军队“十一五”科技攻关课题(06G117)
- 作品数：19 被引量：60H指数：5
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- 他克莫司对截肢创伤应激后大鼠肝肾组织的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察大鼠截肢创伤应激后所致肝脏和肾脏的损伤及他克莫司(FK506)对肝肾可能的保护作用,为截肢术后引起的远隔器官损伤的干预治疗提供理论依据。方法制备大鼠左后肢截肢创伤模型,将雄性Wistar大鼠80只随机分为10组:正常对照组,截肢后1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h、72h组,FK506干预组,每组8只。测定肝肾组织CaNmRNA表达、血浆及肾组织肾损伤分子1(KIM-1)含量、肝肾功能指标(ALT、AST和Cr、BUN),观察肝、肾组织HE染色病理变化。结果与正常对照组相比,截肢创伤2h组肝脏、肾脏组织CaNmRNA即出现明显升高,于6h达峰值,分别为2.881±0.277(P<0.01)、3.107±0.346(P<0.01),72h恢复至正常水平;血浆及肾组织KIM-1含量于截肢创伤1h组即出现明显升高,至72h组持续升高,创伤6h组分别为1.650±0.194μg/L(P<0.01)、0.921±0.071(P<0.01);血浆ALT、AST和Cr含量均在创伤应激后出现明显升高(P<0.05),血浆BUN含量无明显改变。FK506干预组与截肢6h组比较,肝肾组织CaNmRNA(1.003±0.210、0.856±0.158)、血浆及肾组织KIM-1含量(1.065±0.170μg/L、0.605±0.050)、血浆Cr含量均显著降低(P<0.01,P<0.05),血浆ALT、AST含量明显升高(P<0.01),血浆BUN含量无明显变化。病理检查可见截肢6h组肝、肾组织充血及细胞肿胀明显,FK506干预后相对减轻。结论大鼠截肢创伤应激后可引起肝、肾组织结构和功能的损伤,FK506干预可以对这种损伤起到一定的防护作用。
- 田璠张颖张海峰任青爱谢晓华
- 关键词：创伤他克莫司截肢术钙调神经磷酸酶
- 硫化氢对大鼠骨骼肌缺血再灌注所致心肌损伤的保护作用被引量：4
- 2011年
- 目的研究外源性硫化氢(H2S)对大鼠骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的保护作用。方法选雄性Wistar大鼠31只,随机分为4组:(1)正常对照组(8只);(2)缺血再灌注组(8只),应用止血带结扎构建大鼠双下肢缺血再灌注模型,缺血4h再灌注4h;(3)硫氢化钠(NaHS)组(8只),缺血前及再灌注前腹腔注射NaHS0.78mg/kg;(4)炔丙基甘氨酸(PPG)组(7只),缺血前及再灌注前腹腔注射PPG50mg/kg。观察各组心肌病理、血浆H2S、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白T(TnT)及心肌胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性的变化。结果与正常对照组比较,缺血再灌注组血浆H2S及心肌CSE活性明显下降,血浆CK-MB、TnT明显升高(P<0.05)。与缺血再灌注组比较,NaHS组血浆H2S浓度升高59%(P<0.05),心肌CSE活性升高93%(P<0.05),血浆CK-MB降低29%(P<0.05),血浆TnT降低67%(P<0.05);PPG组血浆H2S浓度下降20%,但无统计学差异,心肌CSE活性降低38%(P<0.05),血浆心肌酶学改变无统计学差异。心肌病理提示,缺血再灌注组心肌明显肿胀、血管充血,心肌细胞间可见明显分叶核粒细胞浸润,红细胞漏出增多,NaHS组干预后心肌损伤明显减轻。结论外源性H2S补充可以减轻骨骼肌缺血再灌注所致的心肌损伤。
