福建省重点科技计划项目(2010Y0045)
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 相关作者：兰风华富显果廖娟张朵郭小燕更多>>
- 相关机构：南京军区福州总医院中国人民解放军厦门大学更多>>
- 发文基金：福建省重点科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脆性X精神发育迟缓基因1(FMR1)真核表达载体的构建及其应用被引量：1
- 2016年
- 目的构建人脆性X精神发育迟缓基因1(FMR1)真核表达载体,建立稳定转染FMR1的He La细胞系。方法采用PCR扩增出人FMR1的c DNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入p EGFP-N2真核表达载体中,并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定。用脂质体将验证的重组质粒转染至He La细胞,通过G418筛选建立FMR1稳定转染的He La细胞系。进一步运用Western blot法、免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术鉴定FMR蛋白(FMRP)在He La细胞中的表达及定位。结果双酶切和DNA测序结果表明p EGFP-N2-FMR1真核表达质粒构建成功。Western blot和激光共聚焦显微镜结果显示GFP-FMRP融合蛋白在He La细胞中成功表达且主要定位在细胞质。结论成功建立FMR1稳定转染的He La细胞系并可以表达FMRP。
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- 关键词：真核表达免疫荧光技术
- 脆性X综合征致病基因FMR1的新型可变剪接及其意义
- 脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)是一种常见的遗传性智力低下疾病.其致病基因——脆性X智力障碍1基因(fragile X mental retardation 1 gene,FMR1)定位克隆于...
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- 关键词：脆性X综合征FMR1可变剪接比较基因组学
- 甲基化特异性熔点曲线分析检测FMR1基因CpG岛甲基化状态方法的建立
- 2012年
- 目的建立一种可靠的检测脆性X智力障碍1基因(FMR1)CpG岛甲基化状态的方法。方法用亚硫酸氢钠对基因组DNA进行脱氨基修饰,以修饰后的DNA为模板,利用荧光定量PCR仪扩增FMR1基因CpG岛序列并进行熔点曲线分析,并对PCR产物进行克隆测序,验证其甲基化状态。结果分析包含10个CpG位点FMR1基因CpG岛105bp片段显示,非甲基化与甲基化引物扩增产物之间熔点温度相差2.5℃;克隆测序显示两者之间未被修饰的胞嘧啶相差7个。结论所建立甲基化特异性熔点曲线分析方法可以有效地检测FMR1基因CpG岛甲基化状态,为临床诊断脆性X综合征提供依据。
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- 关键词：脆性X综合征CPG岛甲基化
- 可变剪接及其生物学意义被引量：5
- 2012年
- mRNA可变剪接在脊椎动物中尤其普遍。Johnson等[1]利用芯片杂交技术检测了人类基因组10000多个外显子基因在不同组织和细胞中的可变剪接产物,结果表明至少74%的基因可发生可变剪接。而Wang等[2]研究表明,此比例可达到92%～94%。mRNA可变剪接极大地增加了真核生物基因表达的复杂程度和蛋白质功能的多样性,并且与人类疾病的发生存在密切联系。近来的研究多致力于可变剪接的调控机制、功能相关性可变剪接体数据库的建立及可变剪接产物的生理与病理功能。本文就可变剪接有关进展进行综述。
- 富显果兰风华
- 关键词：可变剪接剪接体
- 人外周血淋巴细胞FMRP的免疫细胞化学分析方法的建立
- 2012年
- 目的建立免疫细胞化学方法检测脆性X智力障碍蛋白(FMRP),进而实现脆性X综合征(FXS)的初步筛查。方法对20份正常样本及疑似FXS患者的标本进行免疫细胞化学染色和免疫荧光染色并计数阳性率。结果带绿色荧光的FMRP在淋巴细胞胞浆中表达与免疫组化相一致,正常标本正常阳性表达率范围为82%～96%,该疑似FXS患者的阳性细胞表达率为90%。结论可采用外周血淋巴细胞FMRP免疫细胞化学方法进行FXS的初步筛查。
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- 关键词：脆性X综合征免疫细胞化学
- 人EIF2B4基因一个新的可变剪接产物及其鉴定
- 2012年
- 目的对人EIF2B4基因新的可变剪接产物进行鉴定。方法应用长链RT-PCR技术扩增人外周血EIF2B4基因编码区全长序列并进行T克隆及序列测定,用常规RT-PCR对新型可变剪接产物进行验证。结果在EIF2B4基因转录产物中检测出正常变异体2和3(两者只相差3个碱基),同时发现一个外显子7缺失26bp的转录产物。结论利用长链RT-PCR结合T克隆-测序的方法,发现人EIF2B4基因的一个新型可变剪接产物。
- 周春燕富显果廖娟张晓张朵兰风华
- 关键词：剪接体内含子逆转录聚合酶链反应
