辽宁省高等学校优秀人才支持计划(2008RC33)
- 作品数：14 被引量：109H指数：8
- 相关作者：王洪新鲁美丽戴红良梁春光杨育红更多>>
- 相关机构：辽宁医学院中国中医科学院聊城市人民医院更多>>
- 发文基金：辽宁省高等学校优秀人才支持计划国家自然科学基金辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 左卡尼汀通过抑制钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号通路抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡被引量：8
- 2013年
- 目的:观察左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用200μmol/L H2O2刺激12 h,建立体外原代培养新生乳鼠心肌细胞凋亡模型。Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)、钙调素依赖蛋白激酶II(CaMKII)特异性抑制剂KN93及左卡尼汀分别于加入H2O2前30 min或1 h加入,以检测这3种药物对H2O2刺激下心肌细胞活力、细胞凋亡、细胞内静息钙浓度([Ca2+]i)及磷酸化CaMKII(p-CaMKII)表达的影响。利用MTT比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;利用激光共聚焦扫描检测[Ca2+]i;蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达。结果:模型组经200μmol/L H2O2作用12 h后,细胞活力显著下降,细胞凋亡率显著增加。BAPTA、KN93及左卡尼汀预处理显著抑制上述细胞损伤。进一步研究发现,H2O2诱导的[Ca2+]i水平升高、cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达增加均可被上述3种药物不同程度地抑制。结论:左卡尼汀可抑制H2O2所致的心肌细胞凋亡,该心肌保护作用可能与其抑制Ca2+/CaMKⅡ信号通路有关。
- 戴红良贾桂枝刘堃梁春光张林张志刚王洪新
- 关键词：肉碱细胞凋亡钙
- 黄芪甲苷对肾性高血压大鼠肾脏的保护作用及机制研究被引量：17
- 2014年
- 目的观察黄芪甲苷对肾性高血压大鼠的保护作用及其机制。方法将60只SD雄性大鼠按照经典两肾一夹(2-kidney-1-clip,2K1C)型肾性高血压大鼠模型方法建模,将成模大鼠随机分为模型组,黄芪甲苷低、高剂量组,依那普利组,同时设假手术组。各组大鼠灌胃给药8周后,观察各组大鼠血压及肾脏组织学变化,血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)水平以及肾脏组织Cu-Zn-SODmRNA、iNOSmRNA表达情况。结果 (1)应用黄芪甲苷干预后大鼠尾动脉收缩压明显降低,尤其黄芪甲苷高剂量组收缩压与依那普利组相仿;光镜下可见模型组肾小球毛细血管塌陷,肾小球萎缩、硬化、坏死,肾间质可见大量炎症细胞和红细胞浸润等;黄芪甲苷高剂量组、依那普利组未见肾小球萎缩、坏死,肾间质仍偶见炎症细胞浸润。(2)与假手术组比较,模型组血清SOD、NO和iNOS显著降低,MDA显著升高(P约0.01);与模型组比较,黄芪甲苷低、高剂量组血清SOD、NO和iNOS显著升高,MDA显著降低(P约0.05)。黄芪甲苷高剂量组血清SOD显著低于依那普利组,血清MDA、NO和iNOS显著高于依那普利组(P约0.05)。(3)黄芪甲苷低、高剂量组大鼠肾脏组织Cu-Zn-SODmRNA、iNOSmRNA表达均显著升高(P约0.05),其中黄芪甲苷高剂量组高于低剂量组(P约0.05),表现出良好的剂量关系。结论黄芪甲苷能够有效降低肾性高血压大鼠肾脏损伤,其机制可能与抗氧化应激和调节血管收缩功能有关。
- 何自育杨育红王洪新
- 关键词：黄芪甲苷肾性高血压氧化应激
- 钙调磷酸酶信号通路参与κ-阿片受体激动对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用被引量：8
- 2010年