- 陈雯张颖齐迎春任青爱杨靖邓昭阳谢晓华
- 关键词：骨骼肌缺血再灌注心肌损伤硫化氢
- 外源性H2S吸入对大鼠肢体缺血／再灌注后心肌损伤的保护作用研究被引量：3
- 2008年
- 目的研究外源性H2S吸入对大鼠双下肢缺血/再灌注后心肌损伤的保护作用。方法雄性Wistar大鼠23只,随机分为三组:①正常对照组(C组,8只);②缺血/再灌注组(I/R组,8只):应用止血带结扎构建大鼠双下肢缺血/再灌注模型,缺血4 h再灌注4 h。③H2S吸入组(H2S组,7只):大鼠双下肢缺血4 h,再灌注时给予含80 ppm H2S的合成空气持续吸入4 h。观察各组大鼠心肌病理、血浆H2S、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白-T(TnT)、髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的变化及心肌胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性、MPO、TNF-α水平的变化。以免疫组化法观察心肌细胞TNF-α的表达。结果与C组比较,I/R组血浆CK-MB、TnT、MPO、TNF-α及心肌MPO、TNF-α水平明显上升(P<0.05),血浆H2S及心肌CSE活性明显下降(P<0.05),H2S吸入后血浆H2S及心肌CSE活性明显升高;同时,血浆CK-MB、TnT、MPO、TNF-α及心肌MPO、TNF-α水平明显降低(P<0.05)。心肌病理提示I/R组心肌明显肿胀、血管充血,心肌细胞间可见明显分叶核粒细胞浸润,红细胞漏出增多,H2S吸入后心肌损伤明显减轻。心肌TNF-α免疫组化提示I/R组心肌胞浆棕色染色颗粒较C组明显增多,H2S吸入后心肌胞浆棕色染色颗粒明显减少。结论外源性H2S吸入可以通过降低炎细胞浸润及炎性细胞因子激活而对骨骼肌缺血/再灌注的心肌损伤发挥保护作用。
- 陈雯刘莉张颖齐迎春任清爱张海峰邓昭阳耿彬谢晓华
- 关键词：心肌损伤髓过氧化物酶
- 钙调神经磷酸酶Aβ小干扰RNA筛选及对心肌细胞肥大的抑制
- 2012年
- 目的在细胞水平上筛选钙调神经磷酸酶(CaN)Aβ基因(mRNA)的小干扰RNA(siRNA)的干扰序列,为研究抑制在体心肌肥大的方法提供理论基础。方法针对CaNAβmRNA,参照siRNA设计原则,应用软件设计候选干扰序列,构建相应的小发夹RNA表达载体(si1053,si1280,si1539)。培养乳鼠心肌细胞,分为6组:空白对照组,肥大模型组(醛固酮诱导),肥大+si1280组,肥大+si1539组,肥大+si1053组,肥大+siGFP阴性对照组(转染针对GFP特定序列的shRNA质粒)。48h后显微镜下测量心肌细胞直径、CaNAβ及心房利钠因子(ANF)、β-重链肌球蛋白(β-MHC)mRNA水平。结果肥大模型组心肌细胞直径以及心肌组织CaNAβ、ANF、β-MHCmRNA表达水平较空白对照组明显增加(P<0.05)。肥大+si1053、肥大+si1280、肥大+si1539组细胞直径以及CaNAβ、ANFmRNA水平均较肥大模型组及肥大+siGFP阴性对照组降低(P<0.05),3组之间的CaNAβmRNA水平无明显差异(P>0.05),其中肥大+si1280组的细胞直径、ANF及β-MHCmRNA水平较肥大+si1053组、肥大+si1539组有明显减低(P<0.05)。结论成功构建CaNAβmRNA的小发夹RNA表达质粒,siRNA抑制CaNAβmRNA的表达,可抑制细胞水平醛固酮诱导的心肌细胞肥大;其中1280(21bp)为RNA干扰的相对更有效片段。
