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小型猪CYP3A88基因克隆与其他动物的序列比较被引量：5: 2009年; 目的克隆我国资源小型猪品系巴马香猪肝脏中的CYP3A88基因,并进行生物信息学分析。方法应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术对其全长进行扩增,测序,利用Internet和GenBank数据库对其序列进行生物信息学分析。结果首次克隆并鉴定了我国资源小型猪品系巴马香猪肝脏中CYP3A88(GenBank登录号:EF625347)的编码区,获得大小为1965bp的全长cDNA,编码区长为1512bp,编码503个氨基酸;比较核苷酸序列,与小型猪CYP3A39相似性高达94%,而与人等其它动物的CYP3A相似性则在86%以下;推导和分析氨基酸序列表明,与小型猪CYP3A其它成员(CYP3A39、CYP3A29、CYP3A22)进行对比,其相似性分别为92%,89%,80%,而将小型猪与人的CYP3A分别比对,小型猪CYP3A88与人CYP3A4相似性最高,为77%;对其二级结构预测,它可能含12个α螺旋,4个β折叠;经NCBI上的CDD程序分析可知,其39～491氨基酸区域为P4503A亚家族保守结构区域;经聚类分析,小型猪和狗的CYP3A与人有较近的进化关系;通过同源建模法对其在线建模,人CYP3A4晶体结构作为其模建模型,得到了其经典的三维结构。结论在猪CYP3A家族四个基因中,CYP3A88在序列和高级结构上均与人CYP3A4的最为相似。; 王世春桂蓓商海涛刘宇魏泓; 关键词：小型猪 RACE技术

五指山小型猪动脉粥样硬化模型的建立被引量：23: 2007年; 目的建立五指山小型猪动脉粥样硬化模型，探讨小型猪动脉粥样硬化模型复制规范。方法3～4月龄五指山小型猪30头，随机分为3组：对照组6头，喂基础饲料；实验组分别饲喂含1．5％胆固醇的高脂饲料（T1组）和含3．0％胆固醇的高脂饲料（T2组）。实验过程中进行一般临床观察和血脂相关指标检查，在实验后4、6、8和12个月，实验组分别处死动物3头，对照组分别在实验后6个月和12个月各处死3头，对动物的心血管系统和主要脏器做病理学检查。结果高胆固醇、高脂饲料能够引起五指山小型猪血清胆固醇指标升高和动脉粥样硬化病变形成。实验组血清LDL-C、TC和HDL-C值在实验后1个月显著升高，升高幅度最高分别达到对照组的13．3～15．0倍、8．2～10．2倍和3．3～4．2倍。在实验后4个月，实验组动物均出现明显的早期动脉粥样硬化病变，至6个月和8个月，动脉病变逐渐加重，最严重的病变可达病理分级的Ⅳ级。至实验后12个月，在动物的大、中动脉观察到广泛的病变，最严重部位达到病理分级的V级。动脉病变易发且严重的部位为腹主动脉、髂动脉和冠状动脉，动脉病变少见且较轻的部位为颈总动脉、肠系膜总动脉和肾动脉。血脂相关指标的升高幅度、动脉病变的出现时间和严重程度T2组比T1组略重，但是差异不十分显著。结论小型猪食饵性动脉粥样硬化模型的诱导配方中，胆固醇含量以1．5％～2．0％为宜，观察早期动脉病变诱导时间需要4至8个月，晚期病变则需要12个月以上的诱导时间。; 陈华谢忠忱黄广勇刘亚千李春海郭雄明辛宁波; 关键词：小型猪动脉粥样硬化动物模型胆固醇

