国家自然科学基金(81172356)
- 作品数：14 被引量：47H指数：5
- 相关作者：张庆瑜康春生张安玲贾文亮周芳更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院天津市神经病学研究所天津医科大学更多>>
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- 上调miR-200a、miR-141表达对胃腺癌细胞生长的体外研究被引量：7
- 2013年
- 目的探究上调microRNA(miR)-200a和miR-141表达对胃腺癌细胞系SGC-7901细胞侵袭迁移的影响。方法脂质体介导miR-200a(miR-200a组)、miR-141(miR-141组)、miR-200a+miR-141(miR-200a+miR-141组)拟似物转染SGC-7901细胞,同时设未转染组(对照组)、无义序列转染组。应用qRT-PCR检测转染后各组miR的表达,Transwell小室法和划痕实验检测转染后细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测转染后E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,并进行比较分析。结果与对照组和无义序列转染组相比,miR-200a、miR-141和miR-200a+miR-141组miR表达较高,细胞穿膜细胞数较少(均P<0.05),划痕法显示SGC-7901细胞阻滞效果更明显,E-cadherin表达增加,N-cadherin、MMP-9表达减少,且以上变化在miR-200a+miR-141组更显著。结论上调miR-200a、miR-141表达可有效抑制SGC-7901细胞的侵袭迁移。
- 申发娟苏娟张庆瑜康春生周磊王涛
- 关键词：微RNAS腺癌肿瘤侵润钙黏着糖蛋白类基质金属蛋白酶9
- PIK3CA在胃癌病变中表达的研究
- 2013年
- 目的研究磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)表达与胃癌发病及不同病理级别胃肿瘤的关系,探讨其在胃癌发病中的作用机制。方法应用组织芯片技术结合免疫组化方法检测PIK3CA、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAkt)、细胞增殖相关核抗原(ki-67)在胃腺癌、癌旁组织、正常胃黏膜中的表达情况,分析其与肿瘤发生的关系;进一步分析PIK3CA、pAkt、ki-67在不同胃癌病理级别组织中的表达情况,及其与肿瘤病理分级、分化的关系。结果 PIK3CA、pAkt、ki-67在胃癌组织中的表达显著增高(P<0.05),且在低分化胃腺癌中的表达最高(P<0.05),PIK3CA、pAkt和ki-67在不同病理级别胃癌及癌旁组织和正常胃黏膜组织中的表达两两之间呈正相关(P<0.05)。结论 PIK3CA可能作为磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的始动因子,促使Akt磷酸化,进而激活PI3K/Akt信号传导途径,促进胃癌增殖、侵袭与转移。
- 马菲菲张庆瑜王涛康春生徐蓉蔡凤英宋小妹
- 关键词：1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶KI-67抗原组织芯片
- 甲基化调节miR-200b的表达及其对胃癌MGC-803细胞增殖侵袭能力的影响被引量：5
- 2015年
- 目的体外研究基因mi R-200b发生甲基化的不同程度及其表达量的差异对胃癌细胞MGC-803增殖、侵袭、凋亡及对上皮间质转化的影响。方法以正常胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803为研究对象,提取细胞总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR检测2种细胞系中mi R-200b的表达量;亚硫酸氢钠修饰PCR(BSP)法检测mi R-200b启动子区甲基化水平。用不同浓度5-氮杂胞苷(5′-Aza-Cd R)药物处理MGC-803细胞72 h后,同法检测mi R-200b的表达量及启动子区甲基化水平变化。根据上述实验结果选择合适的药物作用浓度和时间即(10μmol/L,72 h)作为处理组。通过Transwell侵袭实验观测细胞侵袭能力;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡的分布情况;Western-blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin、ZEB1、Slug、基质金属蛋白酶(MMP)9等的表达水平。结果 mi R-200b在GES-1中表达量较MGC-803高(P=0.022)。启动子区甲基化水平则与之相反(P=0.034)。药物不同浓度作用后的MGC-803细胞系mi R-200b表达量有随浓度升高而升高的趋势,作用浓度为10μmol/L时mi R-200b启动子区甲基化水平较对照组低(P=0.043)。与对照组相比,处理组细胞晚期凋亡数增多;G0/G1期细胞数显著增多,S期显著减少;穿过Transwell小室细胞数显著减少;Western-blot实验表明E-cad-herin表达量升高,N-cadherin、ZEB1、Slug、MMP9表达量降低。结论 mi R-200b启动子区甲基化程度的不同可以影响其表达量,而mi R-200b表达量的异常又与胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭能力密切相关。
- 郭蓉宁向红姜葵张庆瑜
- 关键词：腺癌DNA甲基化
- 应用亚硫酸氢盐修饰后PCR联合TA克隆测序对E-cadherin启动子区甲基化水平的检测被引量：1
- 2014年
- E-cadherin是一种细胞粘附因子,通过增强细胞之间的粘附而起到抑制肿瘤转移的作用.Ecadherin基因启动子区的高甲基化是导致其在众多肿瘤细胞中表达下调甚至缺失的主要原因之一.本实验首先抽提SGC-7901细胞(胃腺癌细胞)、A549细胞(肺腺癌细胞)、MCF-7细胞(乳腺癌细胞)等3个肿瘤细胞株的全基因组DNA,然后对抽提的DNA进行亚硫酸氢盐修饰和纯化回收,根据修饰后的DNA序列设计引物并对其进行PCR扩增.然后将PCR扩增产物与pUC-T TA载体连接并转化入感受态大肠杆菌DH5α中进行培养,对筛选出的含有阳性重组子的菌落进行测序.测序结果显示,3个肿瘤细胞株的E-cadherin基因启动子区的CpG岛都呈现了高度的甲基化,亚硫酸氢盐的修饰效率达到了99.2%.综上研究表明,亚硫酸氢盐修饰后PCR(BSP)联合TA克隆测序可以对肿瘤细胞某基因启动子区CpG岛的甲基化水平进行精确量化,研究所使用的3个肿瘤细胞株均可作为研究肿瘤细胞E-cadherin基因甲基化的细胞模型.