- 齐迎春谢晓华陈雯李朝晖
- 关键词：RNA干扰转染心肌细胞
- 大鼠肥厚心肌组织CaN Aβ基因沉默的实现及对细胞肥大抑制作用被引量：1
- 2012年
- 目的诱导钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)Aβ基因沉默,探索防治心肌肥厚的新方法。方法成年Wistar大鼠(30只)随机分为假手术组,"一肾一夹"模型组,CaN Aβ心包腔内干扰组,心包腔干扰阴性对照组,CaN Aβ舌下静脉干扰组,舌下静脉干扰阴性对照组。转染6d后,处死大鼠并取材,测定血浆常规肝肾功能、心肌酶指标,RT-PCR法检测心肌组织CaN Aβ、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)及β-重链肌球蛋白(myosin heavy chain,β-MHC)基因mRNA水平,免疫荧光检测CaN Aβ蛋白表达。结果模型组心肌CaN Aβ、ANF、β-MHC基因mRNA水平高于假手术组(P<0.05);切取左心室前壁心外膜下薄层心肌组织,心包腔内干扰组CaN、ANF、β-MHC mRNA水平明显低于模型组及心包腔内阴性对照组(P<0.05);CaN Aβ蛋白免疫荧光显示心包腔内干扰组较模型组心外膜下心肌细胞荧光减弱;各手术组之间血浆GPT/GOT,Ua/Cr/UN,CK/CK-MB/LDH无明显差异。结论心包腔内注射辅以微泡+酶类的使用及超声导入,可改善质粒在动物水平心肌组织的转染效率,CaN Aβ干扰可抑制肥大相关基因ANF、β-MHC的表达,对心、肺、肝及肾等组织无明显损伤。
- 齐迎春谢晓华陈雯李朝晖
- 关键词：心肌肥大
- 内源性H_2S在大鼠骨骼肌缺血/再灌注所致心肌损伤中的变化及意义被引量：9
- 2009年
- 目的研究内源性血浆硫化氢（H2S）／心肌胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）体系在骨骼肌缺血／再灌注所致心肌损伤中的变化及作用：方法雄性Wistar大鼠62只，应用止血带结扎构建大鼠双下肢缺血／再灌注模型。按照缺血及再灌注不同时间点随机分为9组：①正常对照组（C组，8只）；②缺血2h组（I2组，4只）；③缺血4h组（I4组，8只）；④再灌注0．5h组（R0.5组，8只）；⑤再灌注2h组（R2组，8只）；⑥再灌注4h组（R4组，8只）；⑦再灌注6h组（R6组，8只）；⑧再灌注12h组（R12组，4只）；⑨再灌注24h组（R24组，6只）。各再灌注组均为缺血4h。观察各组大鼠心肌病理改变、血浆H2S、肌酸激酶同T酶（CK—MB）、肌钙蛋白T（TnT）水平的变化及心肌CSE活性的变化。结果光镜下观察可见，缺血4h后大鼠心肌细胞略肿胀，肌间隙可见少量红细胞漏出；再灌注4h及6h后，心肌细胞损伤改变最重；再灌注24h后，上述改变有所减轻。与正常对照组比较，缺血2h后，血浆CK—MB的水平即开始明显上升，血浆TnT的水平在缺血4h后明显上升（P〈0．05）。各缺血组血浆H2S的水平及心肌CSE的活性有下降趋势，但无明显统计学差异：与缺血4h组比较，再灌注0．5h后血浆CK—MB的水平明显升高，再灌注4h达高峰；血浆TnT的水平再灌注6h达高峰；血浆H2S的水平及心肌CSE的活性再灌注2h后则明显下降，再灌注4h达最低值；再灌注24h后，血浆H2S的水平及心肌CSE的活性逐渐回升，血浆CK—MB的水平明显下降（P〈0．05）。CK—MB、TnT水平的变化与血浆H：S水平的变化呈明显的负相关：结论骨骼肌缺血／再灌注可造成心肌损伤，缺血／再灌注4～6h，心肌损伤最重。内源性血浆H2S／心肌CSE体系的下调可能在骨骼肌再灌注期心肌损伤的病理生理改变中具有重要作用．
