广东省自然科学基金(06020831)
- 作品数：12 被引量：36H指数：4
- 相关作者：余细勇林秋雄单志新符永恒邓春玉更多>>
- 相关机构：广东省人民医院广东省医学科学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 微环境预处理的骨髓间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死被引量：2
- 2009年
- 目的观察骨髓间充质干细胞（BMSC）或经预处理分化的BMSC（induced BMSC，iBMSC）移植能否改善心肌梗死大鼠的心功能。方法雄性sD大鼠32只（250—300g），分为假手术组、磷酸缓冲液（PBS）注射组、BMSC移植组和iBMSC移植组共4组，每组8只。将分离的BMSC与心肌细胞（微环境）共培养2周进行预分化，大鼠心肌梗死模型建立1周后，将BMSC或iBMSC细胞悬液注入梗死区的边缘位置。分别于细胞移植后的第1、2和4周，超声心动图检测各组大鼠心脏的左心室射血分数（LVEF），左心室舒张末期内径（LVIDd），左心室收缩末期内径（LVIDs）及短轴缩短率（FS）。移植后第4周进行组织学观察，心脏组织石蜡包埋切片后采用免疫荧光技术检测移植细胞的示踪标记物及心肌标志蛋白的表达情况。结果iBMSC组LVEF在第4周时是（77．3±2．6）％，与假手术组（81．8±3．6）％比较差异无统计学意义（P〉0．05），而PBS组及BMSC组的LVEF值均低于假手术组（P均〈0．05）。PBS组FS移植前后没明显变化，iBMSC组FS从移植前的（24．1±3．9）％上升到第4周的（45．1±3．1）％。M型超声心电图显示iBMSC治疗组左心室收缩能力较细胞移植前明显改善。免疫荧光分析显示，SPIO标记的移植细胞在体内表达心肌细胞标志蛋白α-辅肌动蛋白和缝隙连接蛋白43。结论经过微环境预处理的BMSC较未处理的干细胞改善心功能效果更好。这一研究为干细胞的改造与细胞移植修复心肌梗死提供了强有力的证据。
- 李晓红符永恒刘再毅张光峰董光富林秋雄余细勇
- 关键词：心肌梗死间质干细胞移植细胞分化
- Lox-1基因501G>C和3′UTR*188C>T多态性与急性心肌梗死发病的相关性被引量：4
- 2007年
- 目的检测Lox-1501G>C和3′UTR*188C>T多态性在中国汉族人群中的分布及其与急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)发病的相关性。方法利用荧光染料SYBRGreenⅠ标记定量PCR产物,通过PCR生长曲线和融解曲线分析结果进行多态位点的基因分型。分别检测汉族202名AMI患者及161名健康人群Lox-1501G>C和3′UTR*188C>T多态性。随机选取30份经荧光定量PCR分型的标本进行DNA测序鉴定。结果AMI患者和健康人群的Lox-1501G等位基因频率分别为0.834和0.798,Lox-1501C等位基因频率分别为0.166和0.202,Lox-1501G>C基因型频率在AMI组和对照组间差异无统计学意义[OR0.687,95%CI(0.226～2.093);P=0.507]。AMI患者和健康人群的Lox-13′UTR*188C等位基因频率分别为0.681和0.674,Lox-13′UTR*188T等位基因频率分别为0.319和0.326,Lox-13′UTR*188C>T基因型频率在AMI组和对照组亦无统计学意义[OR0.947,95%CI(0.623～1.439);P=0.80]。结论中国汉族Lox-1基因501G>C和3′UTR*188C>T多态性与AMI发病无关。
- 单志新符永恒周志凌谭虹虹林秋雄邝素娟余细勇
- 关键词：急性心肌梗死凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1荧光定量聚合酶链反应
- 卡维地洛改善急性心梗后大鼠心功能的量效关系研究
- 目的利用不同剂量卡维地洛治疗急性心肌梗死(AMI)后大鼠,检测与探讨其对左室心功能作用的量效关系。方法以手术结扎法结扎大鼠左冠脉前降支(LAD),构建AMI模型共56只(设治疗组:K1.5、K2.0、K3.0、K4.0、...