- 贾文亮张庆瑜李素丽周芳张安玲
- 关键词：甲基化E-CADHERIN
- miRNA海绵在胃癌细胞EMT过程中调控作用的体外研究被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨"miRNA海绵"在胃癌细胞系SGC7901上皮-间质转化(EMT)过程中的作用及机制。方法:将人工合成的ZEB2 3'UTR质粒及siZEB2采用脂质体Lipofectamine 2000转染SGC7901细胞。qRT-PCR检测转染后miR-200a/b/c的表达;Tran-swell侵袭实验、划痕实验和克隆形成实验检测细胞侵袭迁移增殖能力;Western Blot检测目的蛋白的表达。结果:与对照组相比,ZEB2 3'UTR转染组miR-200a/b/c的表达均下调,迁移、侵袭、增殖活性均增强;而转染siZEB2后miR-200a/b/c表达均升高,迁移、侵袭、增殖能力则下降。Western Blot显示ZEB2 3'UTR转染导致ZEB2表达升高,E-cadherin表达下降,而Vimentin表达上调;而转染siZEB2后,各项指标则表现出相反的表达趋势。结论:ZEB2 3'UTR可以通过调控miR-200a/b/c的表达调控胃癌细胞EMT过程,调节肿瘤的侵袭与转移。
- 李素丽周芳张庆瑜贾文亮张安玲韩磊康春生
- 关键词：胃癌微RNAS上皮-间质转化
- 紫杉醇联合miR-200b对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响被引量：3
- 2013年
- 目的体外观察紫杉醇联合应用miR-200b模拟物(miR-200b mimics)对抑制胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法分别单独应用miR-200b转染细胞(200b组)及50nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞(紫杉醇组),并联合应用上述两者(联合组),同时设转染无义序列组和对照组。通过流式细胞技术检测细胞的凋亡水平和周期分布情况,克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观测细胞的侵袭迁移能力,Western-blot检测E2F3蛋白的表达水平。结果与单药组相比,联合组早期凋亡率显著升高;克隆形成率显著降低,穿过Transwell小室的细胞数目显著减少;划痕48h后的细胞迁移能力明显降低;E2F3蛋白在200b组及联合组中表达水平降低(均P<0.001)。联合组阻滞于G2/M期细胞的比例高于200b组、无义序列组及对照组,但和紫杉醇组比较差异无统计学意义。结论 miR-200b可能通过降低E2F3表达增强紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用。
- 杜平丛宁宁申发娟康春生张庆瑜
- 关键词：胃肿瘤腺癌细胞增殖紫杉醇
- DZNep通过上调miR-200c表达延缓MGC-803胃癌细胞侵袭和迁移过程被引量：6
- 2015年
- 本文旨在研究组蛋白甲基化修饰调控对胃癌细胞mi R-200c的表达调节以及对癌细胞的侵袭和迁移的作用。组蛋白甲基转移酶抑制剂DZNep(2.5μmol/L)处理MGC-803胃癌细胞系,用实时定量PCR(q RT-PCR)检测细胞mi R-200c的表达变化,用Western blot检测上皮间质转化相关蛋白、EZH2、EED、SUZ12、H3K27me3及MMP9的蛋白表达变化,用细胞划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭。结果显示,与对照(DMSO处理)组相比,DZNep(2.5μmol/L)处理的MGC-803肿瘤细胞mi R-200c基因的表达显著提高,ZEB1、ZEB2、N-cadherin的表达显著下调,E-cadherin的表达上调,EZH2、EED、SUZ12、H3K27me3及MMP9的表达均显著降低,细胞迁移、侵袭能力均减弱。以上结果提示,DZNep通过上调mi R-200c的表达延缓胃癌细胞侵袭、迁移过程,其机制涉及对上皮间质转化相关蛋白和PRC2(polycomb repressive complex 2)的表达调节。
- 宁向红郭蓉韩磊张安玲刘茜李朝霞康春生张庆瑜
- 关键词：胃癌MIR-200C表观遗传学
