广州市医药卫生科技项目(201102A211007)
- 作品数：10 被引量：56H指数：4
- 相关作者：曾其毅宋远斌陈志江车頔王阳更多>>
- 相关机构：南方医科大学广州市妇女儿童医疗中心广东省人民医院更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 解耦连蛋白2在脓毒症大鼠心肌组织中的动态表达变化被引量：1
- 2014年
- 目的探讨解耦连蛋白2与脓毒症心肌损伤发生、发展的关系。方法将40只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、脓毒症6小时组、脓毒症12小时组、脓毒症24小时组、脓毒症48小时组。脓毒症组以腹腔注射内毒素10 mg/kg。各组分别于相应时间点处死动物,采取荧光定量逆转录聚合链反应测定心肌UCP2 mRNA表达,同时应用免疫组化方法检测心肌组织切片中UCP2蛋白表达,应用免疫印迹检测脓毒症大鼠心肌组织UCP2蛋白水平的变化。结果大鼠脓毒症造模后UCP2 mRNA表达从脓毒症6小时组上调并逐渐增加,在24小时达到高峰后回落。脓毒症6、12、24、48小时组心肌UCP2 mRNA为1.31±0.06,2.94±0.40,8.20±1.96和2.15±0.24。与对照组的0.78±0.22相比,12、24、48小时差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。与mRNA水平变化类似,脓毒症6、12、24、48小时UCP2蛋白水平为0.0806±0.0067,0.1063±0.0054,0.1200±0.0057和0.0985±0.0096,均明显高于对照组的0.0516±0.0080(P<0.01)。结论脓毒症时大鼠心肌组织解偶联蛋白2上调,这种变化可能参与脓毒症心肌损伤的病理生理过程,需要进一步研究其作用机制。
- 陈志江王惠丽王阳宋远斌车頔吕娟娟曾其毅
- 关键词：脓毒症心肌解偶联蛋白2
- UCP2基因siRNA转染对脓毒症血清诱导心肌细胞炎症反应的影响
- 2014年
- 目的研究解偶联蛋白2基因(uncoupling protein 2,UCP2)siRNA干扰大鼠H9C2心肌细胞株后对脓毒症血清诱导炎症反应的影响,探讨UCP2在脓毒症心肌病可能的机制。方法制备正常大鼠血清和脓毒症大鼠血清。体外培养大鼠心肌细胞株(H9C2),随机分为空白对照组、正常大鼠血清、10%脓毒症大鼠血清刺激12 h组(脓毒症血清组)、UCP2-siRNA干扰+10%脓毒症大鼠血清刺激12 h组(UCP2-siRNA+脓毒症血清组)、阴性siRNA转染+10%脓毒症大鼠血清刺激12 h组(阴性siRNA+脓毒症血清组)。RT-PCR检测各组TNF-αmRNA,IL-1βmRNA表达;免疫印迹法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达和核转录因子(NF-κB)的表达。结果 UCP2-siRNA+脓毒症血清组p-p38、NF-κB表达量均较脓毒症血清组明显增高(P<0.05);UCP2-siRNA+脓毒症血清组TNF-αmRNA表达量与脓毒症血清组相比明显增加(P<0.01),IL-1βmRNA表达量与脓毒症血清组比较差异无统计学意义。结论 UCP2参与脓毒症血清诱导的H9C2心肌细胞p38MAPK活性和NF-κB与下游炎症介质的表达调控。
- 陈志江宋远斌王惠丽王阳吕娟娟车頔曾其毅
- 关键词：解偶联蛋白2炎症心肌细胞
- 解偶联蛋白2参与脓毒症病理生理机制的研究进展被引量：2
- 2014年
- 解耦联蛋白2（UCP2s）是存在于线粒体内膜上的一种质子转运体，目前研究发现其表达在调控炎性反应、线粒体活性氧族以及在膜电位和能量生成和调节方面具有重要作用，除此之外也参与血糖水平的调节。UCP2s的这些功能参与脓毒症的病理生理过程，具有重要意义。
- 陈志江宋远斌王阳陈东车頔曾其毅
- 关键词：脓毒症解偶联蛋白2病理生理线粒体
- 肠道病毒71型VP1～VP4基因克隆及其表达产物的免疫原性被引量：4
- 2011年
