国家自然科学基金(30871395)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：欧阳宏佳梁沂梅周天鸿唐冬生张勇更多>>
- 相关机构：华南农业大学佛山大学暨南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技攻关计划广东省粤港关键领域重点突破项目更多>>
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- 人工锌指核酸酶诱导的多位点基因打靶的研究
- 引言基因打靶的同源重组发生率很低,难以满足基因打靶的应用要求。锌指核酸酶可以诱导DNA特定位点的双链断裂,从而大大提高同源重组的发生率。本研究小组建立了一种以rRNA基因间的内部转录间隔序列为
- 唐冬生蒋泓曾芳王克振黄永芬梁沂梅张细权
- 关键词：基因打靶锌指核酸酶转基因动物
- 文献传递
- 锌指核酸酶介导的高效多位点基因打靶被引量：4
- 2012年
- 该研究旨在建立锌指核酸酶介导的多位点基因打靶技术,为获得稳定遗传的转基因动物或基因治疗临床应用解决技术难题.首先利用OPEN平台设计、构建能识别人基因组内rDNA基因间隔序列的锌指蛋白基因序列,与FokⅠ的切割结构域连接、表达后获得锌指核酸酶基因,再构建锌指核酸酶真核表达载体.另外,构建含有2条同源重组引导序列和绿色荧光蛋白基因(EGFP)的多位点基因打靶载体.将锌指核酸酶真核表达载体和多位点基因打靶载体共转染HEK293细胞,内参对照PCR-灰度分析法检测外源基因定点整合效率,结果显示单独转染多位点基因打靶载体的定点整合效率为6.8%;而由于锌指核酸酶在染色质DNA上切割rDNA基因的间隔序列,诱导高效同源重组,锌指核酸酶载体、多位点基因打靶载体共转染的定点整合效率为24.2%,较常规基因打靶定点整合率(10-6～10-5)提高了24000多倍.共转染的HEK293细胞在无任何筛选的条件下持续培养2个月,经过20次传代之后,子代细胞能够持续表达EGFP,提示表达稳定.本研究建立了锌指核酸酶介导的高效多位点基因打靶技术,不仅大大提高了外源基因的定点整合效率,而且兼顾了基因表达的稳定性和安全性,为动物定点转基因和人类基因治疗提供了重要的技术平台,具有广泛的应用前景.
- 唐冬生蒋泓刘芳王克振张勇曾芳梁沂梅邓廷贤欧阳宏佳李月琴张细权周天鸿
- 关键词：锌指核酸酶基因打靶同源重组转基因动物基因治疗
