广东省自然科学基金(04009574)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 大鼠GAD65重组腺病毒载体的构建和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建大鼠GAD65重组腺病毒载体。方法将目的基因大鼠GAD65 cDNA亚克隆到穿梭质粒pShutile启动子CMV的下游,再通过I-CeuⅠ和PI-SceⅠ两个稀有酶切位点,将目的基因GAD65与腺病毒质粒DNA(pAdeno-X)进行体外连接,获得含目的基因GAD65重组腺病毒质粒DNA,后者经限制性内切酶PaeⅠ切割后,两端露出反向末端重复序列(rTR),利用脂质体转染293细胞,获得含目的基因重组腺病毒上清。PCR双引物检测含有目的基因GAD65的片段。结果在挑选的5个空斑中,有4个含GAD65 cDNA阳性重组腺病毒。GAD65重组腺病毒可感染293细胞并在293细胞内进行有效的复制。PCR双引物检测证明含有目的基因GAD65片段,表明利用体外连接法成功构建了含目的基因GAD65重组腺病毒转移载体。结论成功构建了GAD65重组腺病毒,为进一步研究GAD65重组腺病毒的功能提供了条件。
- 陈盛强刘启才陈德忠林勇平孙卫文廖卫平
- 关键词：腺病毒DNA重组谷氨酸脱羧酶65
- 口服重组GAD65蛋白延缓NOD小鼠Ⅰ型糖尿病发生被引量：1
- 2007年
- 目的研究重组GAD65蛋白对NOD小鼠1型糖尿病的预防作用。方法6周龄NOD雌鼠1周3次灌胃重组GAD65蛋白,共32周,观测胰岛炎和糖尿病发病。结果重组GAD65蛋白能明显降低NOD小鼠糖尿病的发生和胰岛炎的严重程度。结论口服重组GAD65蛋白能预防NOD鼠糖尿病。
- 黄月玲郑小玲刘启才林勇平孙卫文陈盛强
- 关键词：NOD小鼠
- 谷氨酸脱羧酶65重组杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达
- 2007年
- 目的构建谷氨酸脱羧酶GAD65基因的杆状病毒重组供体质粒,包装重组GAD65的杆状病毒,感染昆虫细胞进行表达。方法先将已克隆的GAD65 cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接,使pFASTBACHTb-GAD65与DH10BAC感受菌进行转座重组,利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid/GAD65克隆,提取Bacmid/GAD65转染昆虫细胞Sf 9包装杆状病毒,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达,通过免疫荧光、SDS PAGE和Western blot检测表达情况。结果获得了重组GAD65的杆状病毒,细胞能表达出与GAD65单抗结合的蛋白,相对分子质量为65kDa左右,细胞可直接分泌GAD65蛋白至上清。结论GAD65能在昆虫细胞中获得良好表达为研究GAD65的作用及免疫治疗奠定基础,。
- 陈盛强刘启才林勇平孙卫文
- 关键词：谷氨酸脱羧酶65杆状病毒表达系统
