中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ITBBZD0735)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
- 相关作者：袁克华程萍张银东冯仁军郑学勤更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 香蕉NBS-LRR类抗病基因同源序列的克隆与分析被引量：11
- 2009年
- 根据已知植物抗病基因的保守区域设计引物，从香蕉基因组DNA扩增出一条与植物抗病基因同源的序列，命名为BRGAl，该同源片段含有典型的NBS—LRR类抗病基因所拥有的保守性结构p-loop、Kinase-2a、Killase-3a和疏水结构域HD，它与部分已知NBS-LRR类抗病基因的氨基酸序列同源性为23．8％-42．7％。Northern杂交表明BRGA1在香蕉中受水杨酸调控，属诱导型表达。
- 袁克华冯仁军程萍张银东
- 关键词：抗病基因同源序列水杨酸
- 植物自交不亲和性的分子研究被引量：2
- 2008年
- 介绍了植物界中广泛存在的自交不亲和性的遗传控制及其2种主要类型:孢子体自交不亲和性与配子体自交不亲和性;综述了2种类型的代表性植物近年来在分子水平上的研究。
- 程萍冯仁军袁克华张银东
- 关键词：自交不亲和性S基因分子研究
- 无核荔枝生长素反应因子基因克隆及序列分析被引量：3
- 2013年
- 为获得在无核荔枝中胚珠退化过程中差异表达的生长素反应因子基因(ARF),对其全长的克隆并进行分析,根据构建的无核荔枝胚珠败育SSH消减文库的生长素反应因子EST序列,提取高质量的RNA,通过SMART-RACE技术,获得一个生长素反应因子3501bp的核苷酸序列。应用生物信息学软件进行分析,预测该序列含有2550bp的开放阅读框,推导的蛋白质为849个氨基酸,具有B3、Auxin_resp和AUX_IAA保守区与结构功能域。分析表明该基因为ARFs基因家族中的一个新成员,进化树上与芒果亲缘关系最近。
- 刘兴地莫坤联郑楷郑学勤李明芳
- 关键词：无核荔枝ARF克隆
- 香蕉红素氧还蛋白酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 结合改良的BDSMARTTMPCRcDNASynthesisKitUserManualcDNA合成试剂盒，反转录合成带有目的接头cDNA第一链．通过LD—PCR，扩增双链cDNA（dscDNA）．产物经双酶切后回收，与经同样双酶切的酵母双杂交系统中pGADT7载体连接转化，并进行了鉴定．结果表明：提取的RAN的A200／A200=1．82，表明所提RNA纯度高；双链cDNA文库大于0．2kb，且弥散较长，成瀑布条带状；根据生长菌落计数，文库舍有1．2×10^6转化子。重组子不同插入片段在0．3—2kh之间。表明该文库达到建库要求，为下一步进行酵母双杂交试验奠定基础．此方法用于构建cDNA文库与酵母双杂交系统相结合的研究目前尚未见过相关报道．
- 程萍冯仁军袁克华张银东
- 关键词：CDNA文库酵母双杂交
- RNA干扰的研究进展被引量：4
- 2009年
- RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA诱发的转录后水平的基因沉默现象,是近几年发展起来的基因表达调节新机制,广泛地存在于真菌、植物和动物中。主要介绍了RNAi的发现、分子机制、转基因载体构建策略以及RNA i在生命科学中广阔的应用前景。
- 袁克华冯仁军程萍张银东
- 关键词：RNA干扰双链RNA小干扰RNA
- INO启动子克隆及胚珠特异表达载体的构建
- 2012年
- 为了观察转基因植株胚珠特异性表达,采用CTAB法提取拟南芥基因组DNA,构建了35S::pCAMBIA1304-L117载体并对番茄进行遗传转化。根据已报道的INO启动子序列设计并合成一对特异引物,通过PCR对启动子进行扩增、连接并对其进行测序,结果表明:与GenBank中已注册的INO启动子序列的同源性为100%,并且构建了以INO代替CAMV35S启动子的pCAMBIA1304-L117植物表达载体,采用冷冻法将其转入根癌农杆菌EHA105。成功构建了35S::pCAMBIA1304-L117载体,并为进一步检测奠定了基础。
- 刘娜刘兴地李明芳郑学勤
- 关键词：植物表达载体
- 香蕉红素氧还蛋白基因在酵母双杂交系统中的自激活检测
- 2010年
- 利用PCR方法扩增香蕉红素氧还蛋白基因的保守结构域序列CdRD和开放性阅读框序列FRD,并在其上下游分别引入NdeⅠ和SalⅠ酶切位点,双酶切后与同样经NdeⅠ和SalⅠ双酶切的诱饵质粒载体pGBKT7连接,构建重组诱饵质粒pGBKT7-CdRD和pGBKT7-FRD,并将此两重组诱饵质粒转入酵母菌株AH109中进行营养缺陷型分析检测毒性及自激活。结果表明,成功构建了重组诱饵质粒pGBKT7-CdRD和pGBKT7-FRD,并且其无自激活报告基因作用,对酵母菌株也无毒性作用。这说明此两个重组诱饵质粒可用于酵母双杂交系统,为从香蕉叶片cDNA文库中筛选获得与香蕉红素氧还蛋白基因的保守结构域序列CdRD和开放性阅读框序列FRD相互作用的受体蛋白基因奠定了基础。
- 程萍冯仁军袁克华张丽丽祁君凤张银东
- 关键词：酵母双杂交自激活作用
