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慢病毒介导的RNA干扰沉默Slug基因对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响: 2012年; 目的:探讨利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默Slug基因,观察对结肠癌HCT116细胞增殖和周期的影响。方法:构建Slug基因特异性siRNA慢病毒载体,感染结肠癌HCT116细胞,设立空白对照组、阴性对照组及SlugsiRNA三组,应用Real-time PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平检测各组干扰质粒对Slug基因的干扰效果,MTT法检测Slug基因在siRNA作用下的细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡周期变化情况。结果:转染Slug siRNA后,结肠癌HCT116细胞中Slug基因mRNA和蛋白表达明显受到抑制(P<0.05);MTT检测,干扰组细胞增殖水平明显低于阴性对照组;流式细胞仪检测细胞G1期细胞百分比(52.3±0.6)高于阴性对照组(45.1±0.3,P<0.05)。结论:Slug siRNA能明显下调靶基因Slug的表达,在体外可抑制结肠癌HCT116细胞的生长并促进其凋亡。; 钱江陈旺盛文坤明傅仲学; 关键词：RNA干扰 SLUG 细胞增殖凋亡

沉默PLD2基因对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响被引量：2: 2016年; 目的:探讨沉默磷脂酶D2(phospholipases D2,PLD2)基因的表达对人结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响及其潜在的分子机制。方法:采用载有靶向PLD2的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)腺病毒转染SW480和SW620细胞;q RTPCR和Western blot法检测转染后结肠癌细胞PLD2的m RNA和蛋白质表达的变化;平板克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖和细胞迁移能力的变化;采用Western blot法检测转染前后细胞中周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)蛋白的表达。结果:转染PLD2 si RNA后结肠癌细胞PLD2 m RNA和蛋白的表达量明显下降(均P<0.01),沉默PLD2表达后细胞的增殖和迁移能力明显受抑制,同时Cyclin D1和MMP-2蛋白的表达量也明显下调(均P=0.000)。结论:干扰PLD2表达引起的细胞增殖和迁移能力的下降可能与Cyclin D1和MMP-2表达下调密切相关,提示PLD2可能成为结肠癌治疗的新靶点之一。; 杜昆利刘茂希张寿儒吴星烨曾丽傅仲学; 关键词：细胞增殖细胞迁移结肠癌小干扰RNA

脂质体递药系统与奥沙利铂脂质体对结直肠癌治疗的研究被引量：3: 2013年; 奥沙利铂对晚期结直肠癌的临床治疗有较好效果，但有剂量限制性毒性。脂质体作为药物载体，具有缓释性、靶向性和降低药物毒副作用的特点。脂质体的主动靶向修饰对改变抗肿瘤药物的生物分布，减少或逆转肿瘤细胞的多药耐药性，提高抗肿瘤药物的作用也具有意义。利用脂质体的特性，将奥沙利铂制成脂质体治疗结直肠癌有一定意义。; 杨闯傅仲学; 关键词：结直肠肿瘤奥沙利铂脂质体

PRDX1通过上皮间质转化促进结肠癌SW480细胞侵袭转移被引量：7: 2015年; 目的探讨过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)在结肠癌上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)发生中的作用及其参与结肠癌侵袭转移的可能机制。方法通过慢病毒转染使结肠癌SW480细胞PRDX1过表达并通过Western blot检测验证;采用Transwell方法和细胞划痕实验检测细胞侵袭及转移能力的变化;免疫细胞荧光检测结肠癌SW480细胞EMT相关蛋白Twist1、E-cadherin及Vimentin的表达;Western blot方法检测EMT转录因子Twist1、EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin及转移相关蛋白MMP-9的表达。结果转染PRDX1组SW480细胞中PRDX1呈过表达;Transwell法和细胞划痕实验显示过表达PRDX1组细胞的侵袭及转移能力较对照组明显增强;免疫细胞荧光显示转染PRDX1组细胞其上皮细胞标记E-cadherin明显下调,间质标记Vimentin及EMT转录因子Twist1表达明显上调;Western blot结果表明过表达PRDX1组E-cadherin较对照组显著降低(P<0.01),而Twist1、MMP-9、N-cadherin及Vimentin较对照组显著升高(P<0.05)。结论 PRDX1可促进人结肠癌SW480细胞EMT的发生,从而增强结肠癌SW480细胞的侵袭、转移能力。; 冯继红冯冬冬傅仲学; 关键词：结肠癌上皮间质转化

