国家自然科学基金(30570460)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：黄前川李津婴周虹黄正霞丁进亚更多>>
- 相关机构：第二军医大学广州军区武汉总医院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 联合诱导法对K562细胞红系分化及其相关基因和膜蛋白表达的影响
- 2009年
- 目的优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能。方法采用红系诱导联合培养法,优化丁酸钠、促红细胞生成素、氯化高铁血红素、枸橼酸铁等成分组合和剂量组合。鉴定指标选用红系血红素合成酶(eALAS)mRNA和粒系bcr/ablmRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数。红系分化进一步鉴定指标选用Real-timePCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物。结果K562细胞诱导120h后,联苯胺染色阳性率达100%;α、β收缩蛋白(spectrinα、β)、带3蛋白(band3)、eALAS、整合素相关蛋白(CD47)、RhD血型抗原(RhD)、锚蛋白(ankyrin)、红细胞膜带4.2蛋白(EPB4.2)的mRNA水平为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、2.71、1.94倍,而bcr/ablmRNA水平为对照组的39%;红系膜蛋白CD47、band3、RhD水平明显增高(P<0.01),血型糖蛋白A(GPA)无明显差异。结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分化,并且细胞状态良好,易于进行红系统疾病研究;CD47、band3、RhD这3种膜蛋白可以作为早期红系分化的敏感指标。
- 黄前川李津婴周虹许燕群黄正霞陈莉
- 关键词：K562细胞
- 血红素合成酶特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定
- 2009年
- 目的利用含红色荧光报告基因(DsRed)的pGCsi-U6/Neo/DsRed/质粒构建干扰人红系特异的γ-氨基-б-酮戊酸合成酶(eALAS)基因表达的短发夹RNA(shRNA)表达载体,并进行活性鉴定。方法根据GenBank中eALAS的序列,设计3条表达shRNA的互补DNA序列,分别克隆至质粒载体pGCsi-U6/Neo/DsRed中构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定eALAS基因的真核表达载体pEGFP-N1-eALAS;将3种pGCsi-U6/Neo/DsRed/eALAS-shRNA分别与pEGFP-N1-eALAS共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测pEGFP-N1-eALAS融合蛋白的荧光强度,选择最佳RNA干扰(RNAi)靶点,并在基因和蛋白水平检测eALAS的表达,进一步验证最佳RNAi靶点的敲减效率。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,最佳RNAi靶点敲减效率达72.45%,eALAS在基因和蛋白水平显著下降。结论成功构建了eALAS特异性RNAi表达载体,为下一步研究铁效应元件eALAS在铁代谢异常所致红系统疾病的机制奠定了基础。
- 黄前川李津婴曹军皓丁进亚周虹许艳群
- 关键词：短发夹RNA
- 一价阴离子交换蛋白家族与相关疾病被引量：2
- 2006年
- 黄前川李津婴
- 关键词：相关疾病家族成员红细胞膜生理功能
