江苏省卫生厅科研基金(H200836)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
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- DNA甲基转移酶3b在人胰腺癌组织中的表达及其意义
- 2012年
- 目的检测人胰腺癌组织中DNA甲基化转移酶3b（DNMT3b）的表达，分析其与肿瘤临床病理特征的相关性。方法应用蛋白质印迹法检测12例配对人胰腺癌和癌旁组织中DNMT3b的表达；免疫组织化学法检测59例胰腺癌组织中DNMT3b的表达，并分析其与肿瘤临床病理特征的相关性。结果蛋白质印迹法结果显示，胰腺癌及癌旁组织DNMT3b蛋白表达量分别为0．69±0．13和0．14±0．03，癌组织的表达量明显高于癌旁组织（t=4．464，P〈0．05）。免疫组化结果显示，胰腺癌组织DNMT3b阳性高表达率为59％，癌旁组织阴性表达。肿瘤组织DNMT3b表达强度与TNM分期和淋巴结转移相关。结论DNMT3b在胰腺癌组织中高表达，其表达与肿瘤的恶性生物行为有关。
- 徐岷姚志新朱立宁徐萍周志华龚燕芳满晓华吴莺张尤历
- 关键词：胰腺肿瘤甲基化DNA甲基转移酶3B
- DNA甲基转移酶1在胰腺癌组织中的表达及其临床意义被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集手术切除的30例胰腺癌组织和配对癌旁组织.采用实时定量PCR法检测DNMT1 mRNA的表达;免疫组织化学法检测DNMT1蛋白的表达;分析胰腺癌组织DNMT1蛋白表达强度与临床病理参数之间的关系.结果 胰腺癌组织中DNMT1 mRNA的表达量为2.32（1.17～5.17）,显著高于配对癌旁组织的0.78（0.07～3.14,P＜0.05）.胰腺癌组织中导管细胞DNMT1蛋白表达阳性率为（54.5±21.2）%,显著高于癌旁组织（10.9±15.0）%的表达阳性率（P＜0.01）.以胰腺癌导管细胞DNMT1阳性率54.5%为界,分为高表达组（19例）和低表达组（11例）.DNMT1表达强度和临床分期（χ^2=6.897,P=0.029）、淋巴结转移（χ^2=4.739,P=0.029）、神经浸润与否（χ^2=5.44,P=0.020）相关,而与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小、肿瘤分化、血清CEA和CA19-9浓度无关.结论 胰腺癌组织DNMT1 mRNA和蛋白表达明显增加,DNMT1蛋白表达强度与胰腺癌的侵袭力、淋巴结转移和神经浸润相关.
- 张尤历徐岷高道键张玉琦高军杜奕奇龚燕芳满晓华李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤免疫组织化学
- 杆状病毒介导的靶向DNA甲基转移酶1 siRNA表达载体的构建被引量：3
- 2011年
- 目的:构建携带DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)RNAi基因的重组杆状病毒载体,以进一步研究DNMT1对胰腺癌相关基因的影响。方法:首先将带有BglⅡ和HindⅢ酶切黏性末端的60 bp正义和反义寡核苷酸退火,与用BglⅡ和HindⅢ双酶切后的线性化载体pSUPER连接构建成pSUPER si-DNMT1-D,然后将H1启动子和RNAi序列从上述重组载体切下,插入至同样双酶切的pFastBac1载体,经过转座重组,抽提重组BacmidDNA,转染草地贪夜蛾细胞Sf9,获得重组杆状病毒Bac-si-DNMT1-D。将上述重组杆状病毒感染胰腺癌PaTu8988细胞系,其中以重组杆状病毒r-Bac-CMV-EGFP作为阴性对照。然后运用荧光定量PCR检测DNMT1基因表达变化。结果:重组杆状病毒能够感染PaTu8988细胞,并且能显著干扰DNMT1基因表达。结论:杆状病毒表达系统可以作为RNAi载体,为以后的基因治疗开辟新的途径。
- 张尤历王晓燕徐岷吴岩吴莺焦志军
- 关键词：杆状病毒载体RNA干扰胰腺癌
- 靶向性沉默DNMTl基因对胰腺癌细胞DNA甲基化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察DNA甲基转移酶1（DNMTl）基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH·1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响。方法由美国Ambion公司设计合成DNMTIsiRNA和阴性对照siRNA，分别用15、30nmol／L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞，以未转染组细胞作为对照。应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMTlmRNA和蛋白的表达；用DNMT活性检测试剂盒检测其活性；用亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态；实时PCR法检测hMLH-1mRNA的表达。结果转染48h后，DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMTlmRNA表达量分别为0．573±0．026和0．143-3-0．044，显著低于对照组的1．020±0．