广东省海洋渔业科技推广专项项目(A201101C02)
- 作品数：11 被引量：108H指数：6
- 相关作者：卢迈新可小丽朱华平高风英黄樟翰更多>>
- 相关机构：上海海洋大学中国水产科学研究院珠江水产研究所中国水产科学研究院南海水产研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目广东省海洋渔业科技推广专项项目茂名市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶的克隆及原核表达质粒构建被引量：4
- 2013年
- 为进一步了解无乳链球菌表面蛋白C5a肽酶scpB基因免疫表位及毒力作用基团的相关信息,通过提取罗非鱼无乳链球菌基因组DNA,利用特异性引物PCR扩增出scpB基因的全长开放阅读框(ORF)。结果表明,该基因包括3 405 bp的ORF,可编码1 134个氨基酸,与已报道的人源无乳链球菌ScpB的氨基酸同源性达99.74%。利用生物信息学软件DNAstar、Clustal X 2.0和MEGA 5.05及在线分析工具ExPASy ProtParam、NCBIProten blast及Conserved Domain等对推导的氨基酸序列进行分析,结果显示罗非鱼无乳链球菌scpB基因编码的氨基酸序列含有3个催化三联体(catalytic triad)位点、7个假定活性位点(putative active site)、2个特异位点(spe-cific hits),以及4个超家族结构(2个肽酶超家族结构Peptidases-S8-S53 superfamily、1个类纤连蛋白超家族结构DUF1034 superfamily和1个鞭毛钩蛋白超家族结构FlgD-lg superfamily);并且该氨基酸序列有多个抗原表位,推测ScpB蛋白应具有较强的免疫原性,可作为候选的蛋白疫苗成分。将该片段插入原核表达载体pET32a(+),转入大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆,经PCR、酶切及测序鉴定表明成功构建原核表达载体pET32a(+)/scpB。
- 李庆勇可小丽卢迈新朱华平高风英
- 关键词：罗非鱼无乳链球菌克隆原核表达质粒
- 两种环境胁迫下果寡糖对罗非鱼血液中皮质醇及血糖的影响被引量：2
- 2013年
- 为了研究在两种环境胁迫条件下果寡糖(FOS)对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)血液中皮质醇(COR)及血糖(GLU)的影响,在含有6%的中草药饲料中分别添加0 g/kg(对照组)、1 g/kg(A试验组)、3 g/kg(B试验组)和5 g/kg(C试验组)的果寡糖投喂尼罗罗非鱼,进行为期90 d的饲养试验。饲养试验结束后,一部分试验鱼进行致病菌胁迫试验,对试验鱼腹腔注射0.1 mL浓度为1.0×106CFU/mL的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);另一部分试验鱼进行连续48 h的拥挤胁迫(35 g/L水体)试验,分别在0、3、12、24、36、48 h取血样分析其血液中COR及GLU含量。致病菌胁迫试验结果表明,各个组的血液COR及GLU含量在胁迫后前24 h内显著提高,其中A组和B组与对照组相比差异显著;在第24 h各个组都达到了最大值,但随着时间的推移各组中COR及GLU含量逐渐下降,并慢慢恢复至与对照水平保持稳定。拥挤胁迫试验结果表明,在试验前,各组鱼血液中COR及GLU含量无明显差异,试验后3 h,所有组鱼的血液COR及GLU含量都显著上升,上升趋势持续至第12 h和第24 h,其中A组和B组与对照组相比差异显著,C组与对照组相比略低,随后各个组COR及GLU含量开始下降,最终与对照水平保持稳定。由此可见,添加1～3 g/kg的FOS可以有效提高罗非鱼机体的免疫调节能力,缓解鱼类在受到外界刺激引起剧烈的生理变化。
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- 关键词：罗非鱼果寡糖拥挤胁迫皮质醇血糖
- 罗非鱼无乳链球菌鉴定及基于cfb和16S rRNA基因同源性分析被引量：9
- 2013年
