国家自然科学基金(31030058)
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 相关作者：曾林游颖孙兆增沈欢欢刘冰更多>>
- 相关机构：军事医学科学院北京工商大学第三军医大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 小鼠Uncv基因克隆及真核表达被引量：3
- 2012年
- 目的克隆小鼠的Uncv基因并在真核细胞表达。方法采用RT-PCR方法扩增小鼠皮肤组织中Uncv基因编码区,以真核表达质粒pcDNA 3.1-Flag为载体,构建Uncv真核表达质粒,将重组载体转染Hela细胞并用Western blot法检测基因表达。结果构建Uncv基因真核表达载体pcDNA 3.1-Flag/Uncv,重组质粒在Hela细胞中有效表达约95×103的融合蛋白。结论成功构建真核表达载体pcDNA 3.1-Flag/Uncv,并且在真核细胞中有效表达,为研究Uncv基因生物学功能奠定基础。
- 徐嫄徐嫄刘冰李文龙胡仲明曾林
- 关键词：克隆真核表达毛囊
- Noggin基因沉默对BMP和Wnt信号通路表达的影响被引量：6
- 2016年
- 目的检测分析Noggin基因沉默对毛囊发育中BMP和Wnt信号通路的影响。方法采用实时荧光定量PCR和western blot技术对Noggin基因沉默的MC3T3-E1稳转细胞系中BMP-2、BMP-4、BMPR-IA、BMP-6、BMP-7、LEF-1、β-catenin的表达情况进行检测分析。结果实时荧光定量PCR结果显示,BMP信号通路中的五个基因的表达都受到Noggin基因沉默的显著的影响,其中BMP-2(P<0.001)、BMP-4(P<0.01)、BMP-6(P<0.001)、BMP-7(P<0.001)表达量均升高;BMPR-IA(P<0.01)表达量降低。同时Wnt信号通路中的两个基因LEF-1(P<0.001)、β-catenin(P<0.001)的表达也都显著降低。Western blot结果显示,两条信号通路中这几种蛋白的表达也都受到影响,其中显著升高的有BMP-2(P<0.05)、BMP-4(P<0.05)、BMP-6(P<0.05)和BMP-7(P<0.05);显著降低的是β-catenin(P<0.05)、BMPR-IA(P<0.01)和LEF-1(P<0.001)。结论在体外Noggin基因对BMP信号通路可能存在反馈性抑制机制,而对Wnt信号通路存在反馈性激活机制,为下一步探究在体内Noggin基因对BMP和Wnt信号通路表达的作用提供一定的依据。
- 马雨楠游颖沈欢欢孙兆增曾林法云智
- 关键词：WNT信号通路毛囊
- 过表达小鼠UNCV蛋白质对HeLa细胞凋亡的影响
- 2013年
- 目的研究小鼠UNCV蛋白质对HeLa细胞凋亡的影响。方法将BALB/c小鼠Uncv基因重组质粒转染HeLa细胞,筛选出稳定过表达UNCV蛋白质的HeLa细胞株。通过细胞计数法和流式细胞术,检测过表达UNCV蛋白质对血清饥饿和阿霉素诱导的HeLa细胞凋亡的影响。结果获得稳定正确过表达UNCV蛋白质的HeLa细胞株。细胞计数和流式细胞术结果显示过表达UNCV蛋白质对血清饥饿诱导的HeLa细胞凋亡有抑制作用,对于阿霉素诱导的HeLa细胞凋亡没有显著影响。结论过表达UNCV蛋白质对血清饥饿诱导的HeLa细胞凋亡有抑制作用。
- 刘冰徐嫄赵爽王冬平杨蕾蕾李微尚世臣张广州李文龙曾林
- 关键词：细胞凋亡血清饥饿阿霉素HELA细胞
- 毛囊干细胞及Noggin对其调控作用的研究进展
- 2016年
- 毛囊干细胞(HFSC)通常能够分化为角质细胞、皮脂腺细胞和短暂扩充祖细胞,因其快速增殖的能力,HFSC为细胞的治疗提供了构建干细胞来源的基础。本综述将系统描述HFSC的定位、培养以及分子标志物,为鉴定、分离细胞提供有力的参考。同时针对HFSC增殖和分化调控的关键基因Noggin,从基因发现、分子功能等进行全面阐述,并结合BMP信号通路叙述Noggin调控HFSC研究的最新进展。
- 马雨楠曾林
- 关键词：毛囊干细胞分子标志物NOGGIN
- iRhom2及其突变基因重组慢病毒的包装和稳定表达细胞系的建立被引量：1
- 2015年
