国家自然科学基金(31070831)
- 作品数：12 被引量：45H指数：3
- 相关作者：郭风劲杜宇杨开祥吴颖星宫晨更多>>
- 相关机构：华中科技大学聊城市人民医院郑州市儿童医院更多>>
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- 去分化重编排脂肪干细胞在张应力刺激下成骨分化的研究
- 2013年
- 目的探讨去分化重编排脂肪干细胞在张应力刺激下的成骨分化并探讨其分子机制。方法分离人脂肪干细胞（hASCs），取第3代hASCs进行去分化重编排并标记为去分化重编排脂肪干细胞（De—hASCs）。张应力刺激条件下，将De．hASCs和hASCs在成骨诱导液中培养1周。并于培养4d和7d后检测碱性磷酸酶（ALP）活性，Runx2的mRNA和蛋白表达水平，骨形态发生蛋白（BMP）-2和基质金属蛋白酶（MMP）-3的mRNA表达水平。结果张应力刺激4d后，De—hASCs组的ALP活性高于hASCs组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。张应力刺激7d后，De—hASCs组ALP活性高于hASCs组，且差异有统计学意义（P〈0．05）。张应力刺激4d和7d后，De—hASCs组Runx2的mRNA和蛋白表达水平均明显高于hASCs组，且差异有统计学意义（P〈0．05）。张应力刺激4d和7d后，De—hASCs组BMP-2和MMP-3的mRNA表达水平均明显高于hASCs组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论张应力刺激条件下，去分化重编排脂肪干细胞具有更强的成骨分化能力，且与其上调BMP-2和MMP-3基因表达相关。
- 叶亚平胡伟华杜宇吴颖星杨开祥郭风劲
- 关键词：成骨分化脂肪干细胞
- NF-κBshRNA转染骨髓间充质干细胞对炎症因子的影响被引量：1
- 2014年
- 目的鉴定NF-κB/p65-shRNA质粒并转染入骨髓间充质干细胞,检测靶细胞在NF-κB通路激活时磷酸化NF-κB/p65的表达。方法用双酶电泳鉴定所得质粒。使用HP试剂将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至小鼠BMSCs,在荧光显微镜下观察绿色荧光,并且以流式细胞术检测转染效率,最后以Western Blot检测转染后靶细胞在炎症环境下对磷酸化NF-κB/p65表达的抑制情况。结果 NF-κB/p65-shRNA质粒酶切鉴定结果与预期一致;流式细胞术检测转染效率达到52.76%;Western Blot检测在炎症环境刺激下,转染后靶细胞磷酸化NF-κB/p65表达明显降低。结论成功将NF-κB/p65-shRNA质粒转染至BMSCs中并有效表达,为进一步实验通过BMSCs修复和重建骨关节炎患者的软骨组织奠定基础。
- 吴颖星杨卿杨开祥叶亚平向威郭风劲
- 关键词：NF-ΚB间质干细胞骨关节炎
- 动态压应力促进软骨前体干细胞Sox9和细胞外基质表达的实验研究被引量：3
- 2016年
- 目的：研究间断性动态压应力对体外培养的大鼠软骨前体干细胞Sox9及软骨特异性细胞外基质表达的影响。方法细胞免疫磁珠分选并体外培养大鼠软骨前体干细胞（PSC），使用自行设计制备的细胞压力装置对细胞进行间断性（1 d刺激12 h，分别1 d，3 d和7 d）的压应力刺激（90 mmHg，1 mmHg=0.133 kPa），未刺激组为对照组，采用荧光实时定量聚合酶链反应检测各组细胞的Sox9和软骨特异性细胞外基质（Ⅱ型胶原）的基因表达情况，Western印迹检测细胞Sox9和Ⅱ型胶原蛋白表达水平并进行分析。结果在动态压应力刺激下，软骨前体干细胞各时间点Sox9和Ⅱ型胶原的基因表达水平明显增加并高于对照组（P〈0.05）；压力刺激1 d，3 d和7 d后，于对照组相比，其Sox9和Ⅱ型胶原mRNA表达水平分别增加了约1.9倍和2.1倍，3.5倍和3.4倍以及4.6倍和4.3倍。1 d压力组Sox9和Ⅱ型胶原蛋白表达与对照组无明显差异（P〉0.05），3 d和7 d时间点的蛋白表达增加并高于对照组（P〈0.05）；Sox9和Ⅱ型胶原基因和蛋白表达水平都随着压应力刺激时间增加而增加。结论间断性动态压应力可以明显增加大鼠软骨前体干细胞Sox9和Ⅱ型胶原的表达，并可能会促进软骨前体干细胞向软骨细胞的分化。
- 李昆朋张雯李忠马金柱祁军杜宇郭风劲
- 关键词：细胞外基质干细胞
- 波长620nm红光促进前软骨干细胞向软骨细胞分化的实验研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨620nm波长红光在诱导前软骨干细胞（PSCs）向软骨细胞分化中的作用。方法使用细胞免疫磁珠分选大鼠PSCs并体外培养，使用发光二极管（LED）发出的620nm波长红光，分别予以不同能量照射细胞，使用阿利新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色观察软骨特异性细胞外基质（Ⅱ型胶原和蛋白聚糖）表达情况，光镜下观察细胞形态改变。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术分别检测各组细胞的Sox9和Ⅱ型胶原mRNA表达并进行半定量分析。