上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划(97BR046)
- 作品数：16 被引量：113H指数：8
- 相关作者：夏照帆肖仕初贲道锋杨珺刘志国更多>>
- 相关机构：第二军医大学解放军第455医院安徽医科大学更多>>
- 发文基金：上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 含活性细胞的新型创面覆盖物的研制及初步应用被引量：6
- 2003年
- 目的:制备含活性细胞的高生物学活性的创面覆盖物,并观察其对创面愈合的促进作用。方法:提取鼠尾胶原,与硫酸软膏素按一定比例混合制成胶原膜;采用胶原酶消化培养法,取健康成人(15～35岁)环切包皮分离成纤维细胞培养并传代。将异体成纤维细胞种植于胶原膜表面培养1周,采用ELISA法和RIA法测定培养上清中细胞因子IL-6、IL-8、TGF-β1及细胞外基质层粘连蛋白、透明质酸的分泌;从需手术植皮的烧伤患者(18～45岁,烧伤面积5％～32％TBSA)大腿外侧切取厚约0.4mm的中厚皮片,将成纤维细胞-胶原膜覆盖物用于中厚皮片供皮区,观察愈合时间。结果:成纤维细胞种植于胶原膜表面生长良好,可长入膜内形成具有三维结构的覆盖物。培养1周,上清中测得IL-6为(502.2±21.9)pg/ml、IL-8为(340.5±23.2)pg/ml、TGF-β1为(1.431±0.063)pg/ml,层粘连蛋白为(92.1±13.5)ng/ml,透明质酸为(2 037.4±105.8)ng/ml。将覆盖物用于供皮区,其表皮化时间为(6.2±2.5)d,较单纯胶原膜的(9.8±2.3)d、凡士林纱布的(10.1±1.9)d明显缩短(P<0.01),上皮分化程度高。结论:合成纤维细胞的胶原膜具有较高的生物学活性,可作为一种良好的暂时性创面覆盖物。
- 肖仕初杨珺贲道锋俞为荣王广庆杨勇朱世辉夏照帆
- 关键词：创面覆盖物胶原膜成纤维细胞层粘连蛋白创面愈合
- 转EGF基因表皮细胞的生物学活性及移植实验被引量：7
- 2003年
- 为探讨转表皮细胞生长因子 (EGF)基因的人表皮细胞在体外培养条件下及移植后EGF的表达 ,于体外培养转EGF基因的人表皮细胞 ,采用ELISA法测定不同培养时间及不同传代数时培养上清中EGF的含量。然后将转基因的人表皮细胞种植于无细胞真皮替代物表面 ,于体外培养后形成复合皮 ,移植于裸鼠全层皮肤缺损创面 ,移植后 3周以抗EGF抗体免疫组化染色观察移植后EGF的表达。结果显示 ,转EGF基因表皮细胞传至第 5代仍可分泌EGF ,达pg级水平 ;含转基因表皮细胞的复合皮移植后 1～ 3周 ,抗EGF染色阳性。提示转EGF基因表皮细胞在体内与体外均可稳定地表达外源基因产物 ,可望应用于组织工程皮肤的构建。
- 肖仕初夏照帆杨珺王广庆朱世辉贲道锋
- 关键词：生物学活性复合皮
- 海绵状胶原膜作为真皮支架构建复合皮的研究被引量：9
- 2003年
- 探讨以海绵状胶原膜作为真皮支架体外构建复合皮的可能性。由新鲜猪皮提取胶原后与硫酸软骨素混合 ,经真空干燥制成具有立体网状结构的膜片 ;取正常人包皮环切后的废弃皮肤组织 ,常规方法分离表皮细胞制成单细胞悬液 ,滴加于海绵状胶原膜上进行体外培养 ,观察表皮细胞的生长、增殖情况。结果显示 ,人表皮细胞种植于海绵状胶原膜上可生长、增殖 ,融合成片。提示此种海绵状胶原膜对人表皮细胞无明显毒性作用 。
- 杨珺肖仕初夏照帆
- 关键词：真皮支架复合皮皮肤组织工程
- 血管内皮细胞生长因子基因转染皮肤成纤维细胞的实验研究被引量：12
- 2003年
- 为改善人工复合皮在临床上的应用效果 ,构建人血管内皮细胞生长因子 16 5 (hVEGF165)基因重组载体pcDNA3,并转染成纤维细胞。检测转基因细胞培养上清液VEGF浓度 ;用转基因细胞培养上清液刺激人脐静脉血管内皮细胞 ,观察内皮细胞增殖速度 ;通过Miles实验检测VEGF的生物学活性。结果显示 ,转基因成纤维细胞能够表达一定浓度的VEGF,且具有加速体外培养人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)生长和增强血管通透性的生物学活性。提示转hVEGF165基因成纤维细胞可修饰人工皮的真皮面。
