广东省医学科学技术研究基金(A2008548)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：张白杜万根平顾晓琼赵明光伍时冠更多>>
- 相关机构：广州市妇女儿童医疗中心广州市儿童医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙种球蛋白及甲强龙抑制川崎病患者PBMC释放TNF-α的作用被引量：3
- 2010年
- 目的探讨丙种球蛋白及甲强龙抑制川崎病(KD)患者外周血单个核细胞(PBMC)释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的作用。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离22例KD患者1、1例发热患者、15例正常人抗凝血的PBMC,用乙酰肉豆蔻佛波酯(PMA)刺激,加入丙种球蛋白和或甲强龙,分空白组、PMA组、PMA+丙种球蛋白组、PMA+甲强龙组、PMA+丙种球蛋白+甲强龙组5组进行PBMC培养48 h,收集上清液,ELISA法测定上清液中TNF-α含量。结果 KD组TNF-α含量均高于发热对照组和正常对照组(P<0.05),差异有统计学意义;KD组中,PMA+丙种球蛋白组、PMA+甲强龙组、PMA+丙种球蛋白球+甲强龙组与PMA组比较(P<0.05),差异有统计学意义;KD组中,冠脉扩张组TNF-α含量明显高于冠脉正常组(P<0.05),差异有统计学意义。结论丙种球蛋白及甲强龙有效抑制KD患者PBMC释放TNF-α,抑制TNF-α释放可能是丙种球蛋白、甲强龙治疗川崎病的作用机制之一。
- 顾晓琼万根平伍时冠赵明光张白杜
- 关键词：丙种球蛋白甲强龙川崎病外周血单个核细胞肿瘤坏死因子-Α
- 小干扰RNA对川崎病血清诱导血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的观察川崎病急性期血清对血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响以及MMP-9小干扰RNA（siRNA）对上述过程的调节作用。方法构建MMP-9 siRNA质粒，脂质法转染血管内皮细胞（ECV-304）。ECV-304细胞培养分为川崎病血清＋siRNA阴性对照组、正常血清组、川崎病血清＋MMP-9 siRNA1组、川崎病血清＋MMP-9 siRNA2组、川崎病血清＋人血丙种球蛋白组、川崎病血清组。应用逆转录聚合酶链式反应检测MMP-9 mRNA的表达，免疫印迹法检测MMP-9蛋白的表达。结果川崎病血清组和川崎病血清＋siRNA阴性对照组的MMP-9mRNA、MMP-9蛋白表达分别是2．49±0．03、1．20±0．04和2．45±0．03、1．15±0．03，均较正常血清组（1．21±0．03、0．52±0．03）明显增高（均P〈0．01）。川崎病血清＋MMP-9siRNA1组（0．78±0．03、0．31±0．02）、川崎病血清＋MMP-9 siRNA2组（0．74±0．04、0．28±0．04）及川崎病血清＋人血丙种球蛋白组（1．58±0．03、0．88±0．04）的MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白表达与川崎病血清组及川崎病血清＋siRNA阴性对照组比较均明显减少（均P〈0．01）。结论川崎病急性期血清能诱导血管内皮细胞的MMP-9表达增高，可能参与川崎病冠状动脉损伤的发生。构建的MMP-9 siRNA能显著抑制MMP-9 mRNA和蛋白的表达。
- 陈兆鸿万根平顾晓琼
- 关键词：小分子干扰黏膜皮肤淋巴结综合征基质金属蛋白酶9
- 基质金属蛋白酶-9靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测
- 2009年
- 目的:构建针对人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对川崎病(KD)血清诱导的血管内皮细胞MMP-9高表达的干扰效果。方法:依据siRNA设计原则设计两对MMP-9基因的特异性干扰序列,体外分别合成两端含BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后与pSilencer3.1-HI neo线性质粒连接,转化DH5α感受态菌株,筛选阳性克隆,提取质粒进行双酶切及琼脂糖电泳鉴定。阳性重组质粒测序。将构建的两个MMP-9 siRNA质粒以KD血清作为诱导因子,用脂质法转染内皮细胞ECV-304,应用RT-PCR法测定各实验组血管内皮细胞MMP-9mRNA表达、Western blot检测各组MMP-9蛋白表达情况,对所构建的MMP-9 siRNA质粒进行效应检测。结果:DNA测序证实合成的并被克隆入pSilencer3.1-HI neo表达质粒siRNA插入序列与设计完全符合。KD血清组MMP-9蛋白及mRNA表达水平均较正常血清组明显升高(P<0.05);而所构建的两个MMP-9 siRNA及人血丙种球蛋白均能显著抑制KD血清的上述诱导作用(P<0.05)。结论:成功构建的两个MMP-9 siRNA比人血丙种球蛋白更能高效、特异地抑制MMP-9的表达,为进一步研究MMP-9基因对KD冠状动脉病变的影响及其临床应用奠定了基础。
- 顾晓琼万根平陈兆鸿
- 关键词：基质金属蛋白酶-9RNA干扰靶向冠状动脉扩张川崎病动脉瘤
