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RNF8在前列腺癌细胞中的表达与定位被引量：1: 2013年; 目的:构建Flag-RNF8真核表达质粒,证实融合蛋白在前列腺癌细胞内的表达与定位。方法:提取人前列腺癌细胞CWR22RV1总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增RNF8全长编码区cDNA序列,亚克隆至含有Flag标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到前列腺癌细胞CWR22RV1中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察Flag-RNF8在CWR22RV1细胞内定位。使用免疫沉淀的方法纯化RNF8蛋白。结果:RNF8蛋白全长编码区cDNA克隆到了真核表达载体pcDNA3-Flag中,酶切鉴定片段约为1500bp。Western blot检测到了融合蛋白Flag-RNF8的表达,分子量约为57kDa。Flag-RNF8在CWR22RV1细胞中表达并定位在细胞核中。成功纯化RNF8蛋白。结论:成功构建了Flag-RNF8全长编码区cDNA的真核表达质粒;鉴定了Flag-RNF8融合蛋白的表达并纯化RNF8蛋白;在CWR22RV1细胞中,Flag-RNF8蛋白主要定位在细胞核中。为进一步研究RNF8的生物学特性及其功能奠定了基础。; 尹中波霍云龙周婷婷王春玉赵越; 关键词：WESTERN BLOT 免疫沉淀

雌激素受体ERα的功能调控及相关疾病的研究进展被引量：22: 2011年; 雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)是依赖配体活化转录因子的核受体家族成员之一,参与靶细胞的增殖和分化。ERα活化的经典途径是与雌激素结合后直接作用于靶基因上游的雌激素受体反应元件(ERE),从而诱导靶基因转录。雌激素受体的功能受许多因子调节,包括与之结合的配体、DNA上的顺式元件、募集的辅助调节因子及细胞环境等。在雌激素受体相关疾病中,除乳腺癌和子宫内膜癌外,近年研究表明心血管疾病、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病等疾病也与雌激素受体密切相关。雌激素的生物效应与多种疾病的发生、转归和预后密切相关。本文将综述几类辅助调节因子对雌激素受体介导的基因转录的调控,雌激素受体相关疾病,及环境有害物质对ERα功能的影响。; 刘晓霞翟曜耀赵越; 关键词：雌激素受体

ERα的辅调节因子与乳腺癌关系的研究进展被引量：2: 2011年; 雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)是配体依赖的转录因子,属于核受体超家族成员。ERα介导转录的经典途径是与雌激素结合后作用于靶基因启动子区的雌激素反应元件(estrogen response element,ERE),进而诱导靶基因转录。ERα招募辅调节因子(共激活子和共抑制子)参与ERα介导的基因转录调控。辅调节因子主要通过乙酰化、磷酸化、甲基化等表观遗传机制参与转录调控,影响靶蛋白表达水平。ΕRα介导的基因转录调控在乳腺癌的增殖、分化、侵袭转移等过程中发挥重要作用。综述在ERα介导的基因转录调控中几类辅调节因子对乳腺癌发生发展的影响。; 李丹妮赵越; 关键词：ERΑ 转录调控表观遗传学乳腺癌

雌激素受体α基因shRNAi慢病毒载体的构建与滴度测定: 2012年; 目的:构建雌激素受体(ER)α基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,检测病毒感染细胞的滴度。方法:针对已经筛选确定的ERα基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后的pGCsil-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生shERα-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用shERα-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR和测序证实,成功构建ERα shRNA的慢病毒载体shERα-LV。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108TU/mL。结论:成功构建人ERα基因RNAi慢病毒载体,为ERα在乳腺癌发生发展中的研究提供了基础。; 曾宪旭班振英党秋红楚天骄雷冬梅; 关键词：RNA干扰雌激素受体Α 绿色荧光蛋白质类

TGF-β1上调MTA1促进人舌癌Tca8113细胞侵袭转移被引量：3: 2013年; 目的:研究TGF-β1上调MTA1能否促进人舌癌Tca8113细胞侵袭转移。方法:蛋白印迹和实时定量PCR检测TGF-β1刺激或者不刺激的Tca8113细胞中MTA1和E-cadherin的表达。β-actin作为实验的内参对照。光学显微镜拍摄TGF-β1刺激的Tca8113细胞形态。侵袭实验检测TGF-β1刺激的Tca8113细胞。结果:TGF-β1上调MTA1蛋白和mRNA表达,下调E-cadherin表达水平。Tca8113细胞是呈多边形的口腔鳞状上皮细胞癌,经TGF-β1刺激的Tca8113细胞形态变成长梭形。同时,TGF-β1刺激的Tca8113细胞与对照相比较具有更强的侵袭能力。结论:TGF-β1信号能通过MTA1下调E-cadherin表达,这可能是促进舌癌侵袭和转移的机制之一。; 代炜姚远李彦姝周青; 关键词：转化生长因子Β1 E-钙粘素

ERα介导的基因转录在子宫内膜癌变中的研究进展: 2013年; 雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)是核受体超家族成员,主要以配体依赖的方式发挥其生物学功能。ERα对女性生殖系统发育起作用,影响子宫内膜的增殖与分化。研究证实,ERα介导的基因转录在I型子宫内膜癌变进程中扮演着重要的角色。此外,雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)或雌激素相关受体(estrogen-related receptor,ERR)也参与此过程中,并与ERα有功能联系。主要综述ERα介导的基因转录中参与转录调控的辅助调节因子、ERα下游重要的靶基因及其在子宫内膜癌中的重要作用,为子宫内膜癌的早期发现和治疗提供新的思路和靶点。; 高振家赵越; 关键词：雌激素受体靶基因子宫内膜癌

赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1作用机制及其生物学功能的研究进展被引量：4: 2012年; 与其他化学修饰,如乙酰化、磷酸化、泛素化等相似,组蛋白赖氨酸甲基化是一个可以逆转的组蛋白修饰,是一个动态调节的过程。赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)是一个黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinulcleotide,FAD)依赖性胺氧化酶,它能够特异性脱去H3K4和H3K9位点上的单甲基化和二甲基化的甲基基团。LSD1参与调控核受体介导的基因转录,并分别维持染色质的活性和非活性状态,被誉为细胞深处的基因"开关"。LSD1的功能失衡可引发多种重要生命现象的改变。主要综述LSD1的结构、作用机制及其在肿瘤发生、胚胎发育、体细胞重编程的调控、细胞分裂和造血等过程中生物学功能的研究新进展。; 翟曜耀刘晓霞赵越; 关键词：基因转录调控组蛋白去甲基化酶肿瘤抑制胚胎发育

PPARγ辅调节因子与脂代谢关系的研究进展被引量：3: 2012年; 代谢综合征包括脂代谢异常、向心性肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病等多种代谢异常疾病,严重威胁着人们的健康和生活质量。PPARγ的辅调节因子通过调控PPARγ介导的基因转录参与脂代谢调节,其中PGC-1α通过调控PPARγ介导的下游靶基因的转录等环节,参与调节多种脂代谢通路;SMRT、TRAP和JHDM2a也通过不同的机制调节PPARγ介导的基因转录,参与脂代谢调节。; 齐美玲赵越; 关键词：PPARΓ 转录调控脂代谢异常

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国家自然科学基金(30871390)