- 为进一步阐明不同宿主不同地区无乳链球菌之间的关系,本研究从细菌形态学、生理生化、16SrRNA和cfb基因等方面,鉴定了2009—2011年广东、海南等地区的25株罗非鱼链球菌病原。同时结合全球不同宿主来源的84株链球菌16SrRNA基因序列,利用Modeltest3.7、MEGA3.0、MrBayes3.0b4进行综合系统发育分析。结果表明:2009—2011年罗非鱼链球菌病原均为无乳链球菌且它们在进化上聚为一个支系,说明2009—2011年广东、海南等地区罗非鱼无乳链球菌病原具有相同的起源。此外,罗非鱼无乳链球菌与法国人源、美国人源、牛源以及日本猪源等无乳链球菌均以高支持率(100)聚在一个支系,说明全球不同宿主来源的无乳链球菌亦具有相同的进化起源,同时也证明了中国罗非鱼无乳链球菌的潜在人畜共患性,这是国内首次对不同宿主无乳链球菌进行系统发育研究。
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- 关键词：罗非鱼无乳链球菌系统发育
- 复方中草药对尼罗罗非鱼非特异性免疫功能的影响被引量：22
- 2015年
- 研究了在饲料中添加一种以鱼腥草为主要成分(占40%)的复方中草药制剂对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)非特异性免疫指标的影响。将鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花等10种中草药按一定比例充分粉碎后混匀制成以鱼腥草为主要成分的复方中草药制剂,按质量分数0%(对照组)、1%(A组)、3%(B组)和6%(C组)分别添加到基础饲料中饲喂尼罗罗非鱼,饲养12周。分别在第4、8和12周采集各组尼罗罗非鱼血液,测定相关非特异性免疫指标。结果显示:从第8周开始,B组尼罗罗非鱼血清丙二醛(MDA)含量显著降低,C组尼罗罗非鱼血清溶菌酶(LSZ)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力、一氧化氮(NO)含量显著提高,MDA含量显著降低。在第12周,B组和C组尼罗罗非鱼白细胞吞噬百分比、吞噬指数和血细胞呼吸爆发活力、血清SOD活力、LSZ活力、NO含量都显著提高,MDA含量则显著降低。结果表明:在饲料中添加3%和6%质量分数的以鱼腥草为主要成分的复方中草药制剂均能增强尼罗罗非鱼的非特异性免疫力,其中以添加比例为6%的效果最好。
- 张意敏刘志刚卢迈新朱华平可小丽高风英黄樟翰
- 关键词：中草药非特异性免疫
- 果寡糖对尼罗罗非鱼非特异性免疫及抗病力的影响被引量：5
- 2014年
- 为研究果寡糖(FOS)对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)非特异性免疫及抗病力的影响,分别用含不同浓度果寡糖(0 g/kg(对照组)、1 g/kg(A组)、3 g/kg(B组)、5 g/kg(C组))的饲料饲喂尼罗罗非鱼。在30、60、90 d分别取样测定其血清免疫指标,并在试验结束时用无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)对其进行攻毒。结果显示:A组尼罗罗非鱼血清中溶菌酶(LSZ)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力显著高于对照组;丙二醛(MDA)含量显著低于对照组;而碱性磷酸酶(AKP)活性和一氧化氮(NO)含量与对照组无显著差异。B组血清AKP活性显著高于对照组,且第60天时的SOD和AKP活力及第90天时的CAT活力都显著高于A组。C组血清中LSZ、SOD、AKP和CAT活力及MDA和NO的含量与对照组相比在各时间点均无显著差异。用无乳链球菌对各组罗非鱼进行攻毒试验后结果显示,A组和B组的相对保护率分别为55.81%和67.44%,而C组仅为6.9%。结果表明:投喂适量的果寡糖可有效改善尼罗罗非鱼非特异性免疫指标,显著提高尼罗罗非鱼对无乳链球菌的抵抗能力,降低其死亡率。
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- 关键词：果寡糖非特异性免疫
- 莫荷罗非鱼幼鱼耐盐性能的初步研究被引量：5
- 2015年
- 以橙色莫桑比克罗非鱼与荷那龙罗非鱼的杂交子代莫荷罗非鱼（Oreochromis mossambicus♀×O.hornurum♂）为实验材料,通过急性耐盐实验和慢性耐盐驯化实验,对其幼鱼耐盐性进行了初步研究。结果表明：莫荷罗非鱼的96 h半致死盐度为（33.74±0.94）‰;在每天将盐度提高8‰的情况下,其半致死盐度为（112.93±4.87）‰,驯化致死盐度为128‰-136‰。实验表明,莫荷罗非鱼经过驯化可以耐受更高盐度的水环境,具有在海水中养殖的潜力。
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- 关键词：耐盐性
- 几种保水剂对冻罗非鱼片的保水效果被引量：11
- 2014年
