广西壮族自治区自然科学基金(0640085)
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西医疗卫生重点科研课题国家自然科学基金更多>>
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- 转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应被引量：1
- 2008年
- 目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4·1-CMVneo表达质粒,并做酶切及测序鉴定。用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitativePCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白表达。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86·4%、86·1%和81·5%、79·6%。结论:pSilencer4·1-E2F-1重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础。
- 尹永硕肖强谢玉波李雷王长青唐振勇马玉林崔建华
- 关键词：胃癌MGC803细胞E2F-1重组表达质粒
- 转录因子E2F-1 siRNA对胃癌MGC803细胞体外侵袭及增殖能力的影响被引量：7
- 2008年
- 背景与目的:转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系。本研究通过转染人E2F-1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1表达及侵袭和增殖能力的影响。方法:用脂质体LipofectamineTM2000将具有短发夹结构的人E2F-1siRNA表达质粒转染至MGC803细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白的表达;应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1 siRNA表达质粒对MGC803细胞侵袭力和增殖能力的影响。结果:成功转染E2F-1 siRNA表达质粒48h后,MGC803细胞中E2F-1基因mRNA表达的抑制率超过90%;与未转染组及阴性对照组细胞比较,E2F-1蛋白的表达分别降低81.5%和79.6%。转染pSilencer4.1-E2F-1质粒组的穿膜细胞数(18.0±2.6)与阴性对照组(48.0±4.6)和空白对照组(54.0±5.6)比较差异有统计学意义(P<0.05),其细胞集落形成数(46.0±2.0)与阴性对照组(122.3±1.5)和空白对照组(128.7±2.1)比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:E2F-1siRNA表达质粒可显著下调E2F-1基因在胃癌MGC803细胞中的表达,在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖。
- 尹永硕肖强谢玉波李雷王长青马玉林唐振勇
- 关键词：E2F-1MGC803细胞增殖
- 小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察小分子干扰RNA（siRNA）对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响。方法将实验组（E2F-1-siRNA）和阴性对照组（negative control-siRNA）转染进MGC803细胞，48h后采用实时定量聚合酶链反应（PCR）及Western blot技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（M3T）比色法检测MGC803细胞增殖的变化，流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化。结果E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖，与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84．8％和85．3％（F=14．35，P〈0．05），蛋白降低了77．2％和79．6％，MGC803细胞增殖分别抑制了69．0％和81．6％，差异有统计学意义（F=170．18，P〈0．05）；同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2／M期附近，G2／M期DNA含量比例为（54．98±3．46）％，与阴性对照组（44．70±3．82）％和未转染组（31．47±2．12）％比较，差异有统计学意义（F=88．90，P〈0．05）。结论E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达，使G1期细胞的DNA含量下调，细胞分裂停滞在G2／M期附近，抑制胃癌细胞的增殖。
- 尹永硕李雷谢玉波王长青唐振勇马玉林肖强
- 关键词：胃癌小分子干扰RNA细胞周期增殖
- E2F-1基因真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株MKN-45增殖的影响被引量：7
- 2007年
- 背景与目的:E2F-1基因在多种肿瘤细胞中过表达,并表现出抑制或促进肿瘤细胞增殖的不同特性。本研究通过构建E2F-1基因真核表达载体,分析E2F-1过表达对胃腺癌细胞株MKN-45的影响。方法:巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增E2F-1基因片段,用pCMV-HA载体构建真核重组质粒,转染MKN-45细胞(转染COS-7细胞用以鉴定所构建的载体)。Western blot检测转染情况,并通过克隆形成实验、MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,观察E2F-1过表达对MKN-45细胞的影响。结果:pCMV-E2F1-HA重组质粒成功转染MKN-45细胞。转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞形成的克隆数为4.7±1.8,明显少于转染空载体组的30.2±6.7(P<0.01)。转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞增殖随时间而减慢,第5、6、7天的细胞增殖率分别为73.5%、63.5%和56.1%,明显低于转染空载体组(P<0.01)。与转染空载体组相比,表达E2F-1基因的MKN-45细胞在G0/G1期所占比例明显提高(71.4%vs.59.7%,P<0.05),S期所占比例明显下降(18.7%vs.30.7%,P<0.05)。结论:成功构建E2F-1基因真核表达载体,E2F-1过表达可抑制MKN-45细胞的增殖。
- 王长青肖强李雷谢玉波谭宁宫志伟
- 关键词：胃肿瘤MKN-45细胞E2F-1转染增殖
