甘肃省自然科学基金(32S041-A25-035)
- 作品数：8 被引量：31H指数：4
- 相关作者：刘光远田占成谢俊仁李知新龚真莉更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划甘肃省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达被引量：2
- 2009年
- 根据GenBank中的长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂(Haemaphysalis longicornisserine proteinase inhibitor-2,HLS2)基因序列设计特异性引物,以长角血蜱饥饿成蜱总RNA为模板,经RT-PCR扩增出1 164 bp的HLS2DNA片段。将其与pET-30a载体连接,构建pET-30a-HLS2表达载体,转化J M109大肠杆菌,筛选阳性克隆,经双酶切鉴定及测序分析后转化到E.coliBL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析。优化表达条件后纯化融合蛋白,用Western blotting鉴定其抗原性。结果表明,获得的HLS2 DNA片段与GenBank中的HLS2(序列号AB162827)序列的同源性为98%。构建的pET-30a-HLS2表达载体在大肠杆菌中表达了约为47000的HLS2融合蛋白,主要以包涵体形式存在,IPTG终浓度为1.0 mmol/L、28℃诱导7 h后融合蛋白的表达量最高。Western blotting显示该融合蛋白可与兔抗长角血蜱阳性血清反应。
- 王路刘光远谢俊仁龚真莉田占成柴慧萍贾宁
- 关键词：长角血蜱原核表达
- 基于18S rRNA基因测序基础上的锥虫分子分类学被引量：5
- 2009年
- 利用18S rRNA基因序列分析方法，对我国湖北、广西、新疆和浙江4省的伊氏锥虫及1株布氏锥虫进行分子分类学研究。用分离的锥虫感染实验动物，自感染小鼠的红细胞或全血中提取基因组DNA，根据GenBank中已发表的锥虫18S rRNA序列设计1对锥虫通用引物，通过PCR扩增目的基因片段，将扩增产物连接到pGEM—T载体中，经酶切、PCR确定．进行序列测定。结果显示，7个锥虫分离株的18S rRNA基因大小为2188bp。利用DNAStar对试验所获得的这7株堆虫和GenBank中部分锥虫的18S rRNA基因进行比较分析，建立2个进化系统发生树。核苷酸同源性比较及系统发生树显示：自我国上述4省分离的伊氏锥虫来源于同一株系，布氏锥虫和广西分离的伊氏锥虫株的18S rRNA核苷酸与其他锥虫分离株仅有较小差异，与国外的6株锥虫的同源性为99％～100％。与另外7株的同源性为62％。
- 刘光远田占成龚真莉谢俊仁李知新
- 关键词：锥虫RRNA基因
- 长角血蜱卵cDNA表达文库的构建被引量：6
- 2008年
- 【目的】以长角血蜱卵为材料构建高质量的长角血蜱卵cDNA表达文库,为进一步筛选克隆目的基因奠定基础。【方法】在无RNA酶污染的环境下从长角血蜱卵中提取RNA,进而纯化mRNA,采取oligo(dT)引物合成双链cDNA,定向克隆到λSCREEN载体。用PhageMaker extract对其进行体外包装以形成完整的噬菌体,转染大肠杆菌ER1647,测定库容量。并用构建的cDNA文库克隆已知的长角血蜱促卵泡激素基因。【结果】所构建长角血蜱卵cDNA表达文库的基础库容量约为1.38×106PFU,重组率为100%,扩增后文库的滴度为2×109PFU·ml-1。获得了目的基因,其序列与GenBank中的长角血蜱促卵泡激素(DQ248886)的核苷酸序列的同源性为97.8%。【结论】成功构建了长角血蜱卵cDNA表达文库。
- 刘光远田占成才学鹏李知新谢俊仁王路张林龚真莉
- 关键词：长角血蜱CDNA表达文库
- 长角血蜱甘肃株肌钙蛋白基因P27/30的克隆和序列分析被引量：3
- 2007年
