国家自然科学基金(30270602)
- 作品数：13 被引量：38H指数：4
- 相关作者：周士胜张勇杨安钢赖小刚王跃民更多>>
- 相关机构：第四军医大学大连大学解放军第202医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校骨干教师资助计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- siRNA干扰ClC-2表达对人胶质瘤U-87细胞增殖的抑制作用被引量：9
- 2006年
- 背景与目的:利用小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究采用siRNA抑制人神经胶质瘤细胞系U-87细胞上容积调控氯通道ClC-2基因的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响。方法:设计和构建两个针对人ClC-2基因的siRNA真核表达载体,并给予酶切鉴定和DNA序列分析鉴定;用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒pSUPER.puro-shRNA和两个重组质粒pSUPER.puro-shRNA-ClC-21、pSUPER.puro-shRNA-ClC-22分别转染入U-87细胞(依次为PP0组、PP1组和PP2组);采用RT-PCR检测ClC-2mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;平板克隆形成实验检测克隆形成率。结果:目的片段成功地连接到真核细胞表达载体pSUPER.puro上。PP1组、PP2组与对照组、PP0组相比较,ClC-2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期:细胞的G1期百分含量分别增加了约30.24%、18.04%(P<0.05)。平板克隆形成试验发现,克隆形成率PP1组[(11.0±1.0)%]、PP2组[(20±3.1)%]明显低于对照组[(46.5±1.6)%]和PP0组[(47.5±2.8)%](P<0.01)。结论:干扰人神经胶质瘤细胞系U-87细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的增殖,提示ClC-2基因可能成为控制人恶性胶质瘤生长的新靶点。
- 杨翔云赖小刚张勇裴建明杨安钢周士胜
- 关键词：胶质瘤RNA干扰增殖
- 尼氟灭酸对大鼠心室肌细胞钠通道及动作电位的影响被引量：3
- 2005年
- 目的:观察尼氟灭酸(niflumicacid,NFA)对大鼠心室肌细胞钠电流及动作电位的影响。方法:分别用全细胞膜片钳及电流钳技术记录单个心室肌细胞电压门控钠电流(INa)和动作电位(AP)。结果:尼氟灭酸(100μmol/L)能可逆性地抑制INa和AP,与对照组比较,抑制的程度分别为:60.1%±12.1%(-30mV,n=6,P<0.01)及78.2%±10.3%(n=5,P<0.01)。天冬氨酸根离子(Asp-)替代细胞外液的氯离子可引起类似尼氟灭酸的作用。结论:尼氟灭酸对钠通道有抑制作用并影响动作电位。
- 杨俊陈艳明王跃民赖小刚周士胜
- 关键词：阴离子通道动作电位钠电流
- 缓冲剂HEPES对大鼠离体心脏缺血/再灌注性心律失常及心功能的影响
- 2005年
- 目的:研究缓冲剂HEPES对离体大鼠心脏缺血/再灌注性心律失常及心功能的影响.方法:将34只大鼠随机分为3组:心功能组(n=10),心律失常对照组(n=12)和心律失常HEPES组(n=12).在心功能组,先采用KH液(KrebsHenseleit液)灌注60min作为对照,然后改为台氏液灌注20min,最后再恢复为KH液灌注20min.在心律失常对照组和心律失常HEPES组,分别给予KH液和台氏液灌注,并阻断冠脉左前降支30min,接着再灌注30min.观察心功能指标及心律失常严重程度变化.结果:HEPES可使左室收缩峰压(LVSP),左室发展压(LVDP),左室压变化速率(±LVdp/dtmax)明显降低(P<0.05),使缺血性和再灌注性心律失常积分值明显减少(P<0.05).结论:在采用大鼠离体心脏灌注模型的心功能和心律失常研究中,必须充分考虑HEPES对实验结果可能造成的影响.
