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结缔组织生长因子协同转化生长因子β_1的促肾纤维化效应被引量：46: 2004年; 目的　探讨结缔组织生长因子 (CTGF)和转化生长因子 β1(TGF β1)对肾脏成纤维细胞合成和分泌基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )和细胞表型转化的影响。方法　将大鼠肾成纤维细胞分为对照组、CTGF刺激组、TGF β1刺激组、CTGF加TGF β1联合刺激组 ,以明胶酶谱法和Western印迹方法分别检测细胞上清中MMP 2活性和蛋白的变化 ,实时定量聚合酶链反应 (PCR)方法检测细胞中MMP 2mRNA的水平。Western印迹方法检测成肌纤维细胞标志蛋白α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达水平和细胞上清中细胞外基质成分纤黏连蛋白 (FN)的水平。结果　MMP 2的活性和蛋白水平在刺激 2 4h时 ,各组之间无明显差异 ;刺激 4 8h ,10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组明显属于对照组 (P <0 0 5 ) ;而不同浓度的CTGF加TGF β1联合刺激组分别低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 ,其中 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1、5 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1均分别明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (P <0 0 5 )。上述各组细胞刺激 12h ,MMP 2mRNA水平在 10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组均明显高于对照组 (1 72 ,1 6 8vs 1 2 9,P <0 0 1) ,而 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1联合组明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (0 6; 杨敏黄海长李惊子王海燕; 关键词：结缔组织生长因子转化生长因子Β1 肾纤维化成纤维细胞基质金属蛋白酶

转化生长因子β_1通过Smad_2途径调节足细胞结缔组织生长因子表达被引量：12: 2004年; 目的　研究肾脏足细胞是否表达结缔组织生长因子 (CTGF)以及TGFβ1对CTGF表达调控的信号途径。方法　以肾小球足细胞为对象 ,应用Western印迹分析技术 ,观察了 3种促进肾脏纤维化的蛋白因子 ,转化生长因子 β1(TGFβ1)、血小板源生长因子 (PDGF)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对体外培养的足细胞CTGF蛋白表达的影响 ,以及ERK、Smad两条信号途径在TGFβ1调节CTGF蛋白表达中的影响 ;逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测CTGFmRNA的变化。结果　体外培养的足细胞表达基础水平CTGF蛋白 ,2 0ng/mlPDGF和 10 -6mol/LAngII刺激 2 4小时后细胞内CTGF蛋白水平与对照相比差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ,而 1ng/mlTGFβ1刺激 2 4h足细胞CTGF蛋白水平显著高于对照 (P <0 0 5 ) ,且增加呈TGFβ1剂量依赖趋势 ;1ng/mlTGFβ1刺激 12h可以使细胞CTGFmRNA表达增加。1ng/mlTGFβ1使足细胞Smad2 和细胞外信号调节激酶 (ERK1/ 2 )磷酸化 ,在刺激 30min达高峰 ;应用丝 /苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine抑制Smad2 磷酸化可以消减TGFβ1刺激的CTGF蛋白增加 ,但ERK1/ 2 活化抑制剂PD 980 5 9阻断ERK1/ 2 磷酸化不能减弱TGFβ1刺激CTGF蛋白表达的效应。结论　在足细胞上 ,TGFβ1刺激CTGF表达依赖于Smad2 信号通路的活化 ,而不依赖于ERK1/; 黄海长梁燕程丽静; 关键词：结缔组织生长因子肾脏纤维化逆转录-聚合酶链反应