结果PSCs经过软骨诱导和红光照射14d后，细胞形态由梭形变为多角形和类圆形，阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性反应，单纯诱导组呈弱阳性而对照组呈阴性；RT—PCR结果显示红光诱导的各组细胞Sox9和Ⅱ型胶原mRNA表达均明显增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），0．5J／cm2组、1J／cm2组和2J／cm2组组间差异具有统计学意义（P〈0．05），但4J／cm2组和2J／cm2组组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论低能量620nm红光照射对诱导PSCs向软骨细胞分化有明显的促进作用。
- 李昆朋许涛杜宇宫晨彭飞陈安民郭风劲
- 关键词：软骨细胞细胞分化前软骨干细胞
- 周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的影响被引量：2
- 2013年
- 目的观察周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞增殖相关基因的影响。方法采用四点弯曲应力仪分别以2 000μstrain和4 000μstrain的牵张力刺激前软骨干细胞1 h,并设空白对照组,荧光定量PCR检测相关增殖基因PCNA和Cyclin D1的表达情况,并用免疫荧光检测力学激前后Ki67阳性细胞的表达情况。结果 2 000μstrain刺激组细胞表达PCNA以及CyclinD1较对照组高(P<0.05),免疫荧光检测提示2 000μstrain刺激组的细胞核内Ki67表达较对照组明显增多;而4 000μstrain刺激组细胞PCNA的表达与对照组相比明显降低(P<0.05),而Cyclin D1降低不明显(P>0.05)。结论适宜的周期性单轴牵张力能引起大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的表达增加。
- 杨开祥吴颖星宋明宇程鹏郭风劲
- 关键词：软骨细胞干细胞
- 周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖影响的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的观察周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖能力的影响。方法免疫磁珠分选新生大鼠前软骨干细胞(precartilaginous stem cells,PSCs),取生长良好的第三代PSCs,通过四点弯曲细胞加压装置对细胞加载不同的机械牵张力(2 000、4 000μstrain),并在不同时间点(1、2、4和8 h)收集细胞,采用流式细胞仪检测应力刺激后PSCs的细胞周期及增殖指数的变化,揭示不同的牵张力在不同的时间点对PSCs增殖活性的影响。结果周期性单轴牵张力能影响大鼠PSCs的增殖活性。2 000μstrain机械牵张力组与对照组相比,增殖指数升高(P<0.05),促进细胞增殖,并且S期DNA合成率增多(P<0.05);而4 000μstrain机械牵张力组与对照组比较,增殖指数降低,抑制细胞增殖(P<0.05),同时S期细胞DNA合成率减少(P<0.05)。结论适宜的机械牵张力能促进PSCs增殖,过大的机械牵张力反而抑制细胞增殖。
- 杨开祥吴颖星杜宇刘芳娜郭风劲
- 关键词：软骨细胞干细胞
- SiRNA沉默Sox-9基因调控骨骺干细胞的增殖及凋亡被引量：1
- 2013年
- 背景:目前有研究表明,很多细胞生长因子可促进骨骺干细胞的增殖和分化,并且这种调控作用与Sox-9有密切的关系。目的:观察小分子干扰RNA沉默Sox-9基因及对大鼠骨骺干细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用酶消化法分离、免疫磁珠法纯化及免疫组织化学SABC法鉴定得到大鼠骨骺干细胞,首先进行预转染Sox-9 siRNA,判断转染效率,实验分2组:对照组常规培养,实验组采用Sox-9 siRNA转染。结果与结论:实验成功分离、纯化了原代骨骺干细胞,生长状态稳定、贴壁牢固,光学显微镜下细胞多呈梭形。免疫组织化学染色和免疫荧光鉴定显示,Sox-9 siRNA转染的大鼠骨骺干细胞可稳定表达相对特异性标志物成纤维细胞生长因子受体3。RT-PCR,MTT,流式细胞仪检测检结果提示,与对照组相比,实验组Sox-9mRNA表达及细胞存活率降低(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05)。结果证实,siRNA沉默Sox-9基因可调控大鼠骨骺干细胞的增殖和凋亡。
- 陈少坚郭风劲王春宫晨
- 关键词：干细胞骨骺干细胞SIRNA干扰细胞调控关节软骨修复