- 目的通过重组慢病毒感染,建立iRhom2及其突变基因的Vero细胞稳定细胞表达系,用于iRhom2的功能研究。方法将iRhom2及其突变基因克隆到慢病毒载体Lenti-OE-Flag,构建重组慢病毒载体Lenti-OEiRhom2和Lenti-OE-iRhom2mut,将重组质粒瞬时转染HEK-293T包装细胞,获得重组慢病毒。将重组病毒感染Vero细胞,利用puromycin进行加压筛选,获得二者的重组表达细胞系。结果构建了iRhom2及其突变基因的逆转录病毒载体,并获得了重组逆转录病毒,并利用该病毒获得了二者的稳定表达细胞系。Western-blot实验证实,二者能够在Vero细胞内稳定表达。结论利用重组逆转录病毒感染,成功获得了iRhom2及其突变系的Vero细胞稳定表达株,为进一步研究iRhom2的生物学功能及其机制奠定了良好的基础。
- 游颖马雨楠曾林孙兆增
- 关键词：慢病毒载体包装细胞
- Uncv无毛小鼠无毛基因的分子克隆及序列分析被引量：2
- 2011年
- 目的探讨Uncv无毛小鼠的无毛性状与无毛基因(hairless gene,hr)的相关性。方法参照Gen-Bank上公布的小鼠的hr序列,设计5对引物,用RT-PCR方法对本单位培育的Uncv无毛小鼠hr的编码区序列进行了克隆与分析。结果获得了Uncv无毛小鼠及野生型hr的全部编码区序列(3546 bp)。Uncv无毛小鼠hr基因与野生型小鼠hr基因的长度及序列完全一致,同源性为100%。与GenBank上发表的国外小鼠hr基因序列(Z32675)相比,同源性为99.7%,共10个碱基发生了突变,其中2个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;和昆明小鼠的hr(AY547391)相比,同源性为99.6%,共12个碱基发生了突变,其中3个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;但这些突变是由种属差异造成的。结论 Uncv无毛小鼠的无毛性状产生与hr基因无关。
- 李爱学孙兆增尚世臣王鹏姚晓兰曾林
- 关键词：无毛基因分子克隆
- PKH26和Hoechst 33258联合示踪Uncv无毛小鼠iRhom2及其突变体蛋白
- 2017年
- 目的利用PKH26和Hoechst 33258联合示踪Uncv无毛小鼠iRhom2及其突变体蛋白在Vero细胞中的定位。方法用PKH26对细胞膜进行染色,同时用Hoechst 33258染料对细胞核进行染色,置于激光共聚焦显微镜下观察。结果通过激光共聚焦荧光显微镜观察目的蛋白,发现野生型iRhom2分布在细胞的胞浆,而iRhom2mut于细胞浆内和细胞核内都存在。结论亚细胞定位的不同推测到iRhom2的N末端缺失突变可能对其细胞内的定位有影响。
- 游颖陈丙波曾林
- 关键词：PKH26
- Noggin基因沉默表达载体的构建及效果评价
- 2016年
- 目的构建慢病毒介导的Noggin RNAi干扰序列,并分析这些干扰序列对Noggin基因的沉默效果。方法针对目的基因Noggin的m RNA设计四条干扰序列,并将这些序列连接到Lenti-KD慢病毒载体,将重组质粒瞬时转染HEK-293T包装细胞,获得重组慢病毒。将重组病毒感染MC3T3-E1细胞,利用puromycin进行筛选,获得稳定表达细胞系。通过实时荧光定量PCR和Western blot技术分析不同干扰序列的干扰效果。结果实时荧光定量PCR结果显示,四种干扰序列对Noggin基因的表达都有一定的沉默效果,但只有sh Noggin-1(P<0.01)对其表达影响显著。Western blot结果显示,四种干扰序列中只有sh Noggin-1(P<0.01)对Noggin的表达蛋白具有显著的降低作用。结论获得了一种Noggin基因的干扰序列,该序列能够干扰Noggin基因m RNA的稳定性,从而影响蛋白的表达。该干扰序列可以用于部分敲除Noggin基因,从而用于研究Noggin基因的功能。
- 马雨楠游颖孙兆增曾林
- 关键词：基因沉默
- SV40LT基因过表达慢病毒载体的构建与包装被引量：1
- 2016年
- 目的构建SV40LT基因过表达慢病毒载体,并对其进行慢病毒包装,为建立永生化的uncv小鼠胚胎成纤维细胞奠定基础。方法从293T细胞中获得SV40LT基因,将其克隆到p Lenti-GFP质粒中,构建重组穿梭质粒p Lenti-GFP-SV40LT,测序鉴定后分别将鉴定的阳性p Lenti-GFP-SV40LT和包装质粒p MD2.0G和ps PAX2共转染293T细胞,包装产生慢病毒。结果 SV40LT基因过表达慢病毒载体的构建与包装成功。结论 SV40LT基因过表达慢病毒载体构建与包装的成功为uncv小鼠胚胎成纤维细胞的永生化提供了工具。
- 游颖沈欢欢马雨楠曾林
- 关键词：慢病毒永生化