结缔组织生长因子增加TGFβ活化成肌纤维细胞的作用被引量：18: 2005年; 探讨结缔组织生长因子 (CTGF)对转化生长因子 β1(TGFβ1)诱导成肌纤维细胞的影响及其与Smad信号通路的关系。细胞免疫组化检测成纤维细胞表型转化。Western免疫印迹法检测细胞α 平滑肌肌动蛋白 (α-SMA)及磷酸化Smad2的水平 ,免疫共沉淀检测Smad2 / 3与Smad4复合物的水平 ,提取核蛋白后再用Western免疫印迹法检测Smad2在细胞核内的聚积。结果显示CTGF不能使细胞表达α-SMA ,TGFβ1显著促进α- SMA表达 (p <0.0 1) ,CTGF加TGFβ1共同刺激又明显高于TGFβ1(p <0. 0 5 )。TGFβ1可明显诱导Smad2磷酸化、Smad2 / 3,4复合物形成以及Smad2在细胞核内的聚集 ,CTGF加TGFβ1联合刺激与TGFβ1相比没有明显变化。提示CTGF可以增强TGFβ1诱导的成肌纤维细胞生成。; 杨敏黄海长李惊子王海燕; 关键词：TGFΒ1 SMAD2 成肌纤维细胞 Α-SMA 结缔组织生长因子

高糖通过ERK_(1/2)途径调节足细胞产生明胶酶B被引量：10: 2005年; 目的探讨高糖持续刺激对足细胞培养上清液明胶酶活性、Ⅳ型胶原的影响及可能的信号途径。方法小鼠足细胞系分为正常糖组、高糖组和甘露醇高渗对照组。应用明胶酶谱法观察三组细胞培养液上清明胶酶活性的动态变化,Western印迹分析法检测细胞培养液上清中Ⅳ型胶原α5链蛋白水平及足细胞ERK信号途径活化的变化。RT-PCR方法检测MMP-9 mRNA的表达。结果正常糖组和甘露醇高渗对照组培养液上清MMP-2和MMP-9活性在10天实验时间内无明显变化。高糖组细胞培养液上清MMP-2的活性没有明显变化;MMP-9活性于第2天开始升高,第3天达高峰为正常糖组的144.2±18.7%(P=0.006),第5天下降,第7天回到基础水平为正常糖组的76.6%±16.4%(P=0.218),直至第10天。足细胞培养上清中有较高基础水平的Ⅳ型胶原α5链蛋白;高糖组细胞培养上清Ⅳ型胶原α5链蛋白表达第2天开始下降,第3天达最低水平41.9%±25.5%(P=0.047),第5天回升到基础水平持续至第7天。上清MMP-9的活性与Ⅳ型胶原α5链蛋白的表达量呈负相关(r=-0.577,P=0.006)。正常糖组和甘露醇高渗对照组细胞培养上清Ⅳ型胶原α5链蛋白无变化。高糖刺激足细胞2天MMP-9 mRNA水平增加为正常糖组的199.8%±40.2%(P=0.003),刺激5天时为正常糖组的90.9±8.8%(P=0.411)。高糖刺激足细胞30 min可以活化ERK1/2,6 h达高峰,持续至24 h,48 h降至基础水平;在足细胞上未能检测到p38和JNK活化。ERK活化特异抑制剂PD98059预处理细胞后,能阻断高糖引起的MMP-9的活性和MMP-9 mRNA增加及Ⅳ型胶原α5链蛋白的下降。结论 ERK信号传导途径介导了高糖刺激足细胞MMP-9生成及相应的Ⅳ型胶原α5链蛋白动态反向改变。; 白亚玲黄海长李惊子赵玉庸王海燕; 关键词：足细胞明胶酶B MMP-9MRNA MMP-9活性明胶酶谱法链蛋白

结缔组织生长因子促纤维化作用及其表达调节的研究进展被引量：16: 2005年; Connective tissue growth factor (CTGF) has recently received much attention as a possible key determinant of progressive fibrosis. It promotes tissue fibrosis through different pathways, such as cell proliferation, extracellular matrix accumulation and cell transdifferentiation. A number of regulators of CTGF expression have been identified, including transforming growth factor β, vascular endothelial growth factor, tumor necrosis factor α, etc. The mechanism of profibrotic effect by CTGF was reviewed. [; 杨敏黄海长王海燕; 关键词：结缔组织生长因子纤维化转化生长因子Β

