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转染分泌型aFGF基因对内皮祖细胞功能影响的研究: 2007年; 目的观察转染分泌型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)基因对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)功能的影响。方法从小型猪外周血中分离、培养和扩增EPC,将编码人分泌型aFGF基因的重组腺相关病毒(Adno-associated virus, AAV)转染EPC (EPC-aFGF),同时设立转绿色荧光蛋白(GFP)基因(EPC-GFP)和未转基因的EPC组(EPC)。转染后3 d,ELISA检测各组上清中aFGF的分泌情况,并以MTS法测定各组细胞的增殖能力, Transwell测定迁移能力,以及在基质胶上的血管生成能力和撤除血清与生长因子后的抗凋亡能力。结果ELISA检测表明转染目的基因EPC上清中的aFGF的量明显增加(P<0．05)。MTS测定显示EPC-aFGF的增殖能力具有增加的趋势,但无统计学意义(P=0．17),其迁移至Transwell下室细胞数明显增多(P<0．05),在基质胶上形成血管样结构的能力明显增加,且在撤除血清和生长因子后,凋亡的细胞数明显减少(P<0．05)。结论转染分泌型aFGF基因能够增强内皮祖细胞的迁移能力、体外血管形成能力和抗凋亡能力,为增强内皮祖细胞功能,提高其成血管效应提供了新的方法。; 陈书艳王飞颜雪芸李毅刚; 关键词：转染祖细胞重组腺相关病毒 PROGENITOR 上清

猪外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定被引量：1: 2005年; 　　从猪外周血分离出单个核细胞,置于EGM-2培养基中培养,通过挑选细胞集落并对之进行免疫组织化学染色和荧光染色来鉴定内皮祖细胞。结果显示猪的内皮祖细胞为长梭形或纺锤形并呈集落生长,能够吞噬已酰化低密度脂蛋(ac-LDL)并结合凝结素BS-1,同时具有内皮细胞标志CD31、flk-1和von willebrand factor(vWF)。这些结果表明能够从猪的外周血中分离培养出内皮祖细胞,为自体内皮祖细胞移植促进猪慢性心肌缺血模型血管新生的研究打下了基础。; 陈书艳王飞周卿颜雪芸许勤舒红荣烨之; 关键词：内皮祖细胞外周血集落血分 CD31 纺锤形

aFGF重组腺相关病毒转染内皮祖细胞被引量：1: 2006年; 目的研究含分泌型人酸性成纤维细胞生长因子（sp-haFGF）基因的重组腺相关病毒（rAAV）感染内皮祖细胞（EPCs）的可行性。方法用PCR法将FGF-4的信号序列与原始的aFGF基因连接，形成sp-haFGF基因。将此目的基因克隆到AAV载体质粒pAAV-IRES-hrGFP中，并与包装质粒（pAAV-RC）和辅助质粒（pHelper）共转染HEK293细胞，获得编码sp-haFGF的重组腺相关病毒。用浓缩的病毒感染体外培养的EPC，荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光蛋白情况，并用RT-PCR和Western blot方法鉴定sp-haFGF在EPC中的表达。结果获得含有sp-haFGF的重组腺相关病毒，将其感染EPC后，约20％-30％的细胞出现绿色荧光。用RT-PCR法从被感染细胞中扩增出一条长约560bp的基因条带，通过Western blot检测到被感染细胞中haFGF蛋白的表达。结论编码sp-haFGF的重组腺相关病毒能够有效地感染EPC，并在EPC中表达haFGF，为进一步研究转基因的内皮祖细胞移植促血管新生奠定基础。; 陈书艳颜雪芸王飞周卿荣烨之; 关键词：酸性成纤维细胞生长因子腺相关病毒内皮祖细胞

血管生长因子在冠心病治疗性血管新生中的应用: 2006年; 血管生长因子在血管新生过程中起着重要作用。大量的动物研究显示在给予血管生长因子后能够有效地促进缺血心肌的血管新生,改善局部血流灌注,提高心功能。但由于临床Ⅱ期试验未取得预期的阳性结果,给治疗性血管新生的应用带来了新的挑战,众多问题有待进一步优化和解决。; 王飞陈书艳; 关键词：血管生长因子血管新生缺血性心脏病

外源性人aFGF在内皮祖细胞中的分泌被引量：1: 2007年; 目的:观察外源重组分泌型人酸性成纤维细胞生长因子(sp-aFGF)在内皮祖细胞(EPC)中的分泌。方法:以腺相关病毒为载体,将sp-aFGF基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)分别导入内皮祖细胞中。收集转基因EPC和未转基因EPC培养液,用ELISA方法检测其中的aFGF蛋白,并比较3组细胞分泌的aFGF的量。结果:在感染细胞的第4天,转基因EPC出现绿色荧光。sp-aFGF-EPC组分泌的aFGF量显著高于GFP-EPC和EPC组[(862±49)ng/Lvs(115±16)ng/L,P<0.05;(862±49)ng/Lvs(98±10)ng/L,P<0.05)]。结论:在EPC中导入外源性sp-aFGF基因能增强人aFGF的分泌。; 颜雪芸王飞周卿荣烨之陈书艳; 关键词：酸性成纤维细胞生长因子信号肽转基因

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国家自然科学基金(30270543)