- 目的克隆并表达肠道病毒71型VP1~VP4蛋白基因,初步鉴定其免疫原性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物用8 mol/L尿素洗涤及Ni柱亲和层析纯化后,用肠道病毒71型免疫兔血清和柯萨奇病毒A16型免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA鉴定。结果构建的重组质粒pQE30a/VP1~VP4经IPTG诱导,重组蛋白VP1~VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1~VP4可以被免疫兔血清特异识别。结论肠道病毒71型VP1~VP4蛋白表达载体在大肠杆菌M15中高效表达。纯化产物具有较强的免疫原性,为今后EV71亚单位疫苗的研究和检测试剂盒提供了参考。
- 宋远斌余楠何思杰陈欣欣王斌车小燕曾其毅
- 关键词：肠道病毒71型基因克隆原核表达免疫原性
- 柯萨奇病毒A16型VP1-VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析被引量：4
- 2012年
- 目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒71型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性。结果成功构建的重组质粒pQE30a/VP1-VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1-VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1-VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应。结论在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性。
- 宋远斌何思杰余楠陈欣欣王斌车小燕曾其毅
- 关键词：柯萨奇病毒A16型VP1蛋白VP2蛋白VP3蛋白抗原反应性
- microRNA在脓毒症患儿线粒体功能障碍的研究进展被引量：5
- 2013年
- 脓毒症是各种病原微生物及免疫原性物质引起的全身炎性反应和宿主自身免疫性损伤，进一步发展可致多器官功能障碍综合征。线粒体是细胞中重要的细胞器，通过氧化磷酸化反应为机体提供ATP，对机体生长、代谢、疾病的发生发展等多方面都有重要意义。关于脓毒症的研究在过去的几十年取得了巨大进展。大量研究表明，线粒体功能障碍程度与脓毒症的预后密切相关。microRNA是一类内源性非编码小分子RNA，在基因转录后水平调控基因和生物蛋白表达，进而调节线粒体的生物功能和氧化应激作用，对脓毒症的进程和预后有重要影响。现对microRNA在脓毒症线粒体功能障碍的相关研究作一综述。
- 车頔宋远斌王阳陈志江梁漂红曾其毅
- 关键词：MICRORNA脓毒症线粒体功能障碍氧化应激炎性反应
- 肠道病毒71型感染致中枢神经系统损伤机制的研究进展被引量：14
- 2012年
- 肠道病毒71型(EV71)感染是全球性传染病,发病率高,传染性强,重症感染可出现严重中枢神经系统损伤表现,预后差,病死率高,现就EV71感染致中枢神经系统损伤发病机制作一综述,以期提高临床医师对EV71感染致中枢神经系统损伤机制的认识。
- 宋远斌陈志江曾其毅陈东王阳梁漂红车頔
- 关键词：手足口病肠道病毒71型神经系统损伤
- 持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠肾脏的保护作用及其机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠肾脏是否存在保护作用及其可能机制。方法30只SPF级健康雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分为5组（6只／组）。对照组：腹腔注射生理盐水，并开始持续输注生理盐水1ml／h。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）组和低剂量、中剂量和高剂量去甲肾上腺素组：腹腔注射LPS10mg／kg，LPS组持续输注生理盐水1ml／h，低、中、高剂量组分别持续输注0．06、0．30、0．60μg／（kg·min）去甲肾上腺素溶液1ml／h，均持续输注24h处死大鼠。