湖北省自然科学基金(2004ABA133)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- 应用噬菌体随机十二肽库筛选猪传染性胸膜肺炎菌体抗原模拟表位被引量：1
- 2006年
- 利用猪传染性胸膜肺炎灭活菌苗免疫日本大耳兔得到猪传染性胸膜肺炎抗血清,将血清用饱和硫酸铵粗提IgG后,经DEAE-sephadex-A50低压层析系统纯化,以此得到IgG作为配基包被酶标板,对噬菌体随机十二肽库进行3轮不同条件的富集筛选,通过改变筛选条件,噬菌体的回收率从5.76×10-5增加到了1.69×10-2,P/N值逐步提高;随机挑取10个噬菌斑进行扩增,用ELISA检测其免疫活性,结果有6个阳性克隆与纯化的IgG有较强的特异性结合能力;对筛选到的6个阳性克隆提取ssDNA进行测序,并分析其氨基酸序列,其中5个克隆所递呈的序列一致,用Blastp软件进行分析,2种类型的氨基酸序列之间无同源性,且未发现同源性50%以上的序列,提示该短肽可能模拟了猪传染性胸膜肺炎菌体的特异的抗原表位。
- 赵娜王安华何玉龙聂芬袁芳艳龙良启刘平
- 关键词：噬菌体随机肽库模拟表位猪胸膜肺炎放线杆菌
- 猪O型口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗原模拟表位的筛选被引量：5
- 2006年
- 口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC与FMDV复制有关,感染FMDV的动物产生的NSP 3ABC抗体可在体内存留较长时间,是鉴别诊断动物接种疫苗与自然感染口蹄疫的可靠指标。本文从猪FMDV-NSP3ABC阳性抗血清中分离和纯化IgG,以此为固相筛选分子,对噬菌体随机十二肽库进行4轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选后,随机挑取20个噬菌斑进行扩增,用ELISA方法分别检测扩增后的噬菌体抗原性,其中有8个噬菌体克隆与纯化的IgG有较强的特异性结合能力;对得到的阳性克隆提取ssDNA进行测序,分析所递呈的氨基酸序列,其中的7个噬菌体展示肽的氨基酸片段具有较高的保守性;进一步分别以8个阳性噬菌体克隆为固相捕获分子,对22份疑似FMD病猪血清进行检测,结果显示,有5个噬菌体克隆检测结果与试剂盒检测有较高的符合率。本研究为FMDV-NSP 3ABC抗原表位结构进一步研究和建立猪自然感染FMDV快速鉴别诊断新方法奠定了基础。
- 何玉龙伍晓雄赵娜袁芳艳聂芬龙良启
- 关键词：FMDVNSP模拟表位噬菌体随机肽库
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ抗原模拟表位的筛选与鉴定被引量：1
- 2006年
- 将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ(APP ApxⅠ)抗血清用饱和硫酸铵分级粗提后,再经DEAE-sepha-dex-A50低压层析系统纯化得到IgG,用此IgG作为配基对噬菌体随机十二肽库进行4轮不同条件的富集筛选。通过改变筛选条件,噬菌体的回收率从1.44×10-6增加到了8.9×10-5,P/N值逐步提高,阳性噬菌体得到了富集。ELISA结果表明,随机挑取的10个噬菌体克隆中,有5个与纯化的IgG有较强的特异性结合能力。对筛选到的5个阳性克隆提取ssDNA进行测序,并对其递呈的氨基酸序列进行分析。结果有3个克隆的4个连续的氨基酸序列(RVDV)相同,并与APP ApxⅠ蛋白的原始序列具有较高的同源性。
- 何玉龙赵娜伍晓雄王安华龙良启刘平
- 关键词：噬菌体随机肽库模拟表位猪胸膜肺炎放线杆菌
