广东省自然科学基金(04105351)
- 作品数：7 被引量：12H指数：3
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- RNAi沉默人端粒酶逆转录酶对HeLa细胞生长及药物敏感性影响的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨利用短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达后对人宫颈癌HeLa细胞生长及药物敏感性的影响。方法:将构建的hTERT-shRNA真核表达载体用脂质体转染入HeLa细胞中,经G418筛选得到稳定转染的细胞株,并绘制细胞生长曲线。RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测hTERT、c-myc mR-NA和蛋白表达。镜下观察干扰组细胞与对照组细胞对化疗药物的反应,并在紫杉醇给药后采用流式细胞术和细胞免疫化学的方法分别检测两组细胞的死亡率和细胞内微管组织状态。结果:干扰组细胞在6代以后hTERT的mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组,P<0.05,n=3,而c-myc的表达以及细胞的生长速度与对照组差异无统计学意义,P>0.05,n=3。干扰组细胞对化疗药物紫杉醇的反应明显不同于对照组,紫杉醇给药后干扰组细胞的死亡率(9.7%)高于对照组细胞(6.4%),但给药前后两组细胞内微管的分布差异无统计学意义,P>0.05,n=3。结论:单独下调HeLa细胞中hTERT的表达不能降低肿瘤细胞的生长速度,也不能显著改变c-myc的表达,却可以增加细胞对紫杉醇的敏感性,而hTERT是否参与微管的调节有待进一步探讨。
- 米洋廖旻晶郭雪玲黄喜阳黄小荣梁昌盛周俊宜
- 关键词：末端转移酶HTERT微管
- RNA干扰人端粒酶hTR基因对HeLa细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨RNA干扰抑制人端粒酶RNA组分(human telomerase RNA component,hTR)的表达对宫颈癌细胞(HeLa细胞)增殖的影响。方法:hTR基因的RNA干扰表达重组体用脂质体介导方法稳定转染HeLa细胞。RT-PCR法检测hTR的mRNA表达水平,TRAP-PCR法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖。结果:RT-PCR结果表明,稳定转染RNA干扰表达重组体的细胞株,其hTR基因的mRNA抑制率较无转染对照组下降了(59.7±3.3)%,较转染空载体组下降了(56.3±4.4)%;实验组细胞端粒酶活性下降,生长速度明显减慢。结论:利用RNA干扰技术抑制hTR基因在HeLa细胞的表达能抑制该细胞端粒酶活性和增殖活性。
- 朱俊峰袁广卿黄小荣骆晓枫周俊宜
- 关键词：RNA干扰HELA细胞小发夹RNA
- 端粒酶RNA亚基模板突变抑制HeLa肿瘤细胞的生长被引量：3
- 2009年
- 在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基(MT-hTR)是一种新颖的抑制肿瘤细胞生长的方法.本研究通过构建MT-hTR真核表达重组体,初步观察其对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响.通过分子克隆技术及PCR介导的定点突变技术构建野生型及突变型hTR表达重组体,将空载体及重组体分别与质粒pEGFP-C1通过脂质体共转染HeLa细胞,经药物G418的筛选得到稳定表达外源基因的细胞.RT-PCR检测目的基因的表达,TRAP分析细胞的端粒酶活性,并通过MTT法绘制各组细胞的生长曲线.结果发现,重组体在细胞内能成功表达目的基因,并且在Mutant1转染细胞中检测到相应的突变型端粒酶活性.构建的4个MT-hTR重组体中,有3个能使HeLa细胞生长速度减缓.以上结果提示,在HeLa细胞内表达MT-hTR能抑制细胞的生长速度,并且突变模板的设计可能会影响到抑制效应的发挥.