- 目的研究钙调磷酸酶(CaN)信号通路在κ-阿片受体(κ-OR)激动对异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大中的抑制作用。方法利用体外培养模型,以Iso 10μmol.L-1诱导心肌肥大,观察U50488H1μmo.lL-1的作用,并探讨在环孢素A(CsA)1μmol.L-1、cAMP三乙胺盐(Rp-cAMPS)及百日咳毒素(PTX)5 mg.L-1存在的情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的影响。用Lowry等法测定心肌细胞蛋白质含量;用消化分离法及计算机图像分析系统测定细胞体积;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2 +]i瞬间变化,用Western印迹法测定CaN的表达。结果与正常对照组相比,Iso 10μmo.lL-1使心肌细胞蛋白质含量增加了42.1%,体积增大了86.7%,[Ca2 +]i瞬变增加了57.5%,CaN表达增加了101.7%;加入κ-OR激动剂U50488H1μmol.L-1后,与Iso模型组相比,心肌细胞总蛋白质含量和细胞体积分别降低了24.7%和46.7%,[Ca2 +]i瞬变降低了43.8%,CaN表达降低了48.8%;CsA和Rp-cAMPS对Iso诱导的上述指标的抑制程度与U50488H相似;PTX预处理的情况下U50488H对Iso诱导的上述指标的抑制作用消失。结论κ-OR激动通过降低胞内[Ca2 +]i瞬变和CaN表达抑制Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥大。
- 鲁美丽王洪新张蕾吴国强刘冬梅
- 关键词：阿片钙调磷酸酶心肌细胞
- ATP敏感性钾通道在U50488H抑制去氧肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究ATP敏感性钾通道(KATP)在κ-阿片受体激动剂U50488H抑制乳大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型,应用去氧肾上腺素(PE)10μmol.L-1诱导心肌细胞肥大。细胞处理分为正常对照组、PE10μmol.L-1模型组、5-羟基癸酸(5-HD)100μmol.L-1组,格列本脲(Gli)50μmol.L-1组、PE10μmol.L-1+U50488H1μmol.L-1组、PE10μmol.L-1+Gli50μmo.lL-1+U50488H1μmo.lL-1组和PE10μmo.lL-1+5-HD100μmo.lL-1+U50488H1μmol.L-1组,细胞培养液中先加入Gli50μmol.L-1或者5-HD100μmol.L-1,30min后再加入U50448H1μmol.L-1,30min后最后加入PE10μmol.L-1,48h后进行指标检测,Lowry等法检测心肌细胞蛋白质含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;Western印迹法测定KATP通道Kir6.2亚基的表达。结果与正常对照组相比,PE10μmol.L-1模型组使心肌细胞总蛋白质含量比正常细胞增加了52.2%,细胞体积增加了95.0%,而Kir6.2的表达没有明显变化。与PE10μmol.L-1模型组相比,细胞加入U50488H1μmol.L-1后,心肌细胞总蛋白质含量和细胞体积分别降低了42.3%和47.9%,但是Kir6.2表达增加了39.2%。与PE10μmo.lL-1+U50488H1μmol.L-1组相比,在非选择性KATP通道阻滞剂Gli50μmol.L-1或线粒体KATP通道阻滞剂5-HD100μmol.L-1存在的情况下,Kir6.2表达分别减少了49.3%和52.1%,U50488H抑制PE诱导的心肌细胞肥大作用减弱,并且两组之间没有显著差异。结论 U50488H可能是通过开放KATP通道,主要是线粒体KATP通道来抑制PE诱导的乳大鼠心肌细胞肥大。
- 张蕾王洪新鲁美丽吴国强刘冬梅
- 关键词：钾通道受体阿片样阿片受体激动剂U50488H
- 黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用被引量：21
- 2011年
