宝石王伟王刚孙玉蓓王保龙季楚舒
- 关键词：树突状细胞晚期实体瘤淋巴细胞亚群
- 肺腺癌细胞总RNA转染树突状细胞诱导特异性CTLs的体内抗肿瘤效应研究
- 2012年
- 目的探讨人肺腺癌细胞总RNA转染的树突状细胞(DCs)诱导抗原特异性的细胞毒T细胞(CTLs)对移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法 1)从外周血单个核细胞(PBMCs)中诱导DCs,提取人肺癌细胞A549总RNA,用于电转染DCs,转染后的DCs与自体T细胞混合培养,诱导抗原特异性的CTLs;2)实验分为转染RNA的DCs组、转染PBS的DCs组和未转染DCs组,流式细胞术(FCM)鉴定T细胞表型,3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力;3)建立肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型,过继回输CTLs,比较肿瘤体积,计算抑瘤率,免疫组化法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2、COX-2和VEGF的表达,并用全自动图像分析系统分析其平均光密度值(MOD)。结果 1)转染RNA的DCs和自体T细胞共育诱导的CTLs的CD8+T细胞大幅度上调,表达率(79.29±2.18)%明显高于转染PBS的DCs组CD8+T细胞(26.10±1.76)%和未转染DCs组CD8+T细胞(25.58±2.73)%(P<0.05);2)转染RNA的DCs显著刺激了自体T细胞增殖,3H-TdR渗入所得的cpm值:阳性对照组为17 105±130,转染RNA的DCs组为7 759±493,转染PBS的DCs组为2 611±161,未转染DCs组为2 248±332(P<0.05);3)成功建立肺癌裸鼠移植瘤模型,实验结束时,转染RNA组裸鼠荷瘤体积(540±99)mm3明显小于转染PBS组(1 572±147)mm3和未转染组(2 043±395)mm3(P<0.05);4)转染RNA组和转染PBS组的抑瘤率分别为68.53%和8.62%;5)转染RNA的DCs诱导的CTLs能显著上调Bax的表达(转染RNA组MOD值为335±105),显著下调Bcl-2、COX-2和VEGF的表达(转染RNA组MOD值分别为146±47、122±33和128±58)。结论人肺腺癌细胞总RNA转染DCs诱导的抗原特异性CTLs对肺腺癌裸鼠移植瘤的生长产生抑制作用。
- 蔡秋妍王保龙金娟陈家萍叶书来应美爱完晓菊魏静
- 关键词：树突状细胞细胞毒T淋巴细胞转染抗肿瘤效应
- 改良的混合细胞因子在诱导树突状细胞中的作用研究被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨"改良"的混合细胞因子(cytokine cocktail)在诱导树突状细胞(DC)成熟和提高其迁移能力中的作用。方法:采用密度梯度离心法从人外周血干细胞(PBSC)中分离单个核细胞(PBMNC),以GM-CSF和IL-4体外诱导成未成熟DC(imDC),用电穿孔法把A549的总RNA转染入imDC。分别用"金标准"混合细胞因子和"改良"的混合细胞因子刺激DC成熟。用流式细胞术检测各组DC表面标志(CD11c、HLA-DR、CD80、CD83和CD86)和趋化因子受体(CCR5、CCR7和CXCR4)的表达;RT-PCR检测各组DC趋化因子受体(CCR2、CCR5、CCR7、CXCR3和CXCR4)和趋化因子(CCL2、CCL3、CCL5、CCL19、CCL21、CXCL10和CXCL12)mRNA的表达水平。结果:与"金标准"混合细胞因子相比,"改良"的混合细胞因子DC较高水平表达其表面标志(CD11c、HLADR、CD80、CD83和CD86)、趋化因子受体(CXCR4)和趋化因子(CCL2,CCL3、CCL5、CCL19、CCL21、CXCL10和CXCL12)。结论:与"金标准"混合细胞因子诱导相比,"改良"的混合细胞因子诱导能更好地诱导DC的成熟并提高其迁移能力。
- 许伟王保龙黄琼周志风罗鹏
- 关键词：树突状细胞趋化因子受体趋化因子
- 非小细胞肺癌人乳头瘤病毒感染与EGFR基因突变的相关性被引量：3
- 2014年
- 目的 ：研究非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者感染人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的情况,并探讨NSCLC患者感染HPV与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变间的相关性。方法 ：收集98例临床确诊为NSCLC的石蜡组织标本;采用Luminex液相芯片技术对所有标本进行HPV基因的分型,应用突变特异性扩增系统（amplification refractory mutation system,ARMS）检测EGFR基因18~21号外显子突变的情况。结果：98例NSCLC患者中发生HPV感染为25.5%（25/98）,其中高危型的为23例,分别是HPV-16、-18、-33和-58亚型;HPV感染在不吸烟者（P=0.036）和淋巴结转移者（P=0.036）中的发生率较高。98例NSCLC患者中EGFR基因突变的检出率为38.8%（38/98）,在女性（P〈0.001）、不吸烟（P=0.001）、肺腺癌（P=0.001）和临床分期Ⅰ~Ⅱ期（P=0.024）患者中发生率较高。EGFR基因突变的状态与HPV感染显著相关,差异有统计学意义（P=0.012）;多因素回归分析结果显示,发生EGFR基因突变的NSCLC患者中HPV感染率较高[危险因素比值（odds ratio,OR）=5.956]。结论 ：HPV感染在中国的NSCLC患者中普遍存在,NSCLC中HPV感染与EGFR基因突变存在相关性。
