北京市自然科学基金(5021002)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所中国医学科学院北京协和医学院更多>>
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- Cwc15家族同源基因mED1在小鼠早期胚胎发育中的表达模式(英文)
- 2010年
- RNA选择性剪接机制涉及基因表达模式的多样性、胚胎发育的调控和疾病的发展与转归.Cwf15/Cwc15蛋白家族与RNA剪接体的功能相关,其基因序列在很多物种之间是十分保守的.然而,在哺乳类,Cwf15/Cwc15基因的表达模式和生物学功能研究至今未见实验性研究报道.本文首次报道了Cwc15家族同源基因mED1在小鼠早期胚胎发育过程中的表达规律.RT-PCR结果表明,mED1基因的转录水平从小鼠桑葚胚到器官形成期呈逐渐上升趋势;整体原位杂交结果显示mED1基因主要在小鼠6.5-dpc胚胎的ICM、8.5-dpc胚胎的神经褶衍生物和10.5-dpc的头部、鳃弓和体节中表达.说明mED1基因参与了小鼠胚胎的早期发育.此外,GFP-融合蛋白的亚细胞定位实验表明,mED1蛋白具有核定位的功能(剪接体蛋白的必要特性),验证了其核定位序列(NLS)的预测.本文是关于Cwc15家族基因的首次实验研究报道.
- 端家忠张靖溥朱少侠李勇
- 关键词：基因表达模式小鼠胚胎发育NLS
- 染色体外同源重组结合细胞质注射途径研制转基因小鼠
- 2004年
- 以绵羊 β 乳球蛋白基因 (β Lactoglobulin ,β LG)为转基因表达框架 ,将人G CSF(HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor,hG CSF)基因与报告基因 增强型绿色荧光蛋白 (EnhancedGreenFluorescenctProtein ,EGFP)基因作为双表达单元拼接到 β LG基因的第一外显子处 ,并在G CSF基因两侧引入同源重组位点loxP、lox2 2 72 ,将打靶基因表达构件 β LG hG CSF IRES EGFP(总长 9 3kb)分为两段进行构建 ,片段Ⅰ (长 5 9kb)与片段Ⅱ (长 5 6kb)两段重叠部分为 2 2kb。向小鼠受精卵细胞质共注射构件片段Ⅰ、Ⅱ和NLS(核定位信号 ) 3个基因片段。对仔鼠进行整合与表达的检测。PCR Southern杂交检测结果表明 ,片段Ⅰ的整合率为 6 2 3% (86 /138) ,片段Ⅱ的整合率为 5 4 3% (75 /138) ,片段Ⅰ、Ⅱ共整合 (包括两片段分别整合和染色体外同源重组两种情况 )的小鼠为 6 2只 ,整合率为 4 4 9% (6 2 /138) ,其中在双阳性转基因小鼠中发生染色体外同源重组的几率为 80 6 % (5 0 /6 2 )。RT PCR Southern检测了 10只发生染色体外同源重组的转基因雌性小鼠 ,hG CSF基因的表达率为 90 % (9/10 ) ,EGFP基因的表达率为 10 0 % (10 /10 ) ,通过对其乳汁紫外吸收光谱的检测 ,EGFP基因的表达率为 5 0 % (5 /10 )。
- 耿艳艳端家忠李勇宁涛张靖溥
- 关键词：转基因小鼠Β-乳球蛋白基因EGFP
- mED2——一个小鼠胚胎发育的新基因(英文)
- 2006年
- 克隆参与胚胎发育的新基因并研究其表达规律和功能是揭示胚胎发育的基因调控机理的重要途径。囊胚形成和原肠形成是哺乳动物胚胎发育过程中的两个关键阶段。囊胚阶段发生了胚胎的第一次分化,是细胞多能性和分化的一个转折点。此时涉及的基因活动,既有维持胚胎干细胞全能性或多能性的基因活动,又有按照预定发育模式参与胚胎定向分化的基因活动。原肠期是胚胎发育过程中的第二个关键转折点,涉及到3个胚层的形成和细胞命运决定等多种变化。在这个时期胚胎获得了胎儿原基的所有信息,新组织的产生和细胞迁移的再生组织与形态发生、细胞增殖、细胞分化、模式形成等存在着非常复杂而相互协调的关联。大多数细胞正由原来的多潜能逐渐向寡潜能发展,控制组织器官形态建成的基因正逐渐开启。这两个时期的基因表达图式、特征和种类会有很大的差异和变化,因此研究这两个时期的新基因的表达规律和功能,将是了解胚胎发育的基因调控机理的重要途径。文章以这两个时期胚胎为原始材料,利用减法杂交方法克隆到一新的小鼠胚胎基因mED2,对其进行了表达规律和生物学功能的初步分析。RT-PCR-Southern和原位杂交实验表明,mED2基因转录水平具有发育阶段的依赖性;随着发育过程的进行,其表达主要在胚神经系统和中胚层衍生的组织表达。mED2基因活性的knockdown对于合子的卵裂和植入前早期胚胎发育均有抑制作用。亚细胞定位实验表明,mED2基因编码的蛋白基本定位于细胞核膜及其临近的内膜细胞器(粗糙内质网和高尔基体)。根据生物信息学分析,mED2蛋白可能为一跨膜蛋白且与含有硫氧还蛋白结构域的蛋白有部分匹配。由此推测mED2基因参与了小鼠植入前早期胚胎发育,其基因产物可能通过蛋白之间的相互作用,即对蛋白进行后期修饰、折叠
- 端家忠张靖溥朱少侠
- 关键词：原位杂交亚细胞定位反义RNA抑制