- 参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株肌钙蛋白P27/30基因的核苷酸序列,设计合成一对引物,从本实验室保藏的干净长角血蜱卵中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出607 bp的肌钙蛋白基因,将其克隆于PGEM-T-Easy载体,对其进行序列分析,并推导出氨基酸序列,将这一序列与国内外已发表的长角血蜱肌钙蛋白基因进行比较分析。结果表明本实验室保藏的长角血蜱甘肃株与上述已发表的Okayama株核苷酸序列同源性为92.1%,氨基酸同源性为86%。长角血蜱甘肃株与Okayama株、四川孤雌生殖株的发育有一定差异。经RT-PCR分析表明,该基因在长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱和饥饿成蜱这几个阶段均有表达。
- 田占成刘光远李知新谢俊仁王路张林
- 关键词：长角血蜱克隆
- 蜱免疫球蛋白结合蛋白的研究进展被引量：1
- 2008年
- 从蜱与宿主的相互作用、宿主免疫球蛋白-G(IgG)在蜱体内的代谢过程、免疫球蛋白结合蛋白(IGBP)的发现及其在具尾扇头蜱中的功能等方面阐述了IGBP与抗蜱免疫的关系。认为抗蜱疫苗的成功策略或许是"二次联合疫苗",而IGBP是该策略的关键成分之一。阻断蜱IgG分泌系统的功能和目标关键成分的分泌能快速杀死蜱,因而,利用IGBP研制联合抗蜱疫苗的策略具有现实的可能性。
- 刘光远才学鹏
- 关键词：唾液腺疫苗
- 不同饲喂方式和温度对长角血蜱甘肃株生物学特性的影响被引量：8
- 2010年
- 在不同饲喂方式和温度条件下,观察我国北方长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)甘肃株的生活史及对其生物学特性的影响。将试验蜱分组后置于不同饲喂方式和温度下,待其发育到下一阶段,叮咬实验动物,连续调查其发育阶段的生物学特性。研究发现,完成一个世代需101 d～148 d。成年饥饿雌蜱吸血期具有两个显著特征:缓慢吸血和快速吸血;经兔体叮咬的成年雌蜱其饱血体重小于羊体。不同饲喂条件下长角血蜱饱血体重、产卵量差异极显著(P<0.01);在一定温度范围内,幼蜱、若蜱的蜕变时间随温度的升高而缩短;当饱血雌蜱处于发育阶段时,产卵前期、产卵期及卵的孵化期均随着温度的升高而缩短;16℃～30℃条件下长角血蜱产卵量没有变化,利于蜱的存活;4℃以下和45℃以上饱血蜱及其后代不能存活;16℃以下蜱的发育周期延长。结果表明,长角血蜱为三宿主蜱;雄蜱可以帮助雌蜱吸血;在羊体上的吸血能力优于在兔体上的吸血能力;温度对长角血蜱的发育繁殖有影响。
- 李知新刘光远田占成谢俊仁
- 关键词：长角血蜱生物学特性温度饲喂方式
- 蜱源蛋白酶及其应用前景被引量：3
- 2007年
- 蜱源蛋白酶在蜱和蜱传播疾病的致病机制中发挥重要的生理功能,但对于定性的寄生原虫蛋白酶来说了解得还不很透彻,为了进一步研究蜱源蛋白酶的功能及其特征,筛选出更有价值的蛋白酶基因作为抗蜱疫苗候选抗原基因,从已有的蜱源蛋白酶生理作用角度介绍了蜱源蛋白酶的重要性,提出了将来研究蜱蛋白酶要攻克的难点,为我国采用分子文库的方法筛选抗蜱疫苗候选抗原及研制化学药物提供资料。
- 田占成刘光远白启
- 关键词：蛋白酶
- 长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库的免疫筛选与初步分析被引量：9
- 2008年
- 蜱的免疫预防是目前国内外研究的热点,以抗血清为探针筛选cDNA表达文库是获取功能抗原基因的有效的方法之一,为了获得抗长角血蜱免疫原基因,用兔抗长角血蜱血清和兔抗长角血蜱唾液腺蛋白血清对长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库进行了免疫筛选,经过两轮筛选共获得34个阳性克隆,所得阳性噬菌体转染宿主菌BM25.8使之亚克隆为重组质粒,用此质粒转化宿主菌JM109并进行序列测定和生物信息学分析.结果表明:在长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库中获得26个长角血蜱免疫相关cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱HL35、黏附素hlim3假定蛋白、热休克蛋白、NADH脱氢酶、钙网蛋白以及杂色花蜱和肩突硬蜱的二硫异构酶等具有同源性.所获阳性克隆为长角血蜱保护性抗原基因的筛选奠定了基础.
- 刘光远谢俊仁田占成李知新龚真莉王路柴慧萍才学鹏
- 关键词：长角血蜱唾液腺CDNA表达文库免疫筛选
