江苏省医学领军人才基金(LJ200623)
- 作品数：28 被引量：67H指数：5
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- 实时定量逆转录PCR检测慢性淋巴细胞白血病中脂蛋白酯酶mRNA的表达及临床意义
- 2009年
- 目的研究慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者脂蛋白酯酶（LPL）表达情况，探讨LPL在CLL预后中的意义。方法采用基于Taqman探针技术的实时定量逆转录PCR（qRT—PCR）方法检测62例CLL患者及10名健康对照者外周血标本中LPL的表达水平。对LPL表达水平与免疫球蛋白重链可变区（IgVH）基因突变、ZAP-70蛋白和CD38表达等预后因素进行相关性分析。采用ROC曲线确定LPL表达的最佳分界值，计算其对IgVH突变情况的阳性及阴性预测值。结果qRT—PCR标准曲线的R^2均≥0．990，敏感度可以检测到10^2拷贝／μg RNA，批内差及批间差变异系数（CV）均小于5％。62例CLL患者LPL表达水平中位数为0．0060（0～0．7370）。在10名健康对照者中LPL均不表达或低表达，LPL中位表达水平为0（0—0．0004）。在经CD19磁珠分选后的3份CLL患者标本中，LPL相对表达量分别为0，0360、0．0750和0．1970，与分选前表达水平（分别为0．0240、0．0740和0．2250）相似。LPL表达水平与IgVH基因突变情况相关（r=0．45，P〈0．05），无突变患者的LPL中位表达水平为0．0060（0．0007—0．1100），明显高于突变患者的LPL中位表达水平[0．0020（0．0002～0．0270）]，差异有统计学意义（U=96．5，P〈0．05）；LPL表达水平与ZAP-70（r=0.38，P〈0．05）及CD38（r=0．43，P〈0．05）均显著相关。按照IgVH突变情况作为标准对LPL表达水平做ROC曲线分析，确定最佳分界值为0．0360，敏感度为66．7％，特异度为72．4％，对IgVH突变情况阳性预测值（无突变）为51．8％，阴性预测值（有突变）为83．3％。结论qRT-PCR方法检测LPL表达敏感可靠。LPL表达水平与CLL重要预后因素IgVH基因突变、ZAP-70、CD38密切相关，并可较准确地预测IgVH突变情况，在CLL的预后中具有重要价值。
- 沈秋丹徐卫顾卫军乔纯缪扣荣朱丹霞吴雨洁刘琼李建勇
- 关键词：脂蛋白脂酶逆转录聚合酶链反应
- 典型与不典型免疫表型慢性淋巴细胞白血病的预后相关因素分析被引量：2
- 2009年
- 目的探讨典型免疫表型慢性淋巴细胞白血病（CLL）与不典型CLL在临床特征、Binet分期、淋巴细胞绝对计数（ALC）、ZAP-70蛋白表达、CD38表达、IgVH突变和遗传学特性等预后因素上的差异。方法参照英国CLL临床指南诊断评分系统，77例患者中积分5分的有61例，为典型CLL，积分为4分或3分的有16例，为不典型CLL。采用多参数流式细胞术（FCM）对77例CLL患者的外周血或骨髓标本进行免疫表型检测，包括CD5、CD19、CD23、FMC7、sIg（κ和λ）、CD20、CD79b，并检测预后相关因素ZAP-70和CD38的表达水平；采用多重RT—PCR检测IgVH基因突变状态；组合探针荧光原位杂交（FISH）技术检测分子遗传学异常。结果典型CLL与不典型CLL两组患者在性别、年龄、IgVH基因突变率、ZAP70表达上的差异均无统计学意义（P值分别为0．398、0．189、0．268和0．131）；不典型CLL组中ALC≥50×10^9／L、Binet B＋C期和CD38阳性率≥30％所占比例（分别为43．8％、87．5％、43．8％）明显高于典型CLL组（分别为16．4％、36．1％、16．4％）（P=0．026、P〈0．01和P=0．026）；典型与不典型CLL组的分子遗传学结果也有显著差异，典型CLL组中单独伴有del（13q14）异常的比例（26．8％）大于不典型组（7．6％），而del（17p13）或del（11q22）异常的比例（12．2％）小于不典型组（46．2％）（P=0．022）。结论典型免疫表型CLL与不典型CLL在Binet分期、ALC、CD38表达和遗传学特性上有显著差异。
- 曹鑫徐卫吴雨洁乔纯刘琼范磊缪扣荣李建勇
- 关键词：免疫表型预后
- 实时定量逆转录PCR检测慢性淋巴细胞白血病puma基因mRNA的表达及其临床意义被引量：5
- 2010年
