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羽衣甘蓝ARC1蛋白的原核表达、纯化及泛素连接酶活性分析被引量：3: 2013年; ARC1是植物特有的一类含有U-box/ARM结构域的蛋白,在芸薹属植物自交不亲和(self-incompatibility,SI)信号转导中起着正向调控因子的作用。将羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)BoARC1编码区的序列连接到原核表达载体pET-14b上,通过酶切鉴定和测序分析,构建pET-14bBoARC1表达质粒;将获得的阳性表达质粒转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS中,利用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示,在分子量69 kD处有BoARC1蛋白特异性地诱导表达;利用Ni2+-NTA树脂通过亲和层析的方法获得BoARC1融合蛋白。在泛素激活酶(E1)、泛素结合酶UBC7(E2)和泛素体外泛素化反应后,通过免疫印迹的方法检测,显示出BoARC1融合蛋白能够将底物进行多泛素化修饰;当U-box中保守位点第323位Pro突变为Ala或其他泛素化组分缺少时,底物不能被泛素化修饰。; 蓝兴国李晓屿杨佳李玉花; 关键词：羽衣甘蓝自交不亲和性原核表达泛素连接酶

羽衣甘蓝不同组织及柱头发育实时荧光定量PCR内参基因的筛选被引量：10: 2016年; 以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)S_(13-b)S_(13-b)自交不亲和系为试材,利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)技术检测Actin、Cpi6、EF-1β、GAPDH、Tub-α3、Tub-α6、Ubc7候选内参基因在不同组织和5个不同发育时期柱头的表达情况,并运用ge Norm和Best Keeper软件统计分析候选内参基因的表达稳定性。在不同组织中,ge Norm软件统计分析的结果表明Tub-α6和EF-1β的表达较稳定;Best Keeper软件统计分析的结果表明Ubc7和Tub-α6的表达较稳定。在不同发育柱头中,ge Norm软件统计分析的结果表明Actin和Ubc7的表达较稳定;Best Keeper软件统计分析的结果表明EF-1β和Tub-α6的表达较稳定。以筛选到的内参基因Tub-α6和Actin,分别分析羽衣甘蓝柱头S-位点糖蛋白基因(SLG)在不同组织和不同发育时期柱头的表达水平,结果显示出SLG主要在柱头中表达,而且SLG在柱头发育成熟时期表达量达到最高。; 李晗李治龙李晓屿李玉花蓝兴国; 关键词：羽衣甘蓝实时荧光定量PCR 内参基因 SLG

羽衣甘蓝泛素结合酶ubc7基因分离、原核表达及纯化被引量：2: 2013年; 为分离羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S13-b S13-b)泛素结合酶7(ubc7)基因,探讨Ubc7重组蛋白的原核表达及纯化。利用CTAB的方法提取羽衣甘蓝柱头总RNA,通过RT-PCR的方法分离ubc7基因,将编码ubc7基因的cDNA序列亚克隆到pET-14b原核表达载体中,将阳性重组表达质粒转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS中,利用IPTG进行诱导表达,并通过Ni2+-NTA树脂进行亲和层析的方法纯化重组蛋白。结果表明,获得的Boubc7含有一个长度为501 bp的开放读码框,编码一个含有166个氨基酸残基的蛋白质。预测BoUbc7的相对分子质量约为18.7 kDa,理论等电点(pI)为5.35。利用IPTG诱导的细菌蛋白中,SDS-PAGE显示出在分子量大小23 kDa处有蛋白特异性的表达,这与预测的His6融合的BoUbc7蛋白分子量相符;利用Ni2+-NTA树脂进行亲和层析纯化后,成功获得了BoUbc7融合蛋白。该试验分离了羽衣甘蓝ubc7基因,并通过原核表达系统获得了BoUbc7重组蛋白,为进一步分析其生物学功能奠定了基础。; 蓝兴国李晓屿杨佳王艳红李玉花; 关键词：羽衣甘蓝泛素结合酶原核表达