- 牵张应力对人骺板软骨细胞分化及凋亡的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察不同强度的机械牵张应力刺激对体外培养的小儿指骨骺板软骨细胞凋亡及软骨分化的影响，并探讨其相关机制。方法体外分离培养人骺板软骨细胞，使用Ⅱ型胶原（COLⅡ）免疫组化法及甲苯胺蓝染色进行鉴定。使用四点弯曲细胞力学加载装置分别对细胞进行不同强度的周期性牵张应力刺激（刺激强度分别为0μstrain、2000μstrain、4000μstrain，刺激时间6h、刺激频率0．5Hz），AnnexinV／PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况，荧光定量PCR技术检测各组细胞细胞增殖核抗原（PCNA）、凋亡相关基因（BAX、BCL-2）、软骨特征性细胞外基质（COLⅡ、COLX）及甲状旁腺激素相关蛋白（PThrP）的mRNA表达情况。结果Ⅱ型胶原免疫组化法可见COLⅡ大量表达。2000μstrain组骺板软骨细胞PCNA、COLⅡ、COLX、PThrPmRNA相对表达量分别为1．13±0．14、9．98±0．74、9．88±1．80和5．18±0．86，在4000μstrain组分别为0．06±0．叭、2．19±0．08、0．95±0．09和0．29±0．04，在对照组分别为1．00±0．12、6．73±0．62、1．00±0．08和1．00±0．14。2000μstrain组COLⅡ、COLX、PThrPmRNA相对表达量及4000μstrain组PCNA、COLⅡ、PThrPmRNA相对表达量，与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在4000μstrain的周期性牵张应力刺激下，细胞早期凋亡率、晚期凋亡和总凋亡率分别为（4．60±0．81）％、（8．39±2．08）％和（12．99±1．48）％，与对照组（1．01±0．32）％、（4．30±0．71）％和（5．61±1．04）％比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。2000μstrain组BCL-2、BAXmRNA比值为0．75±0．08，4000μstrain组为0．39±0．11，与对照组1．00±0．23比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论小儿指骨骺板软骨细胞的分化和凋亡受机械牵张应力所调节，适当的牵张应力能有效促进其其软骨基质形成，而过大牵张应
- 刘方娜邵景范董永辉郭风劲
- 关键词：生长面软骨细胞细胞分化
- 细胞周期依赖性蛋白激酶8在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达被引量：4
- 2015年
- 目的：探讨细胞周期依赖性蛋白激酶8（CDK8）在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达意义。方法：收集2011年3月~2013年6月我院收治的56例宫颈癌患者,观察CDK8在宫颈癌不同病变组织、宫颈癌患者不同临床分期以及宫颈癌不同分化程度中的表达。结果：CDK8在正常组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌中均有不同程度的表达,其阳性表达率分别为13.3%、55.6%、73.0%、90.0%、98.2%,各组阳性表达率进行比较差异有统计学意义（P〈0.05）;CDK8在临床Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、IV期中具有不同的阳性表达率,其阳性表达率分别为68.8%、77.8%、83.3%、100.0%,各临床分期之间的阳性表达率进行比较差异有统计学意义（P〈0.05）;CDK8在宫颈癌不同分化程度中具有不同的阳性表达率,其中低分化、中分化以及高分化的阳性表达率分别为72.2%、87.5%、92.9%,不同宫颈癌分化程度的CDK8的阳性表达率进行比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：CDK8的表达与宫颈癌的发生以及发展有着十分密切的关系,应用CDK8的表达去预测宫颈癌的病变以及转归具有十分重要的临床价值。
- 张丹丹高琴
- 关键词：宫颈癌宫颈上皮内瘤变
- 脂肪细胞条件培养基对成骨前体细胞成骨分化能力的影响
- 2012年
- 目的探讨脂肪细胞条件培养基对成骨前体细胞(MC3T3-E1)成骨方向分化能力的影响。方法制备脂肪细胞条件培养基(FCCM)培养3T3-E1,设常规培养液为对照培养基组(CM)。分别在培养7、14d后行Real-time PCR和West-ern-blot检测成骨相关转录因子Runx2(Runt-related transcription factor 2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(bone gamma-carbox-yglutamic-acid-containing protein,BGP),并在第14天时行ALP活性检测、ALP染色和茜素红染色。结果 FCCM组较对照组的3T3-E1的Runx2、ALP、BGP基因下调;同时Runx2、ALP、BGP蛋白水平下调;且FCCM组较对照组ALP活性降低,ALP染色和茜素红染色结果均为FCCM组为阴性,对照组阳性。结论 FCCM可下调成骨前体细胞成骨方向分化能力。
- 杜宇郭风劲徐飞宫晨叶亚平董永辉许涛
- 关键词：成骨细胞细胞分化
