国家自然科学基金(81172261)
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 相关作者：刘晓红李培峰耿明周露婷曹永成更多>>
- 相关机构：山东省立第三医院中国人民解放军联勤保障部队第九六〇医院中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 野生型和自然缺失突变型HBx蛋白对肝癌细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2020年
- 目的探讨野生型和自然缺失突变型乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白对肝癌细胞生物学行为的影响。方法取人肝癌细胞系SMMC-7721,常规培养、传代。取对数生长期、生长状态良好的SMMC-7721细胞,随机分为空载体组、HBx-FJ组、HBx-128w组,分别转染pcDNA3.1、pcDNA3.1-HBx-FJ和pcDNA3.1-HBx-128w。Western blotting法检测HBx蛋白表达。采用MTT法检测细胞增殖活性,平板克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,裸鼠成瘤实验检测体外成瘤能力。结果HBx-FJ组和HBx-128w组细胞增殖活性、增殖能力、侵袭能力及体外成瘤能力均高于空载体组(P均<0.05);HBx-128w组细胞增殖活性、增殖能力、迁移能力、侵袭能力及体外成瘤能力均高于HBx-FJ组(P均<0.05);与空载体组相比,HBx-FJ组和HBx-128w组G1期细胞减少,S期细胞增多(P均<0.05)。结论野生型和自然缺失突变型HBx蛋白均具有促进肝癌细胞恶性进程的作用,但自然缺失突变型HBx-128w较野生型HBx具有更强的致癌作用。HBx可通过缺失突变影响其生物学功能,促进肝癌的进展。
- 张晶毕利泉辛萱王翠翠刘晓红
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝癌细胞缺失突变
- MYCT1在恶性肿瘤中的作用与调控机制研究进展
- 2021年
- MYCT1基因是近年在喉癌中发现的一种新基因,其在多种正常组织中表达,在多种恶性肿瘤中表达具有明显差异,可以调控肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移等生物学功能,从而参与肿瘤的发展进程。MYCT1在多种恶性肿瘤中显示抑癌基因作用,而在胃癌、急性髓系白血病中的作用尚存在争议。多种转录因子、微RNA和CpG岛甲基化参与MYCT1调控肿瘤的过程。未来应深入研究MYCT1在肿瘤中涉及的信号通路,明确上下游靶基因,了解其对不同肿瘤患者生存及预后的影响,探索MYCT1成为新的肿瘤治疗靶点的可能性和潜在价值。
- 张晶刘晓红
- 关键词：恶性肿瘤C-MYC
- Wnt-5a在原发性肝细胞癌发生中的表达及临床意义被引量：1
- 2014年
- 目的 检测Wnt-5a基因和基因产物在原发性肝细胞癌中的表达,探讨Wnt-5a基因在肝癌发生过程中的作用和临床意义.方法 采用实时定量PCR技术,检测Wnt-5a mRNA在26例新鲜肝细胞癌和癌旁组织中的含量;用免疫组化法观察Wnt-5a蛋白在85例肝细胞癌和癌旁组织、15例肝硬化组织中的表达.结果 Wnt-5a mRNA在肝癌及癌旁组织中的相对含量分别为0.102 127±0.158 620和0.020 106±0.022 075,两者间差异有统计学意义（P＜0.05）;Wnt-5a蛋白在肝细胞癌、癌旁组织和肝硬化中的阳性率分别为21.2％ （18/85）、81.26％ （69/85）和86.7％ （13/15）,Wnt-5a在肝癌组织中的阳性表达显著低于肝硬化和癌旁组织,差异有统计学意义（P ＜0.01）;Wnt-5a蛋白在肝癌中的表达与肿瘤的TNM分期和血清甲胎蛋白（AFP）含量有关（P＜0.05）.结论 Wnt-5a基因在HCC基因转录中呈上调表达,而在蛋白水平显示为缺失和下调表达,提示肿瘤细胞是在蛋白翻译水平而不是转录水平干扰了Wnt-5a基因功能.