- 符永恒杨敏谭卫萍李晓红陈小贤刘晓颖单志新林秋雄郑猛吴岳恒余细勇
- 文献传递
- 利用酵母双杂交系统鉴定MIF与CD74胞外片段间的相互作用被引量：2
- 2009年
- 目的利用酵母双杂交系统鉴定巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与Ⅱ型穿膜蛋白CD74胞外片段间可能的相互作用区域。方法利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的人全长MIF、MIF50-65、MIF1-50/65-115的重组诱饵质粒,以pGADT7为载体的人CD7473-232、CD7473-109、CD74109-149、CD74149-232的重组激活域(AD)质粒。用PEG/LiAC法将上述重组诱饵质粒分别与重组AD质粒两两共转化感受态酵母菌AH109,分别观察在SD/-Trp-Leu、含X-α-gal的SD/-Trp-Leu-Ade-His培养基上生长情况。结果限制性内切酶酶切和DNA测序证实所构建的重组质粒全部正确。3种重组诱饵质粒转化的酵母菌AH109均可在SD/-trp上生长,4种重组AD质粒转化的酵母菌AH109均可在SD/-leu上生长,而且上述转化的酵母菌AH109均无自身转录激活活性。只有MIF、MIF50-65、MIF1-50/65-115与CD7473-232表达质粒共转化的酵母菌AH109可在SD/-Trp-Leu-Ade-His培养基上生长,能激活MEL1报告基因,使X-α-gal变蓝。结论MIF能以功能域MIF50-65非依赖性方式与完整的CD74胞外片段相互结合,进行细胞信号转导。
- 单志新林秋雄邓春玉谭虹虹邝素娟肖定璋朱杰宁符永恒余细勇
- 关键词：酵母双杂交巨噬细胞移动抑制因子CD74蛋白质相互作用
- 利用质粒介导的miRNA-1-2抑制H9C2中Hand2蛋白的表达被引量：4
- 2008年
- 目的构建人miRNA-1-2的真核表达载体,并检测其对大鼠成肌细胞H9C2中Hand2蛋白表达的抑制作用。方法用PCR法体外合成miRNA-1-2前体序列的DNA模板,并定向插入到发夹RNA(hairpin RNA)表达载体pSilencer-4.1-neo上。用脂质体法将构建正确的重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2瞬时转染H9C2细胞,检测miRNA-1-2前体转录本(pre-miRNA-1-2)和miRNA-1靶基因Hand2(heart and neural crest derivatives expressed transcript 2)的表达。结果DNA测序表明重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2构建正确。pSilencer-4.1/miRNA-1-2转染的H9C2细胞中,pre-miRNA-1-2被有效表达,Hand2 mRNA表达无变化,Hand2蛋白表达被抑制。结论成功构建了miRNA-1-2的真核表达载体,由表达载体介导的miRNA-1能有效抑制Hand2蛋白的表达。
- 单志新林秋雄邓春玉周志凌张绪超符永恒余细勇
- 卡维地洛对急性心肌梗死大鼠心功能的保护作用被引量：6
- 2009年
- 目的:探讨卡维地洛对急性心肌梗死(AMI)后Sprague-Dawley大鼠心功能的保护作用。方法:用手术结扎左冠脉前降支法,制备50只大鼠AMI模型,随机分为生理盐水组[0.9%NaCl,2 mL/(kg·d)]、福辛普利治疗对照组[3.0mg/(kg·d)]、卡维地洛3治疗组[1.5、3.0、6.0mg/(kg·d)],连续给药4周;另设正常组和假结扎组。进行体重、心率、超声心动图和血浆生化等指标检测。结果:与生理盐水组比较,中、高剂量治疗组大鼠的心率明显降低(P<0.01);超声心动图示EF和FS、IVSd、IVSs均明显增加(P<0.01),LVIDd和LVIDs显著降低(P<0.05);离体心功能示CF、LVSP、LVDP和±dp/dtmax均增加,LVEDP则明显减小(P<0.01);血清中MDA明显降低,而NO、SOD、GSH-PX均增高(P<0.01)。结论:卡维地洛能很好地改善AMI后大鼠的心功能,抑制心室的重构作用。
- 符永恒杨敏单志新余细勇林秋雄费洪文刘晓颖谭卫萍朱杰宁谭虹虹郑猛郑卫东
- 关键词：心机梗塞卡维地洛心室重构超声心动图
