国家自然科学基金(31070810)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 联合应用泛素分子基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定
- 2015年
- 目的构建含有泛素(ubiquitin,Ub)基因的汉滩病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重组腺病毒。方法通过PCR扩增获得Ub基因,分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体p Shuttle-p CAG-Gn S0.7和p Shuttle-p CAG-Gc S0.7中,进一步通过双酶切将转移载体中的嵌合基因分别克隆入腺病毒载体,得到重组腺病毒载体r Ad-p CAG-Ub-Gn S0.7和r Adp CAG-Ub-Gc S0.7,使用PacⅠ线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测表达产物。结果限制性内切酶酶切鉴定、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确。IFA检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达。结论成功制备了含有Ub基因的汉滩病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重组腺病毒,为进一步研究联合Ub基因的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础。
- 张亮于澜叶伟李璞媛张芳琳程林峰
- 关键词：汉坦病毒腺病毒科泛素
- 汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性抗原的检测被引量：3
- 2011年
- 目的通过检测汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性病毒抗原,以建立汉坦病毒感染动物的评价体系。方法将汉坦病毒陈株按照原病毒液、10-1、10-2三个滴度经肌肉注射感染C57BL/6小鼠,在感染后的第3、6、9、12、15天,分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织研磨后制成病毒悬液,以ELISA法检测各组织中的病毒特异性抗原。结果 C57BL/6小鼠感染汉坦病毒后短期内在其肝脏和脾脏可以检测到特异性抗原,随着时间的延长,这些抗原逐步消失。结论上述结果为建立汉坦病毒感染动物的评价体系提供了一种参考。
- 程林峰白露李凯李璞媛胡刚于澜吴兴安徐志凯张芳琳
- 关键词：汉坦病毒C57BL/6小鼠抗原
