陕西省科技攻关计划(2002k01-G3)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：安立龙窦忠英效梅葛欣更多>>
- 相关机构：广东海洋大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划广东省教育厅科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 单克隆人胰腺干细胞分离培养体系的建立被引量：3
- 2008年
- 本研究探讨了建立单克隆人胰腺干细胞分离培养体系及单克隆人胰腺干细胞系,对一些影响干细胞增殖的因素进行了分析。无菌取人流产胎儿胰腺组织。切碎至1 mm^3,0.1%Ⅳ型胶原酶消化。低糖DMEM、10%FBS、3.7g/L NaHCO_3、0.08 g/L青霉素及0.1 g/L链霉素培养液贴壁培养细胞。2.5 g/L胰蛋白酶+0.4g/L EDTA消化传代。克隆环筛选单克隆干细胞,培养液中添加10 ng/mL EGF,扩增单克隆干细胞。采用核型分析法检测干细胞染色体,MTT法测定干细胞生长曲线。胶原酶消化胰腺组织.获得单个细胞和细胞团。贴壁培养,原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长。胰蛋白酶消化传代,上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化。克隆环筛选,获得单克隆人胰腺干细胞。扩增培养。1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺组织干细胞建系,传50代。染色体核型分析,该干细胞系为正常的二倍体细胞。细胞生长曲线显示培养1-4 d,干细胞生长缓慢,5-6 d,进入倍增期。培养液中添加15%FBS,干细胞增殖较快,再添加15 ng/mL EGF或10 ng/mL IGF-Ⅱ,干细胞增殖更快。研究结果表明应用本实验建立的细胞分离培养体系获得了单克隆人胰腺干细胞系。
- 效梅安立龙葛欣窦忠英
- 关键词：EGF
- 单克隆人胰腺干细胞分化特性的研究被引量：1
- 2008年
- 研究1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺组织的单克隆人胰腺干细胞(monoclonal hu- man pancreatic stem cell,mhPSC)系的体内外分化特性。将mhPSCs接种在铺有0.1%明胶的培养皿内,扩增培养3 d后,加高糖DMEM诱导液诱导培养25 d。相差显微镜下,观察细胞生长状况。采用双硫腙染色法、RT-PCR及葡萄糖刺激释放胰岛素和C肽实验.对体外定向诱导mhPSCs分化为功能性胰岛进行检测。将mhPSCs悬液注射在成年雄性裸鼠腹股沟皮下。注射30 d时。取出移植物,采用SP法进行免疫组织化学反应。以检测mhPSCs的体内自然分化潜能。体外扩增培养。mhPSCs贴壁生长,呈多角形上皮样。生长至单层,呈"铺路石"状。体外定向诱导,细胞逐渐由多角形变成圆形,并聚集成类胰岛。诱导培养15 d时。形成的类胰岛中少数细胞分化为β细胞,双硫腙染色阳性。诱导培养25 d时,多数细胞分化为β细胞。双硫腙染色阳性,转录表达胰岛素的mRNA。用不同浓度葡萄糖刺激,诱导胰岛不仅释放胰岛素和C肽。而且其释放量随糖刺激浓度升高显著增加(0.01
- 效梅安立龙窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆分化