- 李明邓芳钱立庭张扬孙永梅王保龙
- 关键词：乳头状瘤病毒受体表皮生长因子
- Toll样受体信号通路在调控树突状细胞成熟中的作用研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨TLR信号通路在调控树突状细胞(DC)熟过程中的作用。方法用密度梯度离心法从人外周富集血中分离单个核细胞(PBMC),以GM-CSF和IL-4体外诱导成未成熟DC(imDC),用电穿孔法把A549的总RNA转染入imDC,分别用传统细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2)和改良细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、polyⅠ∶C、CpG ODN)刺激DC的成熟。实验分为4组,对照组:GM-CSF、IL-4;传统组:传统细胞因子鸡尾酒;改良1组:IL-1β、IL-6、TNF-α、polyⅠ∶C、CpG ODN);改良2组:IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、polyⅠ∶C、CpG ODN。用RTPCR法检测RNA的转染效率,流式细胞术检测DC和DC致敏T细胞的表面标志,ELISA法检测IL-12的分泌水平,MTT法检测T细胞的增殖。结果 1)RT-PCR检测:电穿孔法能使A549的总RNA成功转入DC,并使DC表达组织多肽特异性抗原(TPS)、癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)等肿瘤抗原。2)流式检测:CD83各组表达率分别为(15.17±1.61)%、(64.33±7.58)%、(60.26±4.18)%和(82.89±3.06)%,CD1a表达率分别为(25.74±6.06)%、(69.37±8.16)%、(61.66±5.82)%和(86.07±5.63)%(P<0.05),各组CD8+T细胞比例分别为(36.43±3.15)%、(61.91±2.33)%、(54.81±2.55)%和(66.78±2.74)%(P<0.05)。3)各组IL-12的分泌水平分别为(55.86±14.07)、(1 243.49±57.57)、(744±49.51)和(2 385±128.98)pg/mL(P<0.05)。4)各组刺激指数分别为11.85±2.61、54.14±3.81、47.57±3.14和64.43±5.88,阳性对照组为135.29±5.06(P<0.05)。结论TLR配体polyⅠ∶C和CpG ODN可以促进DC的分化成熟。
- 周志风王保龙魏静蔡秋妍潘健陈家萍应美爱沈佐君李庆黄琼罗朋
- 关键词：电转染CPGODN
- 长链非编码RNA DGUOK-AS1对肺鳞癌增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2021年
- 目的研究长链非编码RNA(lncRNA)DGUOK-AS1对肺鳞癌增殖和凋亡的影响。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库进行筛选,结果显示lncRNA DGUOK-AS1在肿瘤组织和正常组织中的表达量存在差异;利用siRNA干扰技术降低肺鳞癌细胞株NCI-H520和SK-MES-1中DGUOK-AS1的表达,CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,使用Western blot检测细胞增殖、凋亡以及Wnt/β-Cantenin通路相关蛋白的表达。结果与人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)相比,DGUOK-AS1在肺鳞癌NCI-H520和SK-MES-1细胞中的表达升高(P<0.001);CCK-8实验结果显示,在NCI-H520和SK-MES-1细胞中,与对照组相比,干扰DGUOK-AS1可降低细胞的增殖能力(P<0.01);流式细胞术凋亡检测结果显示,在NCI-H520和SK-MES-1细胞中,与对照组相比,干扰DGUOK-AS1可促进细胞凋亡(P<0.01);Western blot结果显示,降低DGUOK-AS1的表达可降低细胞中PCNA、Bcl-2、β-cantenin、c-myc、cyclin D1蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达;RNA质核分离实验表明,DGUOK-AS1主要定位于细胞质。结论lncRNA DGUOK-AS1在肺鳞癌细胞中表达升高,高表达的DGUOK-AS1可能通过影响Wnt/β-Cantenin通路进而促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,DGUOK-AS1可能成为肺鳞癌治疗的重要分子靶标。