Prdx2在结直肠癌细胞增殖、凋亡中的作用及其机制研被引量：6: 2014年; 目的观察Prdx2基因对结直肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法将干扰片段(Prdx2-shRNA)及空载体(阴性对照)经慢病毒转染结直肠癌细胞株SW480,1.25μg/ml嘌呤霉素筛选,建立稳定细胞株,以野生型SW480细胞作为空白对照。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR及Western blotting检测Prdx2及survivin的mRNA和蛋白表达情况。结果沉默Prdx2基因对结直肠癌细胞株SW480的生长和增殖有明显抑制作用。与阴性对照(5.59%±0.63%)及空白对照(5.79%±0.60%)比较,Prdx2基因沉默后,细胞凋亡率明显增加(26.60%±4.39%,P<0.05)。qRT-PCR、Western blotting结果显示,干扰Prdx2基因明显降低了survivin mRNA及蛋白表达。结论沉默Prdx2基因可抑制结直肠癌细胞增殖,增加凋亡,其机制可能与下调survivin的表达有关。; 王昊傅仲学卢伟东魏锦来黄镇谢勇; 关键词：结直肠肿瘤 RNA干扰细胞凋亡

Oct4基因沉默对结直肠癌细胞凋亡的诱导作用及机制研究被引量：7: 2012年; 目的探讨Oct4基因沉默对人结直肠癌SW480细胞凋亡的影响及其可能机制。方法将对数生长期SW480细胞分为3组。①空白对照(Con)组:不转染病毒;②阴性对照(NC)组:转染阴性对照病毒;③RNA干扰(RNAi)组:转染Oct4-shRNA慢病毒载体。采用实时荧光定量PCR检测Oct4 mRNA表达;采用Western blotting检测Oct4、p-Akt蛋白表达;采用流式细胞仪测定Oct4+及CD44+细胞比例变化及肿瘤细胞凋亡情况。结果与NC组比较,RNAi组Oct4的mRNA(分别为1.00和0.19±0.02)和蛋白(分别为0.032±0.004和0.007±0.001)表达量均有明显下降(P<0.01),Oct4+细胞比例(分别为91.53%和10.70%)和CD44+细胞比例(分别为59.69%和23.58%)明显减少,p-Akt蛋白表达明显受抑(0.11±0.03和0.03±0.01),细胞凋亡明显增加(分别为12.1%±1.8%和43.2%±4.5%,P<0.01)。结论沉默Oct4基因可明显减少SW480细胞中Oct4+及CD44+细胞比例,增加细胞凋亡,其作用可能与PI3K/Akt通路有关。; 文坤明傅仲学张贵海陈旺盛钱江; 关键词：结直肠肿瘤 RNA干扰细胞凋亡

过氧化氧化还原蛋白2在结直肠癌中的表达及其作用机制的研究: 2014年; 目的:探讨过氧化氧化还原蛋白2(peroxiredoxins 2,PRDX2)在结直肠癌及正常结直肠组织中的表达情况及其可能的作用机制。方法:收集32例组织标本,采用免疫组织化学及Western blot的方法对PRDX2在结直肠癌组织及正常结直肠组织中的表达情况进行检测;免疫共沉淀及HPLC-CHIP-MS/MS方法检测结肠癌细胞SW480中与PRDX2相互作用的蛋白质。结果:免疫组织化学显示:PRDX2蛋白主要表达于细胞浆,在结直肠正常组织(21.88%,7/32)与结直肠癌组织中(71.88%,23/32)PRDX2蛋白的表达差异有统计学意义(P=0.001)。随机抽取8例标本进行Western blot的检测,PRDX2蛋白在7例癌组织中表达高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.01)。在结肠癌细胞SW480中鉴定出17种与PRDX2相互作用的蛋白质,其中有9种蛋白受c-Myc基因的调控。结论:PRDX2在结直肠癌的发展、转移中发挥了一定的作用;PRDX2可能与c-Myc基因调控通路间存在密切的联系。; 吴星烨刘茂希杜昆利傅仲学; 关键词：结直肠肿瘤 C-MYC