- 目的探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用和机制。方法体外培养的乳大鼠心肌细胞分别加入AsⅣ3,10,30和90μmol.L-1孵育30 min后,再加入Iso 10μmol.L-1作用48 h。另设AsⅣ30μmol.L-1和Iso 30μmol.L-1模型对照组。考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测量细胞体积;MTT测定细胞存活率;以Fura-2/AM为荧光探针,采用Till阳离子测定系统,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化。结果与正常对照组相比,AsⅣ30μmol.L-1对正常心肌细胞无影响;Iso 30μmol.L-1可使心肌细胞总蛋白含量明显增加,体积明显增大,心肌细胞内[Ca2+]i瞬间峰值增大,同时使心肌细胞存活率降低了48.1%(P<0.01)。与Iso模型组相比,预加入AsⅣ10和30μmol.L-1心肌细胞蛋白质含量明显降低,ASⅣ30μmol.L-1组可以恢复达到正常对照组水平;AsⅣ3~90μmol.L-1可以拮抗Iso对正常心肌细胞体积增大、细胞内[Ca2+]i瞬间变化幅度增大的作用;ASⅣ3,10和30μmol.L-1可显著升高细胞存活率(P<0.01)。结论 AsⅣ对Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有良好的保护作用,其机制可能与降低[Ca2+]有关。
- 王秋宁王洪新杨育红鲁美丽李香华
- 关键词：黄芪甲苷异丙肾上腺素心肌肥大
- 黄芪甲苷对高糖诱导的乳大鼠心肌肥大的保护作用被引量：8
- 2010年
- 目的探讨黄芪甲苷对高糖诱导的心肌细胞肥大的保护作用。方法利用体外培养模型,以25mmol/L高糖诱导心肌肥大。新生大乳鼠心肌细胞分为正常对照组、高糖组、高糖+16μmol/L黄芪甲苷组、高糖+32μmol/L黄芪甲苷组和高糖+64μmol/L黄芪甲苷组,用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;MTT法检测细胞存活率;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i的瞬间变化。结果与正常对照组相比,高糖使心肌细胞蛋白质含量增加35.7%,体积增大81.3%,[Ca2+]i瞬变增加62.5%%,心肌细胞存活率降低36.1%。加入16μmol/L黄芪甲苷后,与高糖组相比,心肌细胞蛋白质的含量和细胞体积分别降低20.3%和10.6%,[Ca2+]i瞬间变化降低8.0%,心肌细胞的存活率增加20.0%。结论黄芪甲苷对高糖诱导的乳大鼠心肌细胞肥大具有保护作用。
- 李香华王洪新王秋宁
- 关键词：黄芪甲苷高糖心肌肥厚
- 左卡尼汀调控钙调神经磷酸酶表达抑制过氧化氢诱导心肌细胞凋亡作用被引量：10
- 2014年
- 目的研究钙调神经磷酸酶(CaN)是否参与左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞凋亡的抑制作用。方法将新生乳鼠心肌细胞体外培养进行实验,实验分为对照组、H2O2组、左卡尼汀+H2O2组、环孢素A(CsA)+H2O2组。对照组采用生理盐水;H2O2组加入200μmol·L-1H2O2孵育12 h;左卡尼汀+H2O2组、CsA+H2O2组分别给予1.2mmol·L-1左卡尼汀1 h或1μmol·L-1CsA 30 min预处理,再分别加入H2O2继续孵育12 h。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白及CaN的表达。结果与对照组相比,H2O2组心肌细胞凋亡率、促凋亡蛋白cleaved caspase-3及Bax的表达均明显增加,而其抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低,左卡尼汀及CaN特异性抑制剂CsA可明显改善上述指标。而且,左卡尼汀还可抑制H2O2刺激下CaN的过表达。结论左卡尼汀可通过调控钙调神经磷酸酶表达抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡。
- 贾桂枝王洪新李红王翠瑶戴红良
- 关键词：左卡尼汀心肌细胞凋亡
- κ阿片受体激动通过钙调神经磷酸酶和胞外信号调节激酶信号抑制异丙肾上腺素诱导的乳鼠心肌肥大被引量：4
- 2010年