五指山小型猪动脉粥样硬化模型的病理学研究被引量：8: 2007年; 目的观察小型猪动脉粥样硬化模型动脉病变的形态特点、分布规律和发展过程，为小型猪动脉粥样硬化模型的应用提供基础资料。方法3～4月龄五指山小型猪30头，随机分为3组，对照组6头，喂基础饲料，实验组分别饲喂含1、5％胆固醇的高脂饲料（T1组，12头）和含3．0％胆固醇的高脂饲料（他组，12头），在实验后4、6、8和12个月，T1和他组分别处死动物3头，对照组分别在实验后6个月和12个月各处死3头，对动物的心血管系统和主要脏器做病理学检查。结果实验后4个月，实验组动物均出现明显的早期动脉粥样硬化病变，至6个月和8个月，动脉病变逐渐加重，在实验后12个月，于动物的大、中血管观察到广泛的动脉病变。动脉病变易发且严重的部位为腹主动脉、髂动脉和冠状动脉，动脉病变少见且较轻的部位为颈总动脉、肠系膜总动脉和肾动脉。动脉病变大体分为3种类型，分别为以胸主动脉为代表的脂纹性病变，以腹主动脉为代表的纤维斑块病变和以冠状动脉为代表的中小动脉病变。动脉病变的发展过程在不同血管和不同部位也有差别，动脉病变的出现时间和严重程度动物个体之间差别较大，T1组和他组差别不十分显著，以他组略重。结论小型猪动脉粥样硬化病变与人类十分相似，但是不同部位的血管病变类型和发展过程有所不同，应根据实验需要选择观察血管和实验周期。; 陈华李春海谢忠忱刘亚千郭雄明; 关键词：小型猪动脉粥样硬化病理学

三个品系小型猪Ⅱ型糖尿病模型的比较研究被引量：18: 2007年; 目的比较三个品系小型猪对高糖高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病模型的敏感性，为我国小型猪在Ⅱ型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法4～5月龄巴马小型猪、五指山小型猪和中国农大小型猪各6头，以4头中国农大小型猪为对照，同步开展高糖高脂饲料喂养试验，试验周期8个月。每月称1次体重，测定血糖、血清胰岛素含量，每2个月进行1次静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT），测定脂质代谢相关指标。结果巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料比较敏感，在饲喂5～6个月后，开始出现糖代谢异常，表现为显著肥胖、血清胰岛素升高和胰岛素敏感性下降。至实验后8个月，巴马小型猪和五指山小型猪各有1头发展为糖尿病，分别有3头和2头出现糖尿病前期症状。中国农大小型猪对高糖高脂饲料诱发糖尿病相对不敏感，实验期间空腹血糖水平、血清胰岛素含量、胰岛素敏感指数和IvGlTr一直无显著变化，仅在实验后7个月开始表现肥胖，8个月出现胰岛素敏感性减低。三个品系小型猪在高糖高脂饲喂后，血脂相关指标（TG，CHO，HDL-C，LDL-C）普遍升高，以巴马小型猪升高幅度最大。结论巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病比较敏感，品系内个体差异较大。中国农大小型猪相对不敏感。这一结果为进一步的Ⅱ型糖尿病相关基因分析和高敏感家系培育研究提供了基础资料。; 陈华刘亚千李春海郭雄明黄丽洁; 关键词：小型猪动物模型五指山小型猪巴马小型猪

小型猪肝脏细胞色素P450基因CYP3A29克隆与序列分析被引量：10: 2008年; 设计引物通过RT-PCR扩增巴马香猪和贵州小型猪香猪药物代谢关键P450基因CYP3A29基因的全长编码区,纯化并克隆入pMD 18-T载体,通过序列测定和比对分析其序列变异情况。17头小型猪共发现CYP3A29基因的5个单核苷酸变异位点,均表现为同义替换,对编码的氨基酸序列无影响;猪CYP3A29的单核苷酸变异和品系相关,在不同品系中可表现出品系特有的单核苷酸变异;贵州小型香猪G3 a2902发现1个可变剪接,缺失89 bp并产生移码,改变编码蛋白。本研究克隆的巴马香猪和贵州小型香猪CYP3A29基因及其序列变异情况,可为其作为药物代谢模型的应用提供技术资料。; 商海涛杨家大魏泓桂蓓; 关键词：细胞色素P450 小型猪可变剪接