- 朱军王跃民马恒张鹏周士胜
- 关键词：心律失常缺血再灌注
- 尼氟酸对大鼠体外心脏缺血-再灌注性心律失常及心功能的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:观察氯通道阻断药尼氟酸(NFA)对大鼠体外心脏缺血再灌注性心律失常及心功能的影响。方法:采用大鼠Langendorff体外心脏灌注模型,阻断冠状动脉,模拟心肌缺血,观察心功能指标、心率和心律失常积分值的变化。结果:NFA(10μmol/L)可使缺血性心律失常分数值明显降低(P<0.01),但对再灌注性心律失常无明显影响;NFA对体外大鼠心脏具有明显的负性变时和变力作用(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:氯通道阻断药NFA具有明显的抗缺血性心律失常作用。
- 朱军王跃民马恒张鹏杨俊赖小刚周士胜
- 关键词：缺血-再灌注损伤心律失常氯通道
- 人ClC-2基因小分子干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2基因片段。将该片段连接至经BglⅡ和HindⅢ双酶切的真核细胞表达载体pSUPER.puro的多克隆位点,转化扩增提取质粒;对重组质粒进行EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定。脂质体L ipofectam ineTM2000介导瞬时转染,通过RT-PCR检测人胶质瘤细胞系BT-325细胞中C lC-2mRNA表达。结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与真核细胞表达载体pSUPER.puro连接正确。转染两重组质粒细胞的C lC-2 mRNA表达明显降低。结论:成功构建人C lC-2基因干扰真核表达载体2个,分别命名为pSUPER.puro-siC lC-21和pSUPER.puro-siC lC-22,可用于进一步研究C lC-2基因对人胶质瘤侵袭和迁移活动的影响。
- 杨翔云张勇赖小刚裴建明杨安钢胡玉珍周士胜
- 关键词：人胶质瘤RNA干扰
- 容量调控氯通道基因siRNA表达载体的构建及其沉寂效应检测被引量：2
- 2005年
- 目的:构建针对容量调控氯通道基因(CLC3)的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对CLC3基因的干扰作用.方法:设计CLC3靶向的发夹状siRNA,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPER载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体转染法转染胃癌细胞SGC7901,通过RT PCR、间接免疫荧光检测CLC3基因表达水平的变化.结果:把针对CLC3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pSUPER载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确,稳定转染人胃癌细胞SGC7901后,RT PCR、间接免疫荧光检测表明,CLC3基因的表达水平明显降低.结论:构建了针对CLC3基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制CLC3基因表达.
- 张勇贾林涛李庆霞王成济周士胜杨安钢
- 关键词：RNA干扰胃肿瘤
- 容积调控氯通道的研究进展
- 2004年
- 细胞在低渗环境中出现渗透性膨胀 ,随后细胞内的溶质及水分外流 ,使已膨胀的细胞容积向正常容积转化 ,此过程称为调节性细胞容积减小 (RVD) ,它是哺乳动物细胞普遍存在的现象。容积调控氯通道 (VRAC)在这个过程中起重要作用 ,不仅如此 ,最近研究发现VRAC参与了细胞增殖、分化和凋亡过程。
- 田晶沙建慧周士胜陈艳明
- 关键词：细胞增殖凋亡生理功能
- 阴离子替代和阴离子通道阻断剂对大鼠心率和心室收缩的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 :探讨 Cl-通道对大鼠离体心脏的心率和心室收缩的影响。方法 :采用离体心脏 Langendorff法灌流 ,监测心率和左心室内压的变化。结果 :通透性较弱的阴离子替代细胞外液中的 Cl-后 ,心率减慢和心室收缩减弱 ,Cl-通道阻断剂产生相似的结果。用高渗液灌流细胞后可以使室内压明显降低 ,但对心率的影响不明显。结论
- 李耀秦顼红雨王跃民朱军周士胜
- 关键词：CL^-通道
- 氯通道:在心脏中起何作用?被引量：4
- 2006年
- 在心脏中发现氯通道已有十余年,目前已知氯通道是一类成员较多的离子通道超家族。心肌氯通道的作用可能是多重的,由于阻断氯通道或Cl-替代对心肌的电特性产生明显影响,而心肌氯通道的种类和分布又存在明显的种属差异,提示心肌氯通道的主要作用可能在于调控阳离子通道,或为阳离子通道的正常活动提供一个合适的离子环境。因此,研究氯通道与阳离子通道之间的关系可能有重要的生理和病理生理学意义。
- 周士胜
- 关键词：氯通道阳离子通道电生理心肌心脏
- 容积调控氯通道参与人胃癌细胞增殖
- 2007年
- 田晶候毅鞠赵行宇周士胜
- 关键词：胃癌细胞增殖氯通道容积渗透压
