山东省教育厅科技计划(J06L77)
- 作品数：3 被引量：9H指数：1
- 相关作者：王清路李俏俏张玉军徐寿增张锐更多>>
- 相关机构：中国农业科学院生物技术研究所山东万杰医学院生物化学教研室更多>>
- 发文基金：山东省教育厅科技计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2010年
- 采用加长引物5'端的方法克隆了hGM-CSF的编码基因,克隆过程中对该基因的局部做了密码子优化。然后克隆进毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,电击转化毕赤酵母。PCR、SDS-PAGE与Western blotting证实hGM-CSF已整合进酵母基因组,摇瓶水平粗蛋白表达量达389mg/L,动物实验证实蛋白产物活性正常,SDS-PAGE与N-糖苷酶F去糖基化分析发现hGM-CSF被糖基化。
- 李俏俏王清路张玉军张锐徐寿增
- 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子毕赤酵母糖基化
- 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子研究进展被引量：7
- 2007年
- hGM-CSF是一种重要的具有免疫调节功能的糖蛋白,在造血调控和免疫调节方面发挥重要作用,具有重要的临床应用价值。总结近些年来各国对hGM-CSF的研究情况,首先对hGM-CSF的基因结构、蛋白分子结构、生物学活性等方面做了详细的介绍;接下来,又从基因转录水平和转录后水平两个方面对hGM-CSF的表达调控做了介绍;最后,对比了利用基因工程技术将hGM-CSF基因在不同生物中的表达情况,详细讲解了优缺点。
- 王清路李俏俏张玉军张锐徐寿增
- 透明颤菌血红蛋白基因(vgb)与monellin基因在毕赤酵母中的联合表达被引量：1
- 2008年
- 根据酵母偏爱密码子合成了monellin甜蛋白基因和vgb基因,然后构建了2种不同方式表达的载体,胞内表达的pPIC3.5KV和分泌表达的pPIC9KM。电击转化得到重组子GS115/pPIC9KM和GS115/pPIC9KM/pPIC3.5KV,通过PCR、SDS-PAGE及western blotting检测发现monellin甜蛋白基因和vgb基因成功整合进毕赤酵母基因组并成功表达,通过品尝和CO-差示光谱法证实其表达产物具有活性,用southern blotting对6株高产菌株进行拷贝数分析并未发现拷贝数与分泌蛋白产量之间存在明显的正相关。对比发现,含vgb基因菌株比未含菌株高甜度monellin的产量最高提高了20%,菌体密度平均提高了9%。
- 王清路张玉军窦烨李俏俏周彩霞
- 关键词：透明颤菌血红蛋白基因甜蛋白基因毕赤酵母拷贝数外源基因