- Puma为一种凋亡调控因子。本研究探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者p53上调puma mRNA的表达情况,并探索其在评估CLL预后中的意义。采用基于SYBR GreenI荧光染料法的实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)方法检测100例CLL患者及11名健康对照者外周血标本中puma基因的表达,以β-actin为内参照,用2(-△Ct)方法计算puma的相对定量值,组间分析采用秩和检验。结果显示,qRT-PCR标准曲线的R2均≥0.990,批内差及批间差变异系数(CV)均小于5%,灵敏度可达102copies/μgRNA。100例CLL患者puma基因表达水平中位数为1.038×10-3(4.106×10-4-2.806×10-3);11名健康对照者puma表达水平中位数为1.220×10-3(7.233×10-4-1.405×10-3),二者无显著性差异(U=544.5,p=0.957)。临床分期较早(Binet分期A期)的患者puma表达水平明显高于临床分期较晚(Binet分期B期、C期)的患者(p<0.001);具有CD38表达阳性、ZAP-70蛋白表达阳性、血清乳酸脱氢酶水平增高、血清β2-微球蛋白水平增高的患者,其puma基因表达水平均明显低于无以上不良预后因素的患者,差异显著(p值分别为0.002,0.012,0.009和0.046);FISH检测显示存在12号染色体三体和14q32易位的患者puma表达水平明显低于无以上分子遗传学异常者,其差异显著(p值分别为0.003和0.045)。结论:qRT-PCR方法检测puma表达灵敏可靠,puma表达水平与CLL多种预后因素存在相关性,在评估CLL预后中具有重要价值。
- 朱海嘉徐卫曹鑫方成朱丹霞董华洁王冬梅乔纯缪扣荣刘澎李建勇
- 关键词：慢性淋巴细胞白血病PUMA基因实时定量RT-PCR
- 基因atm与慢性淋巴细胞白血病被引量：1
- 2008年
- 共济失调毛细血管扩张突变基因(atm)为肿瘤抑制基因,位于人类染色体的11q22-23,主要参与DNA损伤识别和修复,并在DNA双链断裂诱导的信号级联转导通路中起到枢纽作用。慢性淋巴细胞白血病(CLL)可出现高频率的atm基因杂合性缺失和核苷酸突变,并与其发病及侵袭性病程有关。本文将对atm基因的特点、作用机制及其在慢性淋巴细胞白血病中作用的研究进展作一综述。
- 朱丹霞徐卫李建勇
- 关键词：慢性淋巴细胞白血病ATM基因基因缺失基因突变
- B淋巴增殖性疾病的SOX11、cyclin D1、cyclin D2和cyclin D3的表达研究被引量：4
- 2011年
- 目的 探讨各B淋巴增殖性疾病（B-LPD）中SOX11、cyclin D1、cyclin D2和cyclin D3表达的差异和相关性,以及与慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者临床特征的关系.方法 采用实时定量逆转录PCR（qRT-PCR）技术检测154例B-LPD患者与12例健康对照SOX11、cyclin D1、cyclin D2和cyclin D3基因的表达水平;应用免疫组织化学技术对15例B-LPD患者组织标本进行SOX11蛋白核表达水平的检测.结果 套细胞淋巴瘤（MCL）患者SOX11表达水平较高,与CLL、弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）、毛细胞白血病（HCL）、脾边缘区淋巴瘤（SMZL）和健康对照的差异存在统计学意义（P1=0.002、P2=0.017、P3=0.015、P4=0.008、P5=0.008）;MCL患者cyclin D1的表达明显高于CLL、DLBCL、HCL、SMZL和健康对照（P1＜0.001、P2=0.008、P3=0.020、P4＜0.001、P5=0.005）;DLBCL患者的cyclin D1和cyclin D2表达高于SMZL患者（P1=0.049,P2=0.005）;SOX11的表达与cyclin D1、cyclin D2和cyclin D3呈显著正相关（r1=0.444,P1＜0.001;r2=0.279,P2＜0.001;r3=0.425,P3＜0.001）;15例患者标本SOX11核蛋白表达的检测结果显示,4例MCL中有3例为阳性,1例阴性;其余12例均为阴性,包括7例DLBCL、2例粘膜相关组织（MALT）淋巴瘤、2例SMZL.CLL患者中,ZAP70阳性患者SOX11的表达水平明显高于ZAP70阴性的患者（P=0.021）.结论 MCL患者SOX11和cyc1in D1 mRNA的表达水平较高,并特异性的表达SOX11核蛋白.