- 李刚夏照帆
- 关键词：血管内皮细胞生长因子基因转染皮肤成纤维细胞
- 二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞中生长因子mRNA表达的比较研究被引量：6
- 2003年
- 探讨经二维或三维培养的人皮肤成纤维细胞在细胞因子表达能力方面是否有差异。以平面培养皿作为成纤维细胞二维培养系统 ,用胶原凝胶作为成纤维细胞三维培养系统 ,分别提取二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞总RNA ,采用RT PCR方法检测两种培养系统中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果显示 ,虽然二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞形态不同 ,但二维和三维培养的成纤维细胞均有VEGF/bFGF设计大小的条带显示 ,且两者条带相对灰度无明显差异。
- 刘志国李刚刘旺肖仕初夏照帆
- 关键词：人皮肤成纤维细胞MRNA
- 腺病毒绿色荧光表达载体追踪皮肤组织工程种子细胞的转归被引量：1
- 2002年
- 目的 :用转基因技术标记组织工程种子细胞 ,探索一种追踪种子细胞转归的方法。 方法 :用腺病毒荧光表达载体转染人皮肤成纤维细胞 ,观察转染率及其荧光表达。再将细胞种植在真皮支架上 ,活体观察荧光标记的效果和持续时间。结果 :所制备的腺病毒荧光表达载体能转染靶细胞 ,转染率 >95 %。转染的细胞经一次传代后 ,尽管荧光强度降低 ,细胞轮廓仍清晰可见。细胞种植至真皮支架上 ,观察 2周 ,可以在荧光显微镜下较清晰地观察到培养物活体上细胞的形态。结论 :应用腺病毒荧光表达载体标记皮肤组织工程种子细胞以追踪细胞的转归是方便。
- 刘志国夏照帆贲道锋程大胜李刚肖仕初
- 关键词：人工皮肤种子细胞成纤维细胞
- 混合表皮细胞与脱细胞真皮基质构建复合皮的移植和转归研究被引量：10
- 2003年
- 探讨混合表皮细胞与脱细胞真皮体外构建的复合皮作创面移植后的转归。将BALB/c小鼠的表皮细胞和人表皮细胞按一定比例混合 ,种植于脱细胞真皮基质表面 ,经体外培养后形成复合皮 ,然后移植于BALB/c小鼠全层皮肤缺损创面 ,观察人表皮细胞的转归。结果显示 ,复合皮移植后可封闭创面 ,人表皮细胞多位于新生表皮上层 ,随时间延长 ,数量逐渐减少并最终被小鼠自体表皮细胞替代。提示两种不同的表皮细胞按一定比例混合培养构建复合皮可封闭全层皮肤缺损创面 ,可望节省自体皮源 。
- 夏照帆肖仕初杨珺王广庆朱世辉贲道锋刘志国
- 关键词：脱细胞真皮基质复合皮转归
- 严重烧伤后胰岛素抵抗及其防治的机制被引量：9
- 2004年
- 严重烧伤后出现的胰岛素抵抗 ,不但加重烧伤病程中的代谢紊乱 ,影响创面愈合 ,而且使感染和多器官功能障碍的发生率增高 ;其发生可能是胰岛素受体前、受体及受体后多环节障碍的综合作用 ,目前防治措施有限。本文针对严重烧伤后胰岛素抵抗发生机制和干预措施进行了探讨 ,以期提高大面积烧伤的救治水平。
- 夏照帆
- 关键词：胰岛素抵抗烧伤干预
- 含表皮细胞的无细胞真皮复合皮的构建及生长活性研究被引量：17
- 2002年
- 为探讨体外构建复合皮的可能性 ,制备来源于猪皮的无细胞真皮基质 ,在其表皮面种植表皮细胞于体外培养 ,定期消化分离无细胞真皮上的表皮细胞 ,采用细胞计数法和增殖试验观察表皮细胞增殖活力 ,并分别于 1周和 2周后通过组织切片HE染色、扫描电镜观察细胞生长状况。结果显示 ,表皮细胞随培养时间延长 ,数量明显增多 ,且仍具有一定的增殖潜力。培养 1周、2周后分别形成单层细胞膜片及含 3～ 6层细胞的复层膜片。提示以异种无细胞真皮为载体 ,可于体外成功构建含表皮细胞层的活性复合皮。
- 肖仕初夏照帆杨珺刘旺王广庆刘志国
- 关键词：无细胞真皮表皮细胞复合皮
- 一种表皮干细胞检测方法的建立被引量：17
- 2003年
- 程大胜夏照帆唐洪泰田建广王皓
- 关键词：表皮干细胞抗原CD29增殖细胞核抗原流式细胞术