- 人微小RNA-133a(miR-133a)重组腺病毒的构建和鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:构建人miR-133a重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)中的表达。方法:从人基因组DNA中扩增包含miR-133a的PCR产物,并定向插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将经pmeⅠ线性化的重组穿梭载体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒rAd-mir-133a。将rAd-mir-133a在人胚肾293细胞(HEK293)中包装并扩增出miR-133a的重组腺病毒。将重组腺病毒感染hMSCs,利用RT-PCR和实时定量PCR分别检测初级miR-133a和成熟miR-133a的表达。结果:限制性内切酶分析和DNA测序结果显示,重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-133a构建正确。在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-133a。rAd-miR-133a感染的hMSCs中初级miR-133a转录子和成熟miR-133a表达显著增强。结论:成功构建了人miR-133a重组腺病毒,并在hMSCs中高效表达出miR-133a,为进行miR-133a的功能研究创造条件。
- 张斌单志新林秋雄周志凌邓春玉郭爱林符永恒谭虹虹余细勇
- 关键词：微小RNA骨髓间质干细胞腺病毒
- AngⅡ通过AP-1调控内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达被引量：1
- 2010年
- 目的明确介导AngⅡ调控人内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子(migration inhibitory factor,MIF)表达的转录因子。方法构建长度依次递减的MIF基因5’调控区的荧光报告基因表达载体,并将其转化入人脐静脉内皮细胞EAhy926。利用双荧光基因报告系统检测AngⅡ诱导后MIF基因5’调控区不同区段的转录活性。通过突变转录活性高的MIF5’调控区序列,初步确定可能的转录因子结合序列。设计针对可能的转录因子的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建其表达载体,分别检测候选转录因子沉默的HEAY926中MIF的转录活性和表达水平。结果双荧光基因报告检测显示,AngⅡ调控MIF表达的高转录活性区段位于-507至-188之间。序列突变和荧光素酶活性分析显示,MIF基因5’调控区-350至-339间的AP-1结合序列决定了MIF基因的转录活性。AP-1沉默后的HEAY926中AngⅡ调控的MIF转录活性显著降低(P<0.05),MIFmRNA和蛋白的表达水平也显著降低(P<0.05)。结论AngⅡ通过转录因子AP-1调控内皮细胞中MIF的表达。
- 冯治宽单志新林秋雄朱杰宁麦丽萍谭虹虹邓春玉邝素娟余细勇
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子
- 利用前体microRNA设计的发夹RNA能提高基因沉默的效率
- 小干扰RNA（siRNA）和微小RNA（miRNA）都可以介导基因沉默过程。为了了解利用前体microRNA（pre- miRNA）茎环形式的RNA（发夹状RNA）来抑制靶基因表达的可能的应用前景,针对外源的绿色荧光蛋白...
- 单志新林秋雄邓春玉李晓红谭虹虹周志凌符永恒杨敏余细勇林曙光
- 关键词：MICRORNA发夹RNA基因沉默
- 文献传递
- 一种方便酶切鉴定的shRNA表达载体改建方法
- 2007年
- 目的建立一种用单限制性内切酶酶切来快速筛选重组小发夹RNA(shRNA)表达载体的方法。方法制备包含单一限制性内切酶ClaⅠ识别序列的双链DNA插入片段(ClaⅠ位点两侧碱基序列不互补),与BamHⅠ和HindⅢ线性化的shRNA表达载体pSilencer-4.1(不含ClaⅠ识别序列)构建载体pSilencer-4.1-ClaⅠ。用BamHⅠ和HindⅢ酶切pSilencer-4.1-ClaⅠ,将酶切产物与表达绿色荧光蛋白(GFP)shRNA的DNA模板(不含ClaⅠ识别序列)做连接反应,构建GFPshRNA表达质粒。提取阳性克隆质粒DNA,行ClaⅠ单酶切鉴定,对未被ClaⅠ线性化的质粒行DNA测序鉴定。结果DNA测序表明正确构建了shRNA表达载体pSilencer-4.1-ClaⅠ,以pSilencer-4.1-ClaⅠ为载体构建的GFPshRNA候选重组子中,不能被ClaⅠ线性化的均为GFPshRNA表达质粒。结论构建了可用于制备shRNA表达质粒的通用载体pSilencer-4.1-ClaⅠ,所引入的单一的ClaⅠ识别位点可以用来快速地筛选重组shRNA表达质粒。
- 单志新林秋雄符永恒邓春玉余细勇
- 关键词：绿色荧光蛋白小发夹RNA绿色荧光蛋白