- 曹鑫范磊方成朱丹霞王冬梅董华洁刘玲王银花徐卫李建勇
- 关键词：MRNACYCLIND1CYCLIND2CYCLIN
- 磷酸二酯酶7B在慢性淋巴细胞白血病患者中的表达及预后意义
- 2011年
- 目的 为了研究磷酸二酯酶（PDE）7B在慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者中的表达及临床意义.方法 应用实时定量逆转录PCR（qRT-PCR）技术检测87例未治疗CLL患者和20例正常人中PDE7B的表达水平,并分析其与CLL临床预后指标的关系.结果 87例CLL患者PDE7B表达水平中位数为5.4×10^-4（0.2×10^-4～1.5×10-2）,明显高于正常人群0.5×10^-4（0.18×10^-4～1.7×10^-4）（P＜0.001）.PDE7B与年龄、Binet分期、免疫球蛋白重链基因（IgVH）突变、CD38表达及细胞遗传学明显相关,而与性别及ZAP-70表达无明显相关性.其中26例患者具有治疗指征并接受治疗,其PDE7B表达水平明显高于无治疗指征的患者（P=0.021）.结论 PDE7B基因在MCL中表达明显高于正常人群,并与不利的细胞遗传学、Binet B和C期、IgVH基因无突变、CD38阳性关系密切,可能成为CLL新的预后指标,具有重要的临床意义.
- 董华洁范磊方成朱丹霞王冬梅刘玲王银花徐卫李建勇
- 关键词：慢性淋巴细胞白血病实时定量PCR预后因素
- 实时定量PCR检测白血病相关miRNA方法的建立被引量：6
- 2010年
- 本研究建立实时定量PCR(RQ-PCR)技术检测白血病相关miRNA的方法,探讨此方法在定量检测miRNA中的应用价值。通过提取82例慢性淋巴细胞白血病(CLL)、70例急性白血病(AL)患者骨髓或外周血标本总RNA,以cDNA为模板进行10倍梯度系列稀释,分别作miRNA及内参U6RNA的标准曲线并计算扩增效率;运用ABI7300定量PCR仪进行定量检测;采用SYBR Green荧光染料法、以U6RNA作为内参照、循环阈值(Ct)比较法进行miRNA表达相对定量分析,以检测CLL患者miR-15a、miR-16-1、miR-29b、miR-181b及AL患者miR-128-1、miR-223、let-7b、miR-155、miR-181a的表达。方法学考核参数包括特异性、线性范围、精密度和重复性。结果表明:RQ-PCR检测miRNA仅需10-50ng总RNA样本,检测下限为0.05ng,miRNA及U6的Ct值均在15-30之间,10倍系列稀释法制作的标准曲线呈现良好的线性关系(R2>0.980),扩增效率均在0.9以上,溶解曲线均为单峰,PCR产物经琼脂糖电泳均显示较亮的目的条带,批内差和批间差分别小于4.8%和6.3%。结论:RQ-PCR技术检测白血病相关miRNA敏感、快速,高通量,节约成本,定量范围宽,极大的方便了对miRNA的定量研究。
- 朱丹霞缪扣荣朱远东朱华渊范磊刘澎徐卫李建勇
- 关键词：MIRNA白血病
- 氟达拉滨和环磷酰胺联合利妥昔单抗治疗慢性淋巴细胞白血病疗效分析被引量：12
- 2011年
