国家自然科学基金(31070869)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
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- 灵长类动物桡神经缺损修复模型的功能学评价
- 2013年
- 目的 探讨灵长类动物桡神经缺损修复后功能学的评价方法.方法 解剖3只猕猴桡神经,建立5只猕猴双侧桡神经25 mm缺损的模型,分别用自体神经（A组）及去细胞猪神经（B组）桥接神经缺损（5侧/组）.术后观察猕猴一般情况及伸腕活动;于术前、术后1周、术后5个月,诱导、测量并计算术后累积最大伸腕角度（DEmax）和伸腕角度恢复率（R）以评价神经功能的修复效果.结果 桡神经在桡侧腕长伸肌第一肌支发出点以近可显露长度为52 ～ 62 mm,直径为3.3～4.1 mm;术后猕猴即时出现垂腕、垂指畸形,一般情况好,术后5个月A、B组DEmax和R的均值分别为120°、96°和99％、69％.结论 该模型安全、简便,可动态、定量评价神经功能恢复情况.
- 黄喜军朱庆棠江丽郑灿镔朱昭炜胡军何波路庆森许银峰
- 关键词：周围神经损伤神经再生猕猴
- 携带增强型绿色荧光蛋白的慢病毒载体转染大鼠脂肪干细胞被引量：5
- 2014年
- 目的探索脂肪干细胞（ADSCs）的标记方法，观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性ADSCs（EGFP—ADSCs）的体外活性、干细胞特性及体内短期活性。方法用携带增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因的慢病毒载体（Lv-eGFP）在感染复数（MOI）为0、1、5、25、50、100时，转染SD大鼠ADSCs12h，荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率和荧光强度；Mrrr法评价转染后细胞活性；EGFP—ADSCs分别行成脂分化及油红O检测、成骨分化及茜素红染色；将EGFP—ADSCs注射到去细胞神经构建组织工程化神经，修复大鼠坐骨神经缺损，术后1周取材进行冰冻切片观察细胞在体内存活情况。结果转染4d后，EGFP阳性率及荧光强度达到高峰；EGFP基因表达不随细胞传代而消失。MOI=0、1、5、25、50、100时，EGFP阳性转染率分别为0．13％、31．09％、75．33％、92．66％、96．70％、98．38％。实验组阳性率与对照组（MOI=0）选择相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）；MOI=25、50、100时，组问阳性率差异无统计学意义（P〉0．05），但与MOI=1、5比时差异（P〈0．05）。MTT试验观察10d内MOI=25、50、100组细胞增值活性与非转染细胞差异无统计学意义（P〉0．05）。选择MOI=25作为最佳转染滴度进行后续实验。转染后ADSCs成骨、成脂分化20d，茜素红染色见橘红色钙沉积，油红O染色见橙红色脂滴。1周冰冻切片观察细胞于体内呈梭形，均匀分布。结论慢病毒载体转染EGFP基因不影响ADSCs活性及成骨成脂分化能力，能为组织工程化神经修复缺损提供示踪种子细胞的方法。
- 李绍磊刘云江牛晓峰许银峰易建华杨有优江丽
- 关键词：脂肪干细胞转染绿色荧光蛋白慢病毒载体周围神经
- SPIO标记猪脂肪干细胞的生物学特性与多向分化潜能及体外3.0T MR成像
- 2011年
- 背景:不同种类细胞的最佳化标记方案需要大量实验证明,而每种细胞对应标记策略的安全性检测至关重要。目的:应用超顺磁性氧化铁联合多聚左旋赖氨酸标记猪脂肪干细胞,探讨磁标记对细胞生物学特性和多向分化潜能的影响以及标记细胞体外3.0TMR成像特性。方法:五指山小型猪皮下脂肪分离培养脂肪干细胞;超顺磁性氧化铁-多聚左旋赖氨酸复合物标记液标记脂肪干细胞;应用3.0TMR对不同浓度标记细胞进行T1WI、T2WI及T2*WI序列体外成像。结果与结论:普鲁士蓝染色显示标记细胞胞质内含有多少不等的蓝染铁颗粒,细胞标记率近100%;标记细胞向心肌、骨、脂肪方向诱导分化成功;不同浓度标记细胞MR扫描显示,随细胞浓度升高,3种序列信号变化率均增加;相同浓度细胞T2*WI信号变化率最大,T1WI最小,同一浓度3种MR序列间信号变化率差异均有显著性意义(P<0.01);3.0TMR成像能检测到至少1×106L-1标记细胞。结果显示应用超顺磁性氧化铁联合多聚左旋赖氨酸标记方案可有效标记脂肪干细胞,不影响细胞活力、增殖及多向分化能力;T2*WI序列检测标记细胞最敏感。
- 王霁胐江丽杨有优王丽琴蔡华崧赵静李子平杨建勇
- 关键词：超顺磁性氧化铁脂肪干细胞干细胞移植
- 猕猴脂肪干细胞体外多向分化潜能的实验研究
- 2014年
- 目的探讨猕猴来源的脂肪干细胞（ADSCs）的分离和培养方法及在体外多向分化的能力。方法健康成年雄性猕猴1只，年龄4岁，体质量4．5妇。从该猕猴胭窝深部脂肪组织中分离出成纤维样细胞，观察其生长特性，采用流式细胞仪检测其细胞表面标志，利用相应的诱导液分别诱导其向成骨细胞、脂肪细胞、施万细胞方向分化；观察诱导后细胞的形态变化，并分别用茜素红染色、油红0染色及细胞免疫荧光法检测诱导效果。结果猕猴脂肪组织分离、培养出的成纤维样细胞增殖迅速；细胞表面标志CD34、CD14、CD71、CD106、CD117、CD31、CD45、CD80、CD86及人白细胞DR抗原呈阴性表达；CD29、CD105、CD73、CD90呈阳性表达。在相应的诱导体系下可向成骨细胞、脂肪细胞、施万细胞分化，其中成脂诱导率为47．9％～61．5％（平均54．7％）；成施万细胞诱导后ADSCs胞体呈细小梭形，伸出2—3条细长突起；高表达神经胶质细胞标志蛋白S-100和胶质纤维性酸性蛋白质，平均诱导率分别为66．5％和60．6％，双重表达率平均为41．2％。结论从猕猴脂肪组织中可以分离并培养出具有较强的自我更新及多向分化潜能的ADSCs，在体外诱导条件下能分化为类施万细胞。
- 黄喜军朱庆棠江丽何彩凤郑灿镔刘小林
- 关键词：干细胞细胞分化猕猴属
