目的:检测洛伐他汀(lovastatin,LOV)对N⁃甲基⁃D⁃天门冬氨酸(N⁃methyl⁃D⁃aspartate,NMDA)诱导的兴奋性毒性的神经保护作用并探讨LOV调节NMDA受体功能在神经保护中的潜在机制。方法:培养的大鼠原代神经元细胞分未处理组、LOV组、NMDA组、LOV+NMDA组、谷氨酸(glutamate,Glu)组及Glu+APV(一种特异性NMDA受体拮抗剂)组。免疫荧光染色检测神经元形态,TUNEL分析检测神经元凋亡,免疫印迹测定蛋白水平,生物素化法检测细胞表面受体。结果:①与NMDA组或Glu组少数幸存微管相关蛋白(microtubule⁃associated protein 2,MAP⁃2)阳性神经元相比,LOV+NMDA组和Glu+APV组MAP⁃2阳性神经元的数量明显增多,神经元树突的数目和长度均明显增加(P<0.001);②与NMDA组或Glu组TUNEL阳性细胞显著增多相比,LOV+NMDA组或Glu+APV组TUNEL阳性细胞显著减少(P<0.001);③与未处理组相比,NMDA组NMDA受体蛋白(N⁃methyl⁃D⁃aspartate receptor,NR2B)表达显著减少(P<0.001),而LOV预处理后增加NR2B蛋白表达(P<0.05);④生物素化法检测细胞表面受体显示,NMDA处理导致细胞表面大部分NR2B丢失(P<0.001),LOV预处理能显著减少NMDA诱导的细胞表面NR2B丢失(P<0.05)。进一步研究显示,NMDA处理后,NR2B在酪氨酸(tyrosine,Tyr)1472位点的磷酸化下降(P<0.05),LOV预处理显著恢复Tyr1472位点的磷酸化(P<0.05)。结论:LOV能减轻NMDA诱导的兴奋性毒性损害,这一作用可能与其影响NMDA受体亚单位NR2B的细胞内吞和/或胞内降解,进而调节NR2B表面分布有关。