- 目的 探讨氟达拉滨和环磷酰胺联合利妥昔单抗（FCR方案）治疗慢性淋巴细胞白血病（CLL）的效果.方法 采用FCR方案治疗21例CLL患者,其中10例为初治患者,11例为复治患者.FCR方案为氟达拉滨25 mg/m^2,第2～4天,静脉滴注;环磷酰胺250 mg/m^2,第2～4天,静脉滴注;利妥昔单抗375 mg/m^2,第1天,静脉滴注.每28 d为1个疗程.采用多参数流式细胞术（FCM）检测微量残留病（MRD）.同时对治疗前临床特点与完全缓解（CR）率行相关性分析.结果 11例（52.4%）患者获得CR,7例（33.3%）获得部分缓解,总有效率为85.7%;中位随访时间19（7～73）个月,总生存率为86.0%,无进展生存率为72.0%.单变量分析表明治疗前Binet分期为A＋B、免疫球蛋白重链可变区基因有突变或ZAP-70阳性细胞率≤20%与高CR率相关;6例患者化疗后MRD低于1%.FCR方案的不良反应主要表现为骨髓抑制和胃肠道反应.结论 FCR方案对CLL的治疗有确切疗效.
- 方成徐卫徐敏洪鸣朱丹霞朱华渊吴雨洁范磊乔纯庄芸缪扣荣刘澎李建勇
- 关键词：氟达拉滨环磷酰胺利妥昔单抗
- 脱氧胞苷激酶表达与慢性淋巴细胞白血病氟达拉滨耐药的相关性研究被引量：1
- 2010年
- 为了探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者白血病细胞内脱氧胞苷激酶(dCK)的基因表达水平与氟达拉滨(flud)耐药的相关性,采用实时定量PCR(RQ-PCR)方法检测30例CLL患者骨髓或外周血标本的dCK mRNA表达,比较Flud敏感与耐药患者dCK表达水平的差异。结果表明:敏感组dCK表达水平高于耐药组(p=0.001),dCK的表达与性别、年龄、Binet分期、IgVH基因突变、CD38、ZAP-70和p53基因突变均无相关性(p>0.05)。结论:dCK表达水平低或缺陷的患者可能对Flud药物有耐药性,而dCK表达的预后意义有待进一步探讨。
- 姚琳徐卫范磊缪扣荣吴雨洁乔纯朱丹霞朱华渊刘澎李建勇
- 关键词：脱氧胞苷激酶慢性淋巴细胞白血病
- 慢性淋巴细胞白血病外周血免疫球蛋白异常研究被引量：3
- 2009年
- 为了解慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血免疫球蛋白(Ig)异常与年龄、性别、疾病分期及预后的关系,运用免疫速率比浊法测定83例CLL患者血清中IgG、IgA和IgM水平,用多参数流式细胞术(FCM)检测患者外周血CD38、ZAP-70表达水平。结果表明:83例CLL患者中IgG减低12例(14.5%);IgA减低26例(31.3%),IgM减低34例(41.0%)。BinetC期组Ig减低发生率明显高于BinetA和B期组(p=0.011),Rai分期高危组的Ig减低发生率明显高于低危组(p=0.011)。Ig减低组CD38和ZAP-70表达阳性率明显较Ig正常组高(p=0.033和p=0.038)。CD38和ZAP-70在疾病晚期患者表达阳性率更高,其中BinetC期组ZAP-70表达阳性率明显高于BinetA和B期组(p=0.047)。而年龄和性别与Ig异常没有明显相关性(p>0.05)。结论:CLL患者体液免疫功能与疾病分期密切相关,检测CLL患者外周血Ig水平的变化,对了解CLL患者免疫功能状态,从而判断病情及预后具有重要作用。
- 朱远东徐卫缪扣荣曹鑫范磊刘琼姚琳吴雨洁洪鸣李建勇
- 关键词：慢性淋巴细胞白血病免疫球蛋白外周血