检测2、6h大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α、白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-6及IL-10水平，24h大鼠血清C-反应蛋白（CRP）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平，膜电位和氧化应激相关指标，电镜观察肾脏线粒体肿胀程度，显微镜观察肾脏病理变化。结果与对照组比较，2hLPS组TNF—α浓度为（2203．3±1028．7）pg／ml、IL-1β（2214．5±457．0）pg／ml、IL-6（7784．7±248．2）pg／ml及IL-10（1076．1±368．4）pg／ml，均明显升高（P〈0．05）；24hCRP（0．35±0．24）mg／L，Cr（30．8±11．5）μmol／L，BUN（7．7±1．8）mmol／L，一氧化氮（1057．4±172．9）μmol／gprot，均明显升高（P〈0．01），肾脏线粒体膜电位0．0464±0．0185，明显下降（P〈0．01）。与LPS组比较，2h低剂量组TNF-d浓度为（506．8±301．7）pg／ml、IL-1β（415．6±178．0）pg／ml及IL-α（381．7±171．0）pg／ml，均明显下降（P〈0．05），24hBUN下降为（5．2±1．4）mmol／L（P〈0．05），线粒体膜电位上升为0．3474±0．1526（P〈0．05）；2h中剂量组TNF-α浓度为（323．9±227．9）pg／ml、IL-1β（700．0±246．2）pg／ml，IL-10（282．6±134．4）pg／ml，均明显下降（P〈0．05），24hCRP下降为（0．17±0．08）mg／L（P〈0．05），线粒体膜电位上升为0．3775
- 梁漂红曾其毅
- 关键词：脓毒症急性肾损害去甲肾上腺素
- 持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠的保护作用被引量：6
- 2013年
- 目的探讨持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠是否具有保护作用及其作用机制。方法40只SD大鼠随机分成5组，内毒素组（n=8）：腹腔注射LPS10mg／kg，同时持续泵注生理盐水1ml／h；低剂量去甲肾上腺素干预组（n=8）、中剂量去甲肾上腺素干预组（n=8）和高剂量去甲肾上腺素干预组（n=8）：腹腔注射LPS10mg／kg，同时持续泵注去甲。肾上腺素生理盐水溶液1ml／h，去甲。肾上腺素用量分别为0．06、0．3、0．6μg／（kg·min）；正常对照组（n=8）：腹腔注射与静脉泵注与其他两组等容量的生理盐水。监测各组大鼠腹腔注射LPS或生理盐水后2h和6h的血清肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β和IL-10水平；24h时点分离肝脏线粒体检测肝脏线粒体膜电位及肝脏线粒体三羧酸循环关键酶异柠檬酸脱氢酶（IDH）和线粒体丙酮酸脱氢酶（PDH）的活性，并电镜观察24h肝脏线粒体形态学变化。结果与正常对照组相比，内毒素组在注射LPS后2h和6h，血清TNF-α、IL-1β和IL-10水平显著升高（P〈0．05），24h肝脏线粒体膜电位显著下降（P〈0．05），线粒体IDH活性和PDH活性显著下降（P〈0．05，P〈0．01）；去甲肾上腺素干预组与内毒素组相比，中剂量组血清TNF—α和IL-1β水平显著下降及IL-10水平显著上升（P〈0．05），而高剂量组肝脏线粒体膜电位、IDH活性和PDH活性显著升高（P〈0．05）。各组间肝脏线粒体超微结构改变的差异不明显。结论脓毒症早期大鼠肝脏线粒体存在可逆性损伤；持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠有明显的保护作用，此保护作用可能与其减轻过度的炎症反应和改善线粒体呼吸功能有关。
- 吴丹曾其毅
- 关键词：去甲肾上腺素内毒素线粒体肝脏
- 《2012拯救脓毒症运动：严重脓毒症、脓毒症休克诊治指南》儿科部分解读被引量：20
- 2013年
- 脓毒症是临床常见危急重症之一。儿童脓毒症更是以其高发病率、高病死率及高治疗费用引起社会的广泛关注。现就最新《2012拯救脓毒症运动：严重脓毒症、脓毒症休克诊治指南》儿科部分进行解读，以期利于临床医师阅读，对指南有更好的理解，更好开展对儿童脓毒症的救治工作。
- 曾其毅宋远斌陈志江康朦梦
- 关键词：严重脓毒症脓毒症休克儿童