鞣酸通过下调TMEM16A的表达抑制人结肠癌细胞SW620细胞的增殖被引量：2: 2014年; 目的：探讨鞣酸对人结肠癌SW620细胞增殖及TMEM16AmRNA与蛋白水平的影响。方法将对数生长期的人结肠癌细胞SW620分为3组，分别是鞣酸低剂量组（50μmol/L）及高剂量组（100μmol/L），以及二甲基亚砜（DMSO）作为空白对照组，培养48、72h。MTT法检测细胞的增殖情况，流式细胞仪测定细胞周期的分布及凋亡情况，RT-PCR和Westernblot分别检测TMEM16A的mRNA水平和蛋白水平。计量资料采用x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK检验。结果MTT结果显示：鞣酸处理能显著抑制SW620的增殖。高剂量组对SW620细胞的抑制作用比低剂量大。处理48h，高剂量组比低剂量组抑制作用明显（t＝15．35，P＜0．01）；处理72h，高剂量组同样比低剂量组抑制作用明显（t＝22．32，P＜0．01）。流式细胞检测结果显示：与对照组相比，各个剂量组都能显著将SW620细胞抑制在G0/G1期和S期（F＝6782．1、1509．3，P＜0．01），G2/M期的细胞比例差异无统计学意义（F＝1．37，P＞0．05）。各个剂量组处理后，凋亡率差异有统计学意义（F＝545．3，P＜0．01）。与对照组比较，鞣酸高剂量组的3H-TdR、3H-Leucine掺入量在48、72h均明显低于对照组（P＜0．05）。鞣酸低剂量组药物干预48、72h后TMEM16AmRNA相对表达量分别为0．63±0．01和0．62±0．01；鞣酸高剂量组药物干预48、72hTMEM16AmRNA相对表达量分别为0．58±0．01和0．50±0．01，均低于空白对照组的0．85±0．01（F＝7．645，P＜0．05）。鞣酸低剂量组药物干预48、72h后TMEM16A蛋白相对表达量分别为0．68±0．14和0．65±0．12；鞣酸高剂量组药物干预48、72hTMEM16蛋白相对表达量分别为0．64±0．15和0．63±0．11，低于空白对照组的1．28±0．06（F＝4．508，P＜0．05）。结论鞣酸能明显抑制人结肠癌细胞SW620细胞的增殖，将其细胞周期阻滞于G1～S期，并下调T; 李尚坤傅仲学文坤明吴星烨; 关键词：鞣酸结肠癌细胞细胞周期

RNA干扰Slug基因对HCT116细胞裸鼠移植瘤生长及转移的影响: 2014年; 目的:探讨通过靶向RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制Slug基因的表达,观测对荷瘤裸鼠结直肠癌生长及转移的影响。方法:利用结肠癌细胞株HCT116对24只5周龄裸鼠皮下种植,建立结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,设立空白对照组、阴性对照组及实验组三组,每组8只。分别注射生理盐水、阴性对照质粒及慢病毒载体,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,观察各组间肿瘤生长及淋巴结转移的变化,应用免疫组化、qRT-PCR和Western blot检测Slug基因和蛋白表达情况。结果:Slug基因shRNA实验组与空白对照组和阴性对照组相比,瘤体生长减缓,移植瘤质量明显减小(3.08±0.31 vs 7.37±1.18,7.46±1.16,P<0.01),Slug蛋白表达明显降低(P<0.05);实验组淋巴结阳性率为36.3%(4/11),与阴性对照组77.8%(14/18)及空白对照组68.4%(13/19)相比较(P<0.01)。结论:靶向Slug的RNA干扰可以显著抑制结肠癌裸鼠模型的生长、淋巴结转移以及癌组织中Slug基因蛋白的表达,可能成为结肠癌基因治疗的潜在分子靶点。; 钱江韩佳陈鹏朱春丽傅仲学; 关键词：RNA干扰 SLUG 裸鼠 HCT116

结直肠癌耐药细胞株诱导上皮间质转化的研究被引量：6: 2012年; 目的建立结直肠癌耐奥沙利铂细胞株，观察该细胞株上皮间质转化（EMT）标记物的变化。方法以耐药SW620／OxR细胞及亲本SW620细胞为研究对象，采用流式细胞技术检测P-糖蛋白^＋（P—gp^＋）及Survivin^＋细胞比例，Western blot法检测EMT标记物[E-钙黏素（E-eadherin）、N—cadherin、波形蛋白（Vimentin）]的变化。结果与SW620细胞株比较，SW620／OxR细胞中P—gp^＋细胞数[（63．78±6．82）％比（10．35±2．59）％，P〈0．01]、Survivin^＋细胞数[（43.59±9.26）％比（7．82％±3．48）％，P〈0．01]及间质标记物N—cadherin（0．33±0．06比0，19±0．05，P〈0．05）、Vimentin（0．38±0．07比0．09±0．02，P〈0．01）明显增高，而上皮标记物E-cadherin（0．45±0．07比0．86±0．18，P〈0．01）表达则明显下降。结论SW620／OxR细胞株高表达P—gp和Survivin基因及蛋白，并诱导EMT发生。; 文坤明傅仲学张贵海陈旺盛钱江冯继红; 关键词：结直肠肿瘤化疗上皮间质转化

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