单克隆抗体在植物研究中的应用: 2013年; 单克隆抗体是现代生命科学研究的重要工具。随着分子生物学的发展,单克隆抗体在植物研究中发挥着越来越重要的作用。本文综述了单克隆抗体在蛋白表达、蛋白定位、蛋白相互作用、植物成分的定性与定量、植物成分纯化、植物病害检测、标签抗体等方面研究中的应用。; 李晓屿李玉花蓝兴国; 关键词：植物单克隆抗体蛋白表达蛋白定位蛋白质相互作用

植物葡萄糖磷酸变位酶的研究进展被引量：7: 2015年; 葡萄糖磷酸变位酶(PGM)是生物新陈代谢的关键酶,可催化葡萄糖-1-磷酸和葡萄糖-6-磷酸相互转化。在植物中,PGM分为胞质型PGM和质体型PGM。胞质型PGM参与蔗糖的代谢;质体型PGM参与淀粉的合成。近期发现,PGM在植物生长发育中起到重要作用。本文主要对植物中葡萄糖磷酸变位酶的分类、分子性质及功能等方面进行综述。; 李晓屿李玉花李晗李治龙蓝兴国; 关键词：葡萄糖磷酸变位酶蔗糖代谢淀粉合成植物发育

植物增殖细胞核抗原的结构与功能被引量：1: 2016年; 增殖细胞核抗原(PCNA)是真核生物细胞中一类保守蛋白,在DNA复制、DNA修复及细胞周期调控过程中具有非常重要的作用。我们简要介绍植物PCNA的结构、表达调控及其功能的研究进展。; 李治龙李晗李晓屿李玉花蓝兴国; 关键词：增殖细胞核抗原 DNA复制 DNA修复细胞周期调控

羽衣甘蓝ARC1与Exo70A1蛋白相互作用结构域的分析与鉴定被引量：4: 2015年; 为阐明羽衣甘蓝自交不亲和信号传递因子ARC1与下游底物Exo70A1相互作用的结构域,利用酵母双杂交系统进行检测与分析。将羽衣甘蓝Bo ARC1、Bo ARC1-N端(1~279 aa,含有UND结构域)及Bo ARC1-C端(280~663 aa,含有U-box结构域和Arm repeat结构域)的序列分别构建到p GBKT7载体中,获得BD-ARC1、BD-ARC1-N和BD-ARC1-C重组质粒。将羽衣甘蓝Bo Exo70A1、Bo Exo70A1-Δ1(1~85 aa)、Exo70A1-Δ2(1~270 aa)及Exo70A1-Δ3(271~638 aa,含有Exo70结构域)的序列分别构建到p GADT7载体中,获得AD-Exo70A1、AD-Exo70A1-Δ1、AD-Exo70A1-Δ2和AD-Exo70A1-Δ3重组质粒。将获得的重组质粒分别共转化到酵母Y187菌株中,在双缺陷(-Leu-Trp)酵母培养基中培养与生长。β-gal显色检测结果表明,共转BD-ARC1-N/Bo Exo70A1-Δ1或BD-ARC1-N/Bo Exo70A1-Δ2的酵母在滤纸上显示蓝色,这说明Bo ARC1的N端与Bo Exo70A1的N端介导了两者的相互作用。; 曹明明杨佳李晓屿李玉花蓝兴国; 关键词：羽衣甘蓝自交不亲和性结构域

SRK-SCR转基因拟南芥自交不亲和性的研究进展被引量：3: 2013年; 十字花科植物自交不亲和性(SI)受S-位点(S-locus)编码的SRK和SCR控制,它们分别是柱头和花粉中的SI特异识别因子。野生型拟南芥不具有SI,而近来通过转基因手段将外源SRK-SCR基因转入野生型拟南芥可以使其表现SI,由此建立了一个可用于十字花科SI研究的新型模式植物。本文综述了利用这种转基因拟南芥在SI机制及进化方面取得的进展,包括SI新基因的挖掘、候选基因功能分析和拟南芥生殖模式的转变等。; 郝艾馨蓝兴国王宇李玉花; 关键词：自交不亲和性拟南芥 SRK SCR

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