结缔组织生长因子通过活化Erk-1/2信号通路促成肌纤维细胞生成被引量：22: 2005年; 目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)协同转化生长因子β1(TGFβ1)促进成肌纤维细胞生成分子机制。方法用TGFβ1预处理大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F),使部分细胞转化为成肌纤维细胞,然后将预处理后的细胞分为对照组,CTGF刺激组,TGFβ1刺激组和PD98059干预组。通过免疫细胞化学双染技术分别检测成肌纤维细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和掺入的细胞增殖标志物5溴2'脱氧尿嘧啶(BrdU);并以Western免疫印迹法检测αSMA水平。结果TGFβ1预处理的各组细胞都有胞浆内αSMA染色阳性,CTGF刺激组αSMA蛋白表达均明显高于对照组(P<0.05);但CTGF组部分αSMA阳性细胞核内BrdU阳性率明显高于对照组和TGFβ1组。进一步实验显示CTGF刺激细胞30min能明显诱导细胞内Erk1/2磷酸化,TGFβ1组无此反应。用PD98059阻断Erk1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的细胞核内BrdU阳性表达和αSMA蛋白表达(P<0.05)。结论CTGF通过Erk1/2信号通路促进TGFβ1诱导的成肌纤维细胞增殖。; 黄海长杨敏李惊子王海燕; 关键词：结缔组织信号通路成肌纤维细胞

低密度脂蛋白受体相关蛋白在肾间质纤维化模型中的表达被引量：5: 2004年; 目的 :探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白在肾间质纤维化中的表达变化及意义。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为假手术组 ,模型 3、6、9、12d组和血管紧张素转换酶抑制剂 (依那普利 )治疗 9d组。Masson染色结合半定量评分测小管 -间质损伤指数 ,免疫组化确定低密度脂蛋白受体相关蛋白在肾脏的表达部位 ;蛋白印迹分析检测肾组织内结缔组织生长因子 ,低密度脂蛋白受体相关蛋白水平。结果 :低密度脂蛋白受体相关蛋白阳性表达主要在肾间质和肾小球系膜区中 ,在单侧输尿管梗阻模型中随观察时间延长逐渐增加 ,于第 9d达高峰 ;并且第 9d依那普利治疗组大鼠肾内低密度脂蛋白受体相关蛋白水平显著少于模型组 (P <0 0 1) ;相关分析显示 ,在模型组中低密度脂蛋白受体相关蛋白和结缔组织生长因子蛋白水平呈正相关 (r=0 786 ,P <0 0 1) ;低密度脂蛋白受体相关蛋白水平与肾小管间质损伤指数呈正相关 (r=0 80 0 ,P <0 0 1)。结论 :低密度脂蛋白受体相关蛋白作为结缔组织生长因子的受体蛋白 ,在大鼠肾间质纤维化模型中表达增加。; 黄海长李深杨敏闵亚丽李惊子王海燕; 关键词：结缔组织生长因子纤维化

低氧刺激结缔组织生长因子表达与肾间质纤维化被引量：17: 2005年; 目的 :观察低氧对结缔组织生长因子 (CTGF)表达的影响 ,探讨低氧致肾间质纤维化的机制。方法 :单侧输尿管结扎 (UUO) 9d大鼠动物模型 ,用RT -PCR方法检测肾组织中低氧标记分子 -低氧诱导因子 (HIF - 1α)的mRNA水平 ,免疫组化方法观察假手术组及模型组肾组织中HIF - 1α和CTGF的表达及部位 ,Western蛋白印迹技术检测肾组织CTGF的蛋白水平。体外实验 ,正常大鼠肾间质成纤维细胞 (NRK - 4 9F)分别置于低氧 (1%O2 )和正常氧条件下培养 6h ,应用RT -PCR和Western蛋白印迹检测CTGFmRNA和蛋白表达水平。结果 :对照组肾组织未能检测到HIF - 1αmRNA和HIF - 1α蛋白表达 ;模型组肾组织有高水平HIF - 1αmRNA ,并出现HIF - 1α蛋白表达 ,主要分布在小管 -间质细胞 ;CTGF蛋白与HIF - 1α蛋白表达部位及程度一致 ;低氧 (1%O2 )培养刺激NRK - 4 9F细胞表达CT GFmRNA和蛋白。结论 :低氧刺激的CTGF的表达增加与肾间质纤维化的发生有关。; 黄海长于迎梁燕闵亚丽胡昭陈敏李惊子王海燕; 关键词：低氧结缔组织生长因子低氧诱导因子

