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河南省科技攻关计划(122102310633)
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段江波
毛烈
王霈
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张怡青
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一种改进的分泌抗半抗原抗体杂交瘤细胞株筛选方法
2014年
目的:研究解决半抗原分子单克隆抗体制备技术路径中遇到的在阳性杂交瘤细胞株筛选时无法排除载体蛋白间交叉反应影响的问题,以半抗原去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)为例。方法:在NE完全抗原免疫小鼠实施细胞融合后,分别包被牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、BSA-NE、OVA-NE等4种不同抗原的酶标板平行检测细胞培养上清液;挑选BSA、OVA检测结果为阴性,BSA-NE、OVA-NE检测结果为阳性的孔内细胞进行克隆化筛选单克隆细胞。结果:本筛选方法可一次性从8板96孔板中筛选到13个符合要求的阳性孔,经3次克隆化后获得6株特异性强的杂交瘤细胞株。结论:本方法避免了载体蛋白间交叉反应对筛选的影响,改进了传统的单一指标筛选方法,筛选效率更高。
王云龙
段江波
李恒思
王霈
毛烈
张怡青
王国强
王继创
关键词:
半抗原
去甲肾上腺素
去甲肾上腺素完全抗原的制备、鉴定及小鼠体内免疫效果的观察
2013年
目的制备鉴定去甲肾上腺素完全抗原为制备高灵敏度和特异性抗去甲肾上腺素(NE)单克隆抗体提供条件。方法分别用戊二醛法(GA)和碳化二亚胺法(EDC)在pH4.5和pH9.0条件下将NE与载体蛋白(BSA、OVA)耦联制备完全抗原,采用紫外全波长扫描、SDS.PAGE和FeCl,显色反应3种方法进行鉴定;完全抗原腹腔注射小鼠并监测血清抗体效价。结果3种方法鉴定结果表明NE完全抗原制备成功,与pH4.5相比,在pH9.0条件下随着耦联时间的延长,NE的耦联比增加显著。间接ELISA结果显示,“检测抗原”和“免疫抗血清”配组测定时,当包被的“检测抗原”测定同种耦联方法制备的“免疫抗原”免疫小鼠后获得的“免疫抗血清”时,血清抗体滴度观测值高于与“检测抗原”制备方法不同的免疫小鼠抗血清,如:A组(BSA-NE-GA)测定C组抗血清(OVA.NE.GA)时测定结果高于A组测定G组抗血清(OVA—NE—EDC)。结论用制备的NE完全抗原免疫小鼠成功产生了抗NE抗体。
王云龙
段江波
李玉林
程蕾
王继创
张慧茹
毛烈
王国强
关键词:
去甲肾上腺素
半抗原
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