- 廖晶周俊宜杨锟官志平谢金卫袁广卿骆晓枫
- 关键词：端粒端粒酶定点突变
- 端粒酶锤头状核酶抑制肺癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨端粒酶特异性核酶对A549肺癌细胞端粒酶活性、增殖和凋亡的影响。方法:构建人端粒酶锤头状核酶真核表达质粒,稳定转染人A549肺癌细胞株。RT-PCR法检测核酶的表达以及hTERT mRNA、hTR的含量,TRAP法测定细胞端粒酶活性,MTT法、流式细胞仪等测定细胞增殖及凋亡。结果:稳定转染核酶重组体的细胞克隆,均可以检测到核酶的表达,端粒酶活性被抑制,clonehTERT1～6和clonehTR(1、3、5)的平均端粒酶活性分别是空白对照组的(27±18)%和(36±13)%,P值分别为0.000和0.013;clonehTERT1～6hTERT mRNA及clonehTR1～6hTR含量下降,分别是空白对照组的(30±19)%和(49±17)%,P值分别为0.000和0.001;clonehTERT1、clonehTR3生长较空白对照组及阴性对照组减缓,凋亡率增加;而clonehTERT1又较clonehTR3生长慢,凋亡率高(凋亡率分别为21.5%和16.1%)。结论:端粒酶特异性核酶能明显抑制端粒酶活性和细胞增殖,促进细胞凋亡;端粒酶hTERT mR-NA可能是比端粒酶RNA更为理想的端粒酶抑制剂的靶点。
- 何霞周俊宜朱振宇黄小荣谢金卫王于柏芸米洋陶莎
- 关键词：端粒末端转移酶端粒
- MNNG诱导TERC基因沉默的16HBE细胞恶性转化模型的建立
- 2012年
- 目的:建立N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)诱导的人端粒酶RNA组分(telomerase RNA component,TERC)缺陷的人支气管上皮细胞株(16HBE)恶性转化细胞模型。方法:将靶向TERC基因的shRNA干扰质粒载体转染16HBE细胞,G418抗性克隆筛选得到稳定转染的16HBE-1细胞,RT-PCR检测16HBE-1细胞TERC mRNA的干扰效率;用1 mg/L MNNG对16HBE-1细胞进行隔代染毒,每次染毒1 h;直到染毒27次转化灶的出现。分离扩增转化灶细胞并命名为16HBE-T,用软琼脂克隆形成实验和裸鼠成瘤实验鉴定细胞的转化程度。结果:从转化灶分离培养的细胞能在软琼脂中生长,且转化细胞能在裸鼠体内成瘤,HE染色后光镜下显示为鳞癌。结论:成功建立MNNG诱导的TERC基因缺陷的16HBE细胞恶性转化模型。
- 朱俊峰黄小荣冯宇鹏周俊宜
- 关键词：端粒酶RNA人支气管上皮细胞
- 人端粒酶hTERT可诱导RNAi系统的建立及其对TREx-HeLa细胞生长的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:建立可诱导性沉默hTERT的RNA干扰系统,并初步探讨端粒酶与细胞增殖调控之间的关系。方法:构建沉默端粒酶催化亚基hTERT的Tet-on可诱导性RNAi载体psiRNA-hH1/TO-hTERTshRNA,并稳定转染表达TR的TREx-HeLa细胞,用半定量RT-PCR检测hTERT的转录后水平,TRAP法检测端粒酶活性。MTT法检测细胞的增殖,流式细胞仪和Hoechst33342染色法观察细胞凋亡。结果:构建了可诱导性沉默端粒酶催化亚基hTERT的重组体psiRNA-hH1/TO-hTERTshRNA,并建立了可诱导性沉默hTERT的TREx-HeLa细胞株。短期内的端粒酶活性降低后TREx-HeLa细胞生长增殖有下降趋势,而其凋亡情况则未见明显变化。结论:本研究建立了可诱导沉默hTERT的RNAi系统,为研究端粒酶活性与细胞增殖和衰老的关系提供了实验基础。
- 柏芸杜贻鹏骆晓枫米洋袁广卿何霞陈展辉周俊宜
- 关键词：RNA干扰端粒末端转移酶
- 青壮年猝死综合征的研究状况
- 2008年
- 青壮年猝死综合征是一类死因不明的疾病。近年来,由于引入新研究技术,该研究取得了一定进展。研究表明:在蛋白水平,心肌肌红蛋白、纤维连接蛋白、肌动蛋白和血浆白蛋白的含量均存在明显的差异性改变;在基因水平,钠离子通道、钾离子通道、钙离子通道的相关基因位点存在一定的突变现象,而青壮年猝死综合征家系HLA-DRB1*12021和DQB1*0301/09基因型频率明显高于正常人群。
- 郑一诫周俊宜
- 关键词：青壮年猝死综合征BRUGADA综合征SCN5A猝死