217及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．900±0．475和0．938±0．327（P值均〈0．05）；DNMTlsiRNA组的DNMTl蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组。DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMT活性分别为0．364±0．124和0．250±0．072，明显低于对照组的0．931±0．065及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．665±0．055和0．472±0．040。DNMT活性与DNMTlmRNA表达呈正相关（r=0．69，P〈0．01）。DNMTlRNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化。结论DNMTlsiRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMTl基因的表达，明显抑制DNMT的活性，并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化。
- 徐岷张尤历高道键张玉琦李兆申高军杜奕奇龚燕芳吴洪玉高飞
- 关键词：DNA甲基转移酶1小分子干扰胰腺肿瘤甲基化
- 杆状病毒介导的DNA甲基转移酶1 siRNA对人胰腺癌细胞凋亡的影响
- 2013年
- 目的:观察杆状病毒介导的DNA甲基转移酶1(DNA-methyltransferase 1,DNMT1)siRNA(小干扰RNA)对人胰腺癌PaTu8988细胞凋亡的影响。方法:人胰腺癌细胞PaTu8988用6孔板培养并随机分成5组:空白组、阴性组、病毒r-Bac-si-DNMT1-D1组(D1组)、r-Bac-si-DNMT1-D2组(D2组)、r-Bac-si-DNMT1-D3组(D3组)。空白组仅加10%胎牛血清和DMEM培养基培养,阴性组、D1组、D2组、D3组加血清和DMEM培养基培养24 h后,分别加入空白载体r-Bac-CMV-EGFP和重组杆状病毒r-Bac-si-DNMT1-D1、r-Bac-si-DNMT1-D2、r-Bac-si-DNMT1-D3,150μL/孔。72 h后收集5组细胞,用流式细胞术测肿瘤细胞凋亡,蛋白质印迹法检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达情况。结果:D1组、D2组和D3组的细胞凋亡率明显高于空白组和阴性组(P<0.05)。与空白组和阴性组相比,D1组、D2组和D3组Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论:杆状病毒介导的DNMT1siRNA通过抑制Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达,诱导胰腺癌细胞的凋亡。
- 郭柔玉张尤历徐岷蒋健王晓燕蒋小猛徐萍
- 关键词：杆状病毒载体DNA甲基转移酶1胰腺癌细胞凋亡小干扰RNA
- 杆状病毒介导的DNMT1 siRNA对人胰腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：2
- 2012年
- 目的:观察介导DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因RNA干扰(RNAi)的杆状病毒载体(Bac-si-DNMT1-D)对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及毒性反应。方法:建立人胰腺癌SW1990细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为4组:空载体组、生理盐水组、低浓度病毒组及高浓度病毒组进行实验。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测DNMT1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测DNMT1、Bax和Bcl-2蛋白的表达;病理学及血清学检测裸鼠心、肝、肾功能变化。结果:病毒组肿瘤生长较对照组明显被抑制(P<0.05),凋亡指数显著高于两对照组(P<0.01)。病毒组的DNMT1 mRNA表达量显著低于两对照组(P<0.05)。病毒组DNMT1及Bcl-2蛋白表达低于两对照组,但Bax蛋白表达高于两对照组(P<0.01)。各组间裸鼠心、肝及肾未见异常。结论:杆状病毒介导的DNMT1 siRNA载体可以有效降低人胰腺癌裸鼠移植瘤内DNMT1基因表达,抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,且对裸鼠无明显毒性作用。
- 欧亮张尤历陈吉祥徐岷
- 关键词：胰腺癌DNA甲基转移酶1杆状病毒
- DNA甲基化与胰腺癌的研究进展被引量：1
- 2012年
- 表观遗传学调控机制在肿瘤发生、发展过程中起着重要的作用。DNA甲基化是重要的基因表观修饰方式之一。目前关于胰腺癌发病的分子机制尚未完全阐明,这大大限制了胰腺癌治疗领域的发展。DNA甲基化的研究对明确胰腺癌的发病机制及其早期诊断、靶向治疗等方面具有十分重要的意义。此文就DNA甲基化与胰腺癌关系的研究进展作一综述。
- 朱立宁徐岷张尤历
- 关键词：DNA甲基化表观遗传学胰腺癌