- 比较了海藻酸钠、黄原胶、谷氨酰胺转氨酶和复合磷酸盐对罗非鱼片的保水效果,以浸泡增重率和解冻损失率为评价指标,得出4种物质对罗非鱼片的最佳保水浓度分别为海藻酸钠0.7%、黄原胶0.7%、谷氨酰胺转氨酶0.6%和复合磷酸盐2%。进一步测定了各物质使用最佳浓度处理的罗非鱼片在-20℃冻藏期间的蒸煮损失率、水分含量、持水力及质构指标,结果表明:与鲜样相比,经保水剂处理的罗非鱼片蒸煮损失率减少,水分含量增加,持水性提高。海藻酸钠、黄原胶和谷氨酰胺转氨酶保水效果显著,可以用来替代复合磷酸盐。
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- 关键词：罗非鱼片保水剂保水效果
- 4种罗非鱼不同组织中HSP70基因对盐胁迫的响应被引量：2
- 2015年
- 为了从分子水平评估莫桑比克罗非鱼、荷那龙罗非鱼及其正交子代（莫桑比克罗非鱼♀×荷那龙罗非鱼）和反交♂子代（荷那龙罗非鱼♀×莫桑比克罗非鱼）的耐盐性能,利♂用RT-PCR方法研究了盐胁迫下这4种罗非鱼不同组织中（鳃、肾、垂体和肌肉）热休克蛋白70（HSP70）基因的表达规律。结果表明：在盐度为22条件胁迫下4种罗非鱼各组织中HSP70表达水平总体呈现先增加后降低的规律,24 h时达最大值,48 h时下降至初始水平;盐度提高至35后HSP70的表达无显著变化。但不同种罗非鱼及不同组织之间也存在差异,反交子代鳃中HSP70在整个盐胁迫过程中都未上调表达;在盐度为22条件胁迫下,正反交子代肾中HSP70基因表达量比父母本肾中HSP70更早达到峰值;反交子代垂体中HSP70表达量在0~48 h内持续缓慢增加,48 h时达最大值;莫桑比克罗非鱼肌肉中HSP70基因在盐度22条件胁迫下表达量迅速升高,且维持较高水平直至盐度35条件胁迫之后。结果表明：HSP70表达水平的高低与罗非鱼的耐盐能力和应激程度密切相关,其中盐胁迫下肾中HSP70的表达规律与以上4种罗非鱼的耐盐能力之间相关性较强,可以作为评价这4种罗非鱼耐盐能力的潜在分子指标。
- 刘志刚刘玉姣卢迈新朱华平可小丽高风英曹建萌王淼
- 关键词：盐胁迫HSP70基因
- 罗非鱼无乳链球菌Sip基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：26
- 2012年
- 表面免疫原性蛋白(Surface Immunogenic Protein,Sip)是B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)的一种表面蛋白,在GBS多种血清型的菌株中均有表达。研究从实验室分离到的罗非鱼无乳链球菌广东株的基因组DNA中扩增出Sip基因,构建原核表达载体pColdII-Sip,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)菌株。经诱导表达、SDS-PAGE电泳检测显示重组蛋白主要以可溶形式表达。重组蛋白用亲和层析的方法纯化,蛋白纯度达98%。纯化后的重组蛋白免疫罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)以分析其免疫原性。受免鱼免疫14d后进行人工攻毒试验,免疫组的相对保护率为70%—87%。酶联免疫吸附试验(Elisa)显示受免鱼对重组蛋白产生了较好的免疫应答,免疫剂量为3μg/g和5μg/g时受免鱼血清抗体滴度可达1:128000。研究结果显示重组蛋白Sip具有较强的免疫原性和保护作用,Sip基因可作为罗非鱼链球菌基因工程亚单位疫苗候选基因。
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- 关键词：罗非鱼无乳链球菌原核表达免疫原性
- 海南罗非鱼无乳链球菌血清型及耐药性研究被引量：22
- 2013年
- 为研究罗非鱼无乳链球菌(S.agalactiae)的血清型与耐药性之间的关系,本研究对2010年～2011年从海南省各地罗非鱼养殖场中分离到的24株病原菌进行常规细菌鉴定,结果显示,病原菌革兰染色阳性、球形、短链状,β溶血,结合16S rRNA基因鉴定确认24株病原菌均为无乳链球菌。PCR法扩增菌株荚膜多糖(cps)基因鉴定其血清型,表明24株无乳链球菌血清型均为Ⅰa型。采用K-B纸片扩散法检测分离菌株对31种常用抗生素的敏感性,结果表明多数菌株对氨基糖苷类和喹诺酮类药物敏感率低,对强力霉素敏感。对于多数抗生素,2011年分离的菌株敏感率明显低于2010年分离的菌株。本研究表明近两年海南省罗非鱼无乳链球菌血清型与菌株耐药性之间无直接相关关系。该结论为罗非鱼无乳链球菌耐药性监测、血清分型及综合防控提供实验依据。
- 霍欢欢可小丽卢迈新李庆勇高风英朱华平黄樟翰
- 关键词：无乳链球菌耐药性监测血清型罗非鱼分离菌株基因鉴定