- 目的探讨κ阿片受体(κ-OR)激动抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的信号转导机制。方法利用体外培养模型,以Iso 10μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察κ-OR激动剂U50488 H1μmol/L的作用,并进一步探索在钙调神经磷酸酶(CaN)特异性抑制剂环孢菌素A(CsA)、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂U0126、L型钙通道阻滞剂维拉帕米及β肾上腺素受体阻断剂普萘洛尔存在的情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的影响。Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化;Western blot法测CaN、ERK表达。结果U50488 H1μmol/L可以明显抑制Iso诱导的心肌蛋白含量增加、体积增大和胞内[Ca2+]i瞬间变化的增高,其抑制程度与CsA、U0126、维拉帕米及普萘洛尔相似;U50488 H可以抑制Iso诱导的CaN表达增加和ERK磷酸化增加;CaN抑制剂CsA可以抑制Iso诱导的ERK磷酸化增加,ERK抑制剂U0126可以抑制Iso诱导的CaN表达增加。结论κ-OR激动通过CaN、ERK信号抑制Iso诱导的心肌肥大,在这一过程中,CaN、ERK信号在蛋白水平上存在交互作用。
- 鲁美丽王洪新杨育红张蕾刘冬梅吴国强
- 关键词：Κ阿片受体钙调神经磷酸酶胞外信号调节激酶心肌肥大
- 尿促皮素诱导乳大鼠心肌细胞肥大的作用及信号传导机制被引量：1
- 2009年
- 目的探讨尿促皮素(urocortin)诱导大鼠心肌细胞肥大的作用及其信号传导机制。方法实验分8组,正常对照组、尿促皮素0.1μmol.L-1组、星形孢菌素(Sta)1μmo.lL-1、H890.1μmol.L-1和维拉帕米(Ver)1μmol.L-1组及尿促皮素分别加Sta,H89和Ver组。采用体外培养的乳大鼠心肌细胞,应用尿促皮素0.1μmol.L-1诱导心肌肥大,观察Sta1μmol.L-1,H890.1μmo.lL-1和Ver1μmol.L-1的作用,进一步探讨尿促皮素0.1μmol.L-1诱导心肌肥厚的作用机制。用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞直径;[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质的合成;用Lowry法检测心肌细胞蛋白质含量;用Western蛋白印迹法测定心房钠尿肽(ANP)表达;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化。结果尿促皮素使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别增加30.9%,36.3%,35.5%和34.7%;尿促皮素+Sta组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了16.5%,22.1%,18.1%和21.3%;尿促皮素+H89组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了16.6%,21.5%,19.5%和20.6%;尿促皮素+Ver组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了17.1%,20.9%,17.9%及19.9%;尿促皮素能够使心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化水平增高,Sta,H89和Ver能够降低尿促皮素引起的心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化升高。结论尿促皮素可能通过蛋白激酶C和蛋白激酶A信号途径影响L-型Ca2+通道,进而影响细胞[Ca2+]i瞬间变化水平,诱导乳大鼠心肌细胞肥大。
- 梁春光王洪新黄雷刘杰
- 关键词：信号传导通路
- Urocortin致心肌细胞肥大作用由细胞内游离钙离子升高诱导被引量：1
- 2013年
- 目的探讨Urocortin(UCN)致心肌细胞肥大作用与细胞内游离钙离子([Ca2+]i)之间的关系。方法使用UCN0.1μmol.L-1诱导体外培养乳鼠心肌细胞肥大模型,通过计算机图像分析系统检测心肌细胞体积,荧光显微镜法测定细胞[Ca2+]i,Lowry法测定总蛋白水平,RT-PCR法测定ANP mRNA水平。结果与对照组相比UCN处理组细胞[Ca2+]i明显提高,细胞体积明显增大,所含总蛋白含量增加明显,ANP mRNA水平明显提高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UCN能引起心肌细胞肥大,其过程与其引起的[Ca2+]i提高有一定关系。
- 梁春光黄雷戴红良
- 关键词：UROCORTIN细胞内游离钙离子荧光显微镜心肌肥大RT-PCR