荣昌猪和两种小型猪遗传背景的微卫星分析被引量：8: 2008年; 荣昌猪是我国优良地方品种，巴马香猪和贵州小型香猪为我国独特小型猪品系。本研究采用美国猪基因组协作计划推荐的19个微卫星标记对荣昌猪、荣昌猪B系、巴马香猪、贵州小型香猪及外来猪种大白猪进行了遗传学检测和分析。结果表明：19个微卫星位点在群体中均表现为多态，每位点等位基因数10～23个。5个猪种中荣昌猪B系的遗传多样性最高，荣昌猪次之；2种小型猪的遗传多样性较低，其中巴马香猪的等位基因数（121个）略大于贵州小型香猪（114个），但其遗传多样性指数（平均期望杂合度0．6535±0．0347）小于贵州小型香猪（0．6919±0．0227），反映了巴马香猪较低的基因杂合度和较小的遗传变异；大白猪的遗传多样性最低。从品系的共有等位基因来看，荣昌猪B系基因背景组成中其亲本品系荣昌猪所占比例（30．22％）要大于大白猪（24．37％）；大白猪和其他4个猪群体的共享等位基因数均较低（21．24％～25．12％）；巴马香猪和贵州小型香猪之间共有等位基因数最高（45．06％）。采用基于遗传距离的NJ法和基于基因频率的最大似然法进行系统聚类，除了大白猪明显为独立分支及荣昌猪B系表现出较远的聚类关系外，其他3个猪种间的聚类有所不同。; 商海涛黄宏刚白小青李琴王金勇魏泓; 关键词：小型猪微卫星

小型猪几种关键造血因子在不同组织中的表达水平分析: 2006年; 目的检测小型猪骨髓、肾上腺、肾、脾、肝和骨骼肌中,SCFI、L-3I、L-6、GM-CSF和EPO等关键造血因子的表达水平,为小型猪造血相关研究提供实验基础。方法①取小型猪骨髓、肾上腺、肾、脾、肝和骨骼肌,经无菌处理后,按1∶9比例将组织块和含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液加入培养瓶,37℃、5%CO2培养5 h,收集上层培养液;②在肾组织培养瓶中补充培养液,培养至24 h9、6 h,分别收集上层培养液;③用定量ELISA检测培养液中SCFI、L-3、IL-6、GM-CSF和EPO含量。结果①培养5 h,SCFI、L-3、IL-6、GM-CSF、EPO 5种造血因子含量在骨髓培养液中分别为14.25、8.67、0、5.69、16.00 IU/L;在肾上腺培养液中分别为19.96、30.67、7.00、8.45、5.57 IU/L;在肾培养液中分别为53.00、98.67、107.96、34.48、63.83 IU/L;在脾培养液中分别为15.67、4.67、0、4.31、9.91 IU/L;在肝培养液中分别为24.96、36.67、29.86、12.93、28.61IU/L;在骨骼肌培养液中分别为17.82、14.67、42.71、9.12、21.65 IU/L;②肾组织培养24 h:SCF 147.61 ng/LI、L-3 298.67ng/LI、L-6 385.44 ng/L、GM-CSF 91.55 ng/L、EPO 158.09 IU/L;肾组织培养96 h:SCF 142.96 ng/LI、L-3 295.34 ng/L、IL-6 249.72 ng/L、GM-CSF 126.72 ng/L、EPO 148.96 IU/L。结论①小型猪肾组织培养液中各造血因子浓度均为最高,其次为肝和骨骼肌。②以上细胞因子在肾组织原代培养中持续表达,除GM-CSF浓度一直呈上升趋势外,其它4种细胞因子浓度均在第24 h达到最高。; 刘真蒋天伦赵树铭陈敏刘宇商海涛魏泓; 关键词：小型猪原代培养造血因子

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“十五”国家科技攻关计划(2004BA717B-03)

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