- 李培峰刘晓红曹永成王翠翠周露婷耿明
- 关键词：遗传学原癌基因聚合酶链反应
- 缺失突变型HBx蛋白介导PDK2在肝细胞肝癌中的差异表达及机制被引量：2
- 2021年
- 目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中自然缺失突变型乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白介导的丙酮酸脱氢酶激酶2(PDK2)的差异表达情况以及可能参与调控长链非编码RNA(lncRNA)的机制。方法将Huh7细胞随机分为空载体pcDNA3.1组和HBx-128w组,分别转染pcDNA3.1和pc DNA3.1-HBx-128w。采用Western blotting法检测HBx蛋白的表达。使用lncRNA芯片对两组稳转细胞进行检测,明确pc DNA3.1-HBx-128w转染的Huh7细胞的m RNA表达谱和lncRNA表达谱,筛选相关差异表达基因,利用RT-qPCR方法在稳转细胞中进行验证。利用生物信息学预测可能参与调控的lncRNA,并利用RT-q PCR方法在稳转细胞中进行验证。结果PDK2在HBx-128w组Huh7细胞中呈上调表达,Fold Change为3.219。HBx-128w组Huh7细胞中PDK2的浓度比pcDNA3.1组升高(P<0.05),两组间差异倍数为3.591。HBx-128w组中的lncRNA ENST0000511361表达量较pc DNA3.1组升高(P<0.05),两组间差异倍数为3.742。结论自然缺失突变型HBx-128w转染的Huh7细胞中,PDK2呈上调表达;LncRNA ENST0000511361可能参与HCC发展过程中PDK2表达的调控。
- 张晶毕利泉曹瑞雪姜贝贝张自成刘晓红
- 关键词：肝细胞肝癌乙型肝炎病毒X蛋白
- HBx转染的肝癌Huh7细胞中差异表达mRNA、lncRNA筛选及其功能分析
- 2021年
- 目的采用长链非编码RNA(lncRNA)芯片检测HBx转染的肝癌Huh7细胞中的mRNA和lncRNA,筛选差异表达mRNA和lncRNA,并分析其功能。方法培养Huh7细胞,分为野生型HBx(HBx-FJ)组和pcDNA3.1组,分别转染pcDNA3.1-HBx-FJ、pcDNA3.1。采用lncRNA芯片检测两组Huh7细胞中的mRNA和lncRNA表达谱,以折叠倍率≥2.0、两组差异有统计学意义(P<0.05)、错误发现率<0.05判定为差异表达基因;用散点图和分层聚类分析差异表达的mRNA和lncRNA,结合GO分析和KEGG通路分析探讨差异表达mRNA参与的生物过程。选择6个关键mRNA在HBx转染的Huh7细胞中进行RT-qPCR检测,与芯片检测结果进行比对。结果与pcDNA3.1组相比,HBx-FJ组表达上调mRNA 253个,表达下调mRNA 321个;表达上调lncRNA 1108个,表达下调lncRNA 1182个。散点图及分层聚类分析结果显示,HBx-FJ组细胞存在显著差异表达的mRNA和lncRNA。GO和KEGG通路分析显示,差异表达的mRNA主要参与离子通道、跨膜转运、抗原的处理和呈递及蛋白加工的调节等过程,参与转录失调、信号转导、钙信号通路等途径。RT-qPCR检测HBx转染Huh7细胞中的6个关键基因(ASAP3、CFTR、POSTN、CAM⁃TA1、ESRRG、ROBO1),结果与芯片检测结果变化趋势基本一致。结论HBx转染的肝癌Huh7细胞中存在大量差异表达的mRNA、lncRNA,其中ASAP3、CFTR、POSTN、CAMTA1、ESRRG、ROBO1可能参与HBx对肝细胞肝癌的调控并发挥重要作用,主要参与离子通道、跨膜转运、抗原的处理和呈递及蛋白加工的调节等过程,以及转录失调、信号转导、钙信号通路等途径。
- 曹永成张晶王翠翠辛萱曹瑞雪姜贝贝刘晓红
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白MRNA
- miR-133b表达在肝癌发生、发展中作用研究
- 2021年
- 目的探讨miR-133b在肝癌发生、发展中的作用。方法收集2016—2018年经病理证实为肝癌病变组织标本106例纳入肝癌组织组,同时,收集其相应癌旁组织(距离癌灶边缘>2 cm)标本纳入为癌旁组织组。实时定量聚合酶链式反应检测肝癌、癌旁组织及LO2、HB-611、BEL-7402、Hep3b、SMMC-7721、HepG2等细胞株中miR-133b表达情况。体外培养SMMC-7721、HepG2细胞,应用细胞转染技术上调肝癌细胞中miR-133b表达,并将其分别随机分为mimic-133b转染组(细胞转染mimic-133b)和mimic-NC转染组(细胞转染mimic-NC)。CCK-8法检测细胞增殖能力。创伤愈合法检测细胞迁移能力。transwell小室法检测细胞侵袭能力。免疫印迹法检测肝癌细胞中结缔组织生长因子(CTGF)表达变化。结果106例肝癌患者组织中,82例肝癌组织内miR-133b表达水平明显低于正常癌旁组织(P<0.05)。HB-611、Hep3b、SMMC-7721和HepG2细胞中miR-133b表达水平较LO2细胞明显降低(P<0.05)。BEL-7402细胞中miR-133b表达水平与LO2细胞比较,差异无统计学意义(P>0.05)。mimic-133b转染组细胞miR-133b表达水平显著高于mimic-NC转染组,增殖能力明显低于mimic-NC转染组,迁移能力明显弱于mimic-NC转染组,侵袭能力明显弱于mimic-NC转染组,CTGF表达水平明显低于mimic-NC转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-133b可能通过下调CTGF表达来抑制肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭等,进而抑制肝癌的发生、发展。
- 曹永成曹瑞雪房磊陈鑫姜贝贝张建平刘晓红
- 关键词：肝癌结缔组织生长因子