肾间质纤维化组织中组织型转谷氨酰胺酶和结缔组织生长因子共表达被引量：8: 2005年; 目的:探讨组织型转谷氨酰胺酶(tTG)和结缔组织生长因子 (CTGF)在肾间质纤维化组织中的表达及二者的关系。方法: 采用单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型。将大鼠随机分为假手术组 (5只 )、模型组(6只)、依那普利治疗组(6只)。术后 9天处死各组大鼠,肾组织标本用过碘酸-席夫染色(PAS)确证肾间质纤维化病变。以免疫组织化学染色方法观察肾组织内tTG和CTGF的表达部位,以及细胞外基质成份纤维连接蛋白(FN)的表达变化。用Western蛋白印迹方法分析肾组织内tTG和CTGF蛋白表达水平。结果: 假手术组大鼠tTG,CTGF和FN分别在肾小管、肾间质区仅有微量表达,肾小球内无阳性表达;模型组大鼠tTG、CTGF和FN在肾小管、肾间质区的表达信号比假手术组强;依那普利治疗后三者表达减少。双重染色结果显示,在模型组肾间质tTG阳性表达部位同时表达CTGF,并且强度相似。Westernblot结果显示,模型组tTG和CTGF蛋白水平明显高于假手术组;依那普利治疗组tTG和CTGF蛋白水平明显低于模型组。各组大鼠肾内tTG蛋白水平与CTGF蛋白水平之间(r=0. 683,P<0. 05)以及tTG蛋白水平与肾间质内FN半定量水平之间 (r=0. 737,P<0. 05)均有显著相关关系。结论: tTG和CTGF可能共同参与肾间质纤维化。; 陈东黄海长喻陆; 关键词：组织型转谷氨酰胺酶结缔组织生长因子 WESTERNBLOT 免疫组织化学染色方法共表达

检测肾病综合征患者尿中足细胞的临床意义被引量：21: 2004年; 目的 :探讨尿中肾小球上皮细胞 (足细胞 )检测在人局灶节段性肾小球硬化症 (focalsegmentalglomeru losclerosis,FSGS)诊断中的意义。方法 :病例选自我科经肾活检病理证实的FSGS患者 1 2例 ,微小病变性肾小球病(minimalchangedisease ,MCD) 2 0例 ,8例健康人作对照。取晨尿离心 ,沉渣甩片 ,间接免疫荧光法检测尿中足细胞特异蛋白Podocalyxin(PCX)阳性染色细胞。采用免疫荧光法检测肾小球足细胞PCX的表达。结果 :FSGS组尿中足细胞阳性 8例 (阳性率 6 6 .6 7% ) ,MCD组和正常对照组中尿足细胞均为阴性。FSGS患者中 ,尿足细胞阳性者临床上呈肾病综合征表现。FSGS患者肾活检标本中 ,肾小球内均可见足细胞特异标记蛋白PCX表达呈节段性缺失 ,并与肾小球节段硬化部位一致 ;而MCD患者肾活检标本的肾小球中 ,上述标记蛋白表达完整。结论 :在肾病综合征中 ,尿足细胞检测可作为FSGS与MCD鉴别的一项可靠、方便。; 李月红黄海长刘刚章友康; 关键词：足细胞间接免疫荧光法尿液检测局灶节段性肾小球硬化症

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