- 陈雯刘莉张颖齐迎春张海峰耿彬谢晓华
- 关键词：心肌损伤硫化氢
- 硫氢化钠防治截肢术后大鼠肾脏损伤的机制被引量：5
- 2013年
- 目的探讨截肢术后大鼠肾脏损伤的机制,探索外源性硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(NaHS)的应用对肾脏结构和功能的影响,并了解硫化氢在防治肾脏损伤中的作用机制。方法实验分为两部分。第1部分:将雄性Wistar大鼠按手术时间随机分为正常对照、手术后6 h、NaHS干预、炔丙基甘氨酸(PPG)干预组,每组7只。测定血浆H2S、肾组织肾损伤分子-1(KIM-1)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、一氧化氮、尿素氮、肌酐浓度和肾组织胱硫醚β-裂解酶(CSE)活性、MPO、MDA、KIM-1水平;光镜观察肾组织形态学变化,电镜观察线粒体结构变化。第2部分:将雄性SD大鼠随机分为4组,每组大鼠8只。提取各组肾线粒体后测定呼吸控制率、膜电位及ATP酶活性。结果截肢后6 h大鼠肾脏细胞和线粒体结构出现了损伤性变化,血浆及肾脏KIM-1含量明显增加(P<0.01),而H2S/CSE水平明显下降(P<0.01),NaHS干预后血浆H2S/肾脏CSE水平明显升高(P<0.01),而肾组织损伤减轻,血浆及肾脏KIM-1含量明显降低(P<0.01)。与正常对照组相比,手术后大鼠肾脏线粒体呼吸控制率、膜电位及ATP酶活性显著降低(P<0.01),应用NaHS后以上指标出现明显升高,而应用PPG后无明显改善。结论截肢创伤可导致大鼠肾脏结构和功能的损害,并导致线粒体的损伤,H2S供体NaHS的应用可使线粒体功能明显改善,并进一步减轻肾脏结构和功能的损害,表明H2S作为是一种新的内源性介质,可能通过多条途径作用于线粒体,调节能量代谢途径,参与组织了损伤与修复的一系列病理生理过程。
- 张颖刘宁任青爱张海峰谢晓华
- 关键词：截肢术急性肾损伤硫化氢硫氢化钠
- 硫化氢对截肢创伤后大鼠肺线粒体损伤的保护作用被引量：4
- 2012年
- 目的观察大鼠下肢截肢创伤后肺线粒体的损伤情况及硫化氢(H2S)对截肢创伤应激后肺线粒体功能的保护作用。方法 32只雄性SD大鼠分为对照组、创伤组、硫氢化钠(NaHS)组(截肢后立即腹腔注射NaHS 28μmol/kg)和炔丙基甘氨酸(PPG)组(截肢后立即给予腹腔注射PPG 50 mg/kg),每组8只。通过手术制备大鼠左后肢截肢模型,截肢后6 h处死动物,迅速提取肺组织线粒体,测定肺线粒体呼吸控制率、磷氧比(P/O)、膜电位及三磷酸腺苷(ATP)酶活性,电镜下观察肺线粒体的形态改变。结果与对照组比较,创伤组肺线粒体的呼吸功能受损[呼吸控制率(RCR)、P/O、膜电位及总ATP酶的含量下降(P<0.05)];与创伤组比较,NaHS组肺线粒体RCR、P/O、膜电位及总ATP酶的含量明显升高(P<0.05);PPG组P/O、总ATP酶的含量降低(P<0.05)]。电镜观察显示,创伤组、PPG组肺线粒体肿胀、嵴断裂;而NaHS组线粒体仅轻度肿胀。结论截肢创伤应激可使肺线粒体的呼吸功能受损、膜电位下降、能量代谢障碍;硫化氢对截肢创伤后肺线粒体的损伤具有保护作用。