- 微小RNA-200a在胃癌中抑制上皮一间质转化的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨微小RNA-200a（miR-200a）在胃癌中的差异性表达及其对上皮．间质转化（EMT）的调控机制。方法分别采用原位杂交和免疫组织化学检测64例不同级别胃癌组织和10例正常胃黏膜组织miR-200a的表达和EMT相关蛋白锌指E-盒结合同源异形盒．1（ZEBl）／ZEB2、E．钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N．cadherin）和p-连环素（p—catenin）的表达。结果与正常胃黏膜组织比较，胃癌中miR-200a明显下调（P〈0．05），WHOIn／1V级胃癌组织中miR-200a的表达低于WHOI／Ⅱ级（P〈0．05）。与正常胃黏膜组织比较，ZEBl／ZEB2、N—caderin和B-catenin在胃癌组织中表达明显上调，而E．cadherin表达明显下调。Spearmen等级相关分析得出，miR．200a与ZEBl／ZEB2、N—cadherin和B-catenin呈负相关（P〈0．05），miR-200a与E—cadherin呈正相关（P〈0．05）。结论miR-200a抑制EMT的可能机制是miR-200a通过作用于其靶点ZEBl／ZEB2，促进E-cadherin的表达。
- 丛宁宁张庆瑜康春生杜平申发娟苏娟
- 关键词：微小RNA胃癌上皮一间质转化
- 吉非替尼联合多西他赛治疗EGFR基因突变的非小细胞肺癌患者的效果分析被引量：5
- 2018年
- 目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的非小细胞肺癌患者应用吉非替尼联合多西他赛治疗的效果及对患者生活质量(QOL)评分的影响。方法回顾性分析我院收治的EGFR基因突变的非小细胞肺癌患者100例,将其随机分为对照组和研究组,对照组采用顺铂治疗,研究组在对照组基础上加以吉非替尼联合多西他赛治疗,对比两组患者的临床疗效、呼吸问卷评分、不良反应发生率及QOL评分。结果研究组患者的临床疗效显著优于对照组(P<0.05);治疗前两组患者的呼吸评分无显著差异(P>0.05),治疗后研究组患者呼吸评分显著低于对照组(P<0.05);治疗后研究组患者恶心呕吐、过敏、肠胃不适、中性粒细胞减少、低血糖、肝功能异常等不良反应的发生率显著低于对照组(P<0.05);治疗前两组患者QOL评分无显著差异(P>0.05),治疗后研究组患者QOL评分显著高于对照组(P<0.05)。结论采用吉非替尼联合多西他赛治疗EGFR基因突变的非小细胞肺癌,临床疗效显著,可有效减少患者不良反应发生率,改善QOL评分,提高生活质量,值得临床推广。
- 宋盈蔡晓军桂萍邰云燕苟志斌
- 关键词：非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变吉非替尼多西他赛
- miR-200a通过β-catenin/TCF-4信号通路抑制胃癌细胞系生长侵袭能力的体外研究被引量：10
- 2012年
- 目的:研究miR-200a通过β-catenin/TCF-4信号通路对SGC7901胃癌细胞增殖活性及侵袭迁移能力的影响。方法:化学合成miR-200a mimics,采用脂质体Lipofectamine 2000转染胃腺癌细胞SGC7901,qRT-PCR检测转染效果,细胞免疫荧光、Western blot检测转染后目的蛋白的表达,TOP/FOP荧光素酶检测β-catenin/TCF-4活性,Transwell、划痕实验检测细胞迁移侵袭能力、MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布的改变。结果:脂质体介导的miR-200amimics转染SGC7901后,β-catenin/TCF-4蛋白的表达均降低,β-catenin的表达出现了细胞核向胞浆的转移。TOP荧光素酶活性下降2.27倍,而FOP荧光素酶活性基本不变。转染miR-200amimics组细胞的增殖活性、迁移、侵袭能力比空白组和阴性对照组明显下降,细胞周期出现G_0/G_1期阻滞。结论:提高miR-200a表达可以降低β-catenin/TCF-4信号通路的活性,抑制SGC7901的生长侵袭迁移能力。
- 苏娟张庆瑜康春生张安玲王涛张洁
- 关键词：胃癌
