国家自然科学基金(30570412)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：湖北师范学院黄石广播电视大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 大肠杆菌质粒DNA提取方法的优化被引量：3
- 2006年
- 目的:简化操作流程,缩短提取时间,降低试验对操作者的危害。方法:该方法去除酚、氯仿等有害试剂,采用LiCl沉淀去除质粒制备物中小片段核酸(包括DNA和RNA);工程菌生长至对数期时通过加入氯霉素后不仅方便质粒DNA的提取过程中蛋白质的去除,而且可使质粒的拷贝数进一步增加,提高质粒DNA产量的目的。结果:实验改进方法所提取的质粒DNA产量高于常规方法,达到20μg/mL。结论:改进方法提取的质粒DNA,其下游的内切酶消化,PCR、重组质粒鉴定、转化大肠杆菌等实验的结果和重复性都令人满意,完全可用于一般的分子生物学研究。
- 王友如
- 关键词：质粒DNA提取纯化
- 精氨酸激酶C端结构域的克隆及其表达纯化被引量：3
- 2010年
- 精氨酸激酶（Arginine kinase,AK）由一个小的球形N端结构域和一个大的C端结构域构成。将来源于基围虾的AK C端结构域基因成功克隆到了原核表达载体pET-28a上,然后再转入Rosetta进行表达。探讨了AK C端结构域的最佳表达条件,当OD600达到0.5~0.7时,用终浓度为0.2 mmol.L-1的异丙基硫代--βD-半乳糖苷（IPTG）在20℃下诱导培养5~6 h,AK C端结构域在上清中大量表达。采用His-Tag金属螯合亲和层析纯化、不连续梯度咪唑洗脱,得到了电泳纯的AK C端结构域。
- 雷婧万华涛汪劲松王卫东潘继承
- 关键词：精氨酸激酶C端结构域克隆纯化
