国家自然科学基金(30973402H1601)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- HPV16 E2与IL-12联合基因疫苗的免疫效果初步研究
- 2012年
- 目的将HPV16E2与IL-12真核表达载体联合免疫小鼠,检测小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,为HPV16诱发的宫颈癌治疗性核酸疫苗的研制奠定实验基础。方法40只BALB/c小鼠随机分成PBS组、pcD-NA3.1(+)空质粒组、pcDNA3.1(+)/IL-12组、pcDNA3.1(+)/HPV16E2组以及pcDNA3.1(+)/HPV16E2+pcD-NA3.1(+)/IL-12联合组,每组8只,共免疫4次,每2周1次。于免疫前1d及第8周采血,分离血清,-20℃保存;颈椎脱臼处死小鼠,无菌取脾脏,制备脾细胞悬液。ELISA法测定小鼠血清HPV16E2IgG抗体水平及脾细胞培养上清IFN-γ、IL-4水平;MTT比色法检测脾淋巴细胞的增殖。结果免疫8周后,血清IgG抗体A450值E2组和联合组与PBS组和空质粒组比较差异有统计学意义(P<0.05);但在每个时间点,联合组与E2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。IL-12组、E2组、联合组脾淋巴细胞培养上清中的IFN-γ和IL-4含量与PBS组和空质粒组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合组与E2组比较IFN-γ含量差异有统计学意义(P<0.05),两组的IL-4含量差异无统计学意义(P>0.05)。IL-12组、E2组、联合组脾淋巴细胞SI值与PBS组和空质粒组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合组与E2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPV16E2单基因疫苗及其与IL-12联合基因疫苗能刺激小鼠产生特异性抗体,脾淋巴细胞培养上清IFN-γ含量升高,且联合基因疫苗优于E2单基因疫苗。
- 唐双阳李乐余敏君粟盛梅蔡恒玲周良万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E2IL-12核酸疫苗
- HPV16 E2蛋白及其TAD和DBD对巨噬细胞分泌TNF-α与IL-1β的影响
- 2012年
- 目的分析人乳头瘤病毒(HPV)16型E2蛋白及其转活性结构域(TAD)和DNA结合结构域(DBD)与绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白在巨噬细胞(MΦ)中的定位,并研究其对MΦ分泌TNF-α和IL-1β的影响。方法将质粒pEGFP-C1、pEGFP-C1/E2、pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD分别转染MΦ,倒置荧光显微镜下观察融合蛋白在MΦ中的分布与定位,通过ELISA测定转染细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β的含量。结果 GFP、GFP-E2融合蛋白在MΦ细胞核、细胞浆内均有表达,且后者细胞核荧光亮度强于细胞浆;GFP-DBD融合蛋白表达于细胞核,GFP-TAD表达于细胞浆。GFP-E2组细胞培养上清中TNF-α和IL-1β含量分别为(321.83±22.00)pg/ml和(214.35±22.79)pg/ml,GFP-TAD组分别为(371.79±22.73)pg/ml和(233.52±17.75)pg/ml,GFP组和空白组分别为(265.74±28.74)pg/ml、167.60±18.68)pg/ml和(234.76±31.94)pg/ml、155.13±20.54l)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05);GFP-DBD组分别为(258.24±33.55)pg/ml和(148.08±19.50)pg/ml,与GFP组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。GFP-TAD组与GFP-E2组比较TNF-α含量差异有统计学意义(P<0.05),IL-1β含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论真核表达载体pEGFP-C1/HPV16E2、pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD均能在MΦ中表达相应的融合蛋白,GFP-E2主要定位细胞核,GFP-DBD仅定位细胞核,GFP-TAD仅定位细胞浆;HPV16E2及其TAD即时高表达上调MΦ分泌TNF-α和IL-1β。
- 唐双阳刘安元余敏君尹卫国粟盛梅蔡恒玲万艳平
- 关键词：HPV16E2蛋白巨噬细胞TNF-ΑIL-1Β
- 人乳头瘤病毒E2蛋白在细胞周期检测点中的作用研究进展被引量：2
- 2012年
- 人乳头瘤病毒(HPV)E2蛋白一直被认为是E6/E7的转录抑制因子与肿瘤抑制因子。近年研究发现,在HPV所致细胞转化过程中,E2蛋白与细胞有丝分裂检测点相互作用,影响Cdc20、Skp2和APC/C等活性,涉及纺锤体组装检测点,关系到细胞基因的稳定性。由于E2蛋白可能在HPV致癌中具有推动作用,因而有望成为防治高危型HPVs所致肿瘤的一个新靶点。
- 李耀林唐双阳万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒E2蛋白
