广东省自然科学基金(04103063)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 相关作者：潘艳鞠桂芝李修义孔祥平陈俊杰更多>>
- 相关机构：吉林大学解放军第458医院沈阳药科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生更多>>
- 人肝再生增强因子在毕赤酵母中的表达、纯化和生物学活性的研究被引量：1
- 2007年
- 肝再生增强因子(ALR)是一类胞源性肝细胞生长因子。为在毕赤酵母中分泌表达人肝再生增强因子(rhALR),以色谱法分离纯化后进行体外活性研究,构建表达载体pPICZαA-ALR,经电穿孔转入毕赤酵母中,用0.5%甲醇诱导表达;重组酵母培养上清经SDS-PAGE电泳和western blot鉴定后表明,rhALR以分子量为30kDa的二聚体为主;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中rhALR约占总蛋白的66%,表达量约为40mg/L;经DEAE柱和G75柱纯化后,获得的rhALR纯度大于95%,得率为52%;体外生物学活性实验表明,rhALR能明显促进HepG2、SMMC-7721和NIH-3T3细胞的增殖。
- 陈俊杰孔祥平佟明华李茹冰杨联萍游松
- 关键词：肝再生增强因子毕赤酵母分泌表达分离纯化生物学活性
- 人肝再生增强因子CXXC结构域与生物学活性的关系被引量：1
- 2006年
- 目的:初步探讨人肝再生增强因子蛋白(human augmenter of liver regeneration protein,hALRp)CXXC结构域与生物学活性的关系。方法:根据酶催化反应中巯基浓度的变化,测定目的蛋白巯基氧化酶活性;采用GST-pulldown方法测定目的蛋白与GST-Na+,K+-ATPase融和蛋白体外相互作用;用MTT法检测目的蛋白促进成人肝细胞HL-7702增殖情况;探讨hALR与hALR-C65A(hALRp的CXXC结构域突变)蛋白活性差异。结果:在巯基氧化酶活性实验中,酶活性以转换数(TN)表示,hALR组TN=1.25±0.21,而hALR-C65A组TN=0,与hALR组比较差异有显著性(P<0.05)。但hALR-C65A与GST-Na+,K+-ATPase融和蛋白体外相互作用和促进肝细胞增殖活性与hALRp比较无明显变化。结论:hALRp的CXXC结构在巯基氧化酶活性方面有重要作用,但该结构改变并不影响hALRp与Na+,K+-ATPase的相互作用和促进肝细胞增殖活性。
- 潘艳鞠桂芝佟明华孔祥平
- 关键词：人肝再生增强因子突变体
- 人肝再生增强因子CXXC活性结构的研究被引量：3
- 2006年
- 人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)蛋白序列中有一段保守的Cys-Xaa-Xaa-Cys(CXXC)氨基酸序列,针对hALRp的CXXC结构,对hALR分别进行C65A和Q88C突变,表达、纯化突变体蛋白。体外检测hALRp和突变体的黄素腺嘌呤二核苷酸(flavinadenine dinucleotide,FAD)辅助的巯基氧化酶活性,hALR-FAD和hALRQ88C-FAD组与对照组比较有显著差异(P<0.05),hALR-FAD和hALRQ88C-FAD组之间无差异;hALRC65A-FAD组与对照组比较无差异。结果显示,通过C65A突变将CXXC结构破坏后,该突变体的巯基氧化酶活性完全丧失;通过Q88C突变增加一个CXXC序列后,该突变体的巯基氧化酶活性较hALR-FAD未见明显增加;同时,FAD不仅是hALRp发挥巯基氧化酶活性必须的辅助因子,而且有助于hALRp突变体蛋白的复性。
- 潘艳佟明华鞠桂芝孔祥平
- 关键词：肝再生增强因子
- 人肝再生增强因子FAD辅助的巯基氧化酶活性测定及其活性位点研究被引量：8
- 2006年
- 目的:建立一种灵敏、简便、有效的判断人肝再生增强因子蛋白(ALRp)巯基氧化酶活性的方法,并分析ALRp的CXXC活性结构域在其发挥酶活性中的作用。方法:通过定点突变将ALRp的CXXC结构中的一个半胱氨酸突变为丙氨酸。巯基氧化酶实验分4组:①ALR组;②ALR-FAD组;③ALR突变体-FAD组;④无蛋白对照组。以还原型谷胱甘肽(GSH)为底物,于不同时点测定每组巯基浓度。结果:ALR-FAD组巯基浓度随时间的推移不断下降;其它3组巯基浓度在整个实验中均无明显变化。结论:建立了一种半定量分析ALRp巯基氧化酶活性的方法;并证明ALRp必须在FAD辅助下发挥酶活性,且ALRp的CXXC结构是ALRp具有该酶活性必不可少的部分。
- 潘艳鞠桂芝佟明华李茹冰杨联萍李修义孔祥平
- 关键词：肝再生增强因子突变
- 人ALR205基因治疗大鼠急性肝损伤研究
- 2009年
- 目的研究人肝再生增强因子(augmenter of liver regenerationALR)205基因对大鼠急性肝损伤的治疗作用。方法将200μg/kg重组质粒PCDNA3.1(+)-ALR205尾静脉注射给CCL4致急性肝损伤大鼠,检测血清AST、ALT水平,肝组织病理学变化、肝组织增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigenPCNA)并对照ALR125基因治疗来观察ALR205基因对急性肝损伤的疗效。RT-PCR检测肝组织ALR205 mRNA表达情况。结果重组质粒用于急性肝损伤大鼠后,血清酶学检查结果表明外周血AST、ALT水平显著降低,肝组织病理损害情况大幅度减轻,治疗组肝PCNA指数均明显高于其它组且ALR205比ALR125在促肝细胞增殖方面有明显差异。结论ALR205基因体内表达产物通过促进肝细胞增殖,降低血清AST、ALT水平发挥抗急性肝损伤作用。
- 陈罡孔祥平佟明华游松
- 关键词：肝再生增强因子基因治疗质粒