- 张海峰张颖任青爱谢晓华
- 关键词：线粒体硫化氢
- 硫化氢通过抑制炎性细胞因子及氧化应激保护大鼠骨骼肌缺血再灌注的心肌损伤被引量：12
- 2013年
- 目的研究外源性硫化氢对大鼠骨骼肌缺血再灌注的炎性细胞因子和氧化应激的影响,探讨其对骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的具体保护机制。方法雄性Wistar大鼠31只,随机分为4组⑥正常对照组(c组,8只);⑥缺血再灌注组(ischemiareperfusion,IR组,8只):应用止血带结扎双下肢构建大鼠骨骼肌缺血再灌注模型,缺血4 h再灌注4 h;⑥NaHS组(8只)和PPG组(7只):在上述骨骼肌缺血再灌注的模型中,分别于缺血前及再灌注前腹腔注射NaHS 14μmol/kg、炔丙基甘氨酸(PPG)50 mg/kg。观察4组大鼠心肌组织病理、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及血浆和心肌髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(T-SOD、CuZn-SOD)的变化。以免疫组化法观察心肌细胞TNF-α的表达。结果与c组比较,IR组血浆CK-MB明显上升,血浆及心肌MPO、MDA水平明显上升,T-SOD、CuZn-SOD水平明显下降(P<0.05),与IR组比较,NaHS干预后血浆CK-MB明显降低,同时,血浆及心肌MPO、MDA水平明显下降,T-SOD、CuZn-SOD水平明显上升(P<0.05);PPG组上述指标同IR组没有明显改变(P>0.05)。心肌TNF-α免疫组化可见IR组心肌胞浆棕色染色颗粒较正常对照组明显增多,NaHS干预后后心肌胞浆棕色染色颗粒明显减少。结论给予H2S的供体NaHS可以通过降低中性粒细胞浸润及前炎症细胞因子激活、抑制氧化应激反应对骨骼肌缺血再灌注的心肌损伤发挥保护作用。
- 陈雯刘宁张颖齐迎春杨靖邓昭阳李晓玲谢晓华
- 关键词：骨骼肌缺血再灌注心肌损伤硫化氢炎性细胞因子
- 构建截肢创伤模型大鼠肝脏功能变化及硫化氢的影响被引量：2
- 2015年
- 背景:截肢是一种特殊类型的创伤,创伤导致肝脏损害的机制及硫化氢对肝脏的作用目前尚不明确。目的:探索构建截肢创伤模型大鼠的肝脏损伤,以硫化氢(H2S)对其的影响。方法:将Wistar大鼠和SD大鼠分别随机等分为正常组、截肢后6,12,24,72 h组、硫氢化钠(NaH S)组、炔丙基甘氨酸组和为正常组、截肢后6 h组、NaH S组、炔丙基甘氨酸组。除正常组外所有大鼠完全截断左侧于膝关节上方1.2-1.4 cm处结构,并在结扎血管后剪断左侧股静、动脉,建立左后肢的截肢模型大鼠。NaH S组及炔丙基甘氨酸组大鼠分别于截肢后即刻腹腔注射28μmol/kg Na HS和50 mg/kg炔丙基甘氨酸。结果与结论:与正常组相比,截肢后6 h组大鼠肝脏和线粒体结构出现了损伤性改变,血浆及肝脏髓过氧化物酶、丙二醛、H2S/胱硫醚γ-裂解酶水平、血浆及肝脏髓过氧化物酶、丙二醛、肝脏线粒体呼吸控制率、膜电位及ATP酶活性明显降低(P<0.05),NaH S干预后H2S/胱硫醚γ-裂解酶水平及以上指标明显升高(P<0.05),但血浆转氨酶并未明显变化(P>0.05)。应用炔丙基甘氨酸后,以上除线粒体指标无明显变化外,多表现为进一步降低,转氨酶也明显下降(P<0.05)。说明H2S可减轻截肢模型大鼠肝脏组织脂质过氧化、炎症反应,并使线粒体功能明显改善,但并未减轻肝脏功能的受损。
- 张颖张海峰任青爱谢晓华
- 关键词：实验动物硫化氢肝损害截肢脂质过氧化