- 曹艳红王保龙
- 关键词：长链非编码RNA肺鳞癌
- 基于PDTX模型研究原发性肺癌顺铂耐药与ERCC1 IGFBP5表达水平的关系被引量：1
- 2015年
- 目的:构建PDTX(patient-derived tumor xenografts)肺癌模型,探索ERCC1、IGFBP5的表达水平与原发性肺癌顺铂耐药的关系。方法:取新鲜切除的84例肺癌组织移植于裸鼠(BALB/c)的皮下,构建PDTX模型,分析一代成瘤率与临床病理参数关系。三代移植瘤接受顺铂化疗,采用免疫组织化学方法检测敏感组和耐药组ERCC1、IGFBP5的表达情况。结果:移植瘤一代成瘤率32.14%(27/84),二代成瘤率88.89%(24/27),三代成瘤率95.83%(23/24),能否一代成瘤与肿瘤的大小、分化、分级、病理类型相关;此模型移植瘤在传代中能够保持亲代肿瘤的结构特征。ERCC1在耐药组表达高于敏感组,而IGFBP5在耐药组表达低于敏感组。结论:构建了肺癌组织块移植瘤模型,其能够保持亲代癌种的结构特征,是研究肺癌发生和探索肿瘤耐药机制的理想模型。原发性肺癌顺铂耐药性与ERCC1、IGFBP5的表达水平相关。
- 展丙香程龙强罗朋章菊王保龙
- 关键词：肺癌ERCC1顺铂耐药
- 分泌蛋白质组学在肿瘤标志物研究中的进展被引量：2
- 2013年
- 肿瘤细胞代谢过程中能够分泌蛋白质,分泌蛋白质组学已成为肿瘤标志物筛选的重要手段。分泌蛋白在肿瘤的早期诊断、进展监测、寻找潜在的肿瘤药物靶点中发挥着重要作用。本文就分泌蛋白质组学相关技术及其在临床中的应用进展做一综述。
- 李明邓芳王保龙
- 关键词：分泌蛋白质蛋白质组学肿瘤标志物
- 不同化疗药物分别与奥沙利铂联用对胃癌术后复发转移患者生存质量及血清相关肿瘤指标的影响被引量：15
- 2017年
- 目的研究卡培他滨和替吉奥分别与奥沙利铂联用对胃癌术后复发转移患者生存质量及血清相关肿瘤指标的影响。方法选择2013年1月至2015年12月在安徽省铜陵市人民医院接受治疗的胃癌术后复发转移患者106例。用随机数字表法分为对照组和观察组,每组各53例,对照组患者给予替吉奥联合奥沙利铂治疗,观察组患者给予卡培他滨联合奥沙利铂治疗。比较两组患者的临床疗效、生活质量、血清相关肿瘤指标和不良反应。结果对照组患者的有效率为64.15%,观察组患者的有效率为69.81%,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组患者生活质量改善率为73.58%,稳定率为18.87%,下降率为26.42%,总改善率为73.58%,观察组分别为49.06%、20.75%、30.19%和69.81%,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组患者的糖类抗原(CA)50、CA125、CA199及癌胚抗原(CEA)水平较治疗前均明显下降(P<0.05),但是两组患者的血清相关肿瘤指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者常见的不良反应包括血红蛋白下降、白细胞下降、血小板减少和恶心呕吐,两组患者均可耐受,差异无统计学意义(P>0.05)。结论卡培他滨或替吉奥与奥沙利铂联用治疗胃癌术后复发转移的疗效相当,患者的生活质量及血清相关肿瘤指标改善情况相当,不良反应均可耐受。
- 王怡王怡顾康生
- 关键词：卡培他滨奥沙利铂
- 人γhG—CSF动员的外周血采集物来源的树突状细胞成熟诱导的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨优化人γhG-CSF动员的外周血采集物来源的树突状细胞（DC）成熟诱导条件。方法利用密度梯度离心法从重组人粒细胞集落刺激因子（吖hG-CSF）动员的外周血采集物分离出单个核细胞，以重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和重组人白细胞介素-4（IL4）体外诱导成不成熟树突状细胞（imDC），分别采用传统细胞因子鸡尾酒（IL-1β、IL-6、TNF—α、PGE2）和改良细胞因子鸡尾酒（IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI：C、CpGODN）刺激成熟。3d后收获成熟DC，观察细胞形态、流式细胞仪检测DC的内吞能力通过异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FITC—Dextran）、检测DC表面CD83、CD1a、CD80、HLA—DR、CD86和CCR-7，酶联免疫吸附法（ELISA）检测其IL一12的分泌，M1Tr法检测其刺激淋巴细胞增殖活性。结果两种方法均能诱导DC成熟，以改良细胞因子鸡尾酒效果更佳，FITC—Dextran的内吞能力明显下降；CD83、CD1a的表达率分别是84．44％、87．94％（P〈0．05）；IL-12分泌量明显增高，成熟DC能有效的刺激T淋巴细胞增殖。结论改良细胞因子鸡尾酒法可能是诱导DC成熟的最佳方法。
- 魏静蔡秋妍陈家萍潘健应美爱完晓菊周志风王保龙
- 关键词：树突状细胞
