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国家教育部博士点基金(20100171110049)

作品数:2 被引量:7H指数:2
相关作者:程锐高国全戴智育王征齐炜炜更多>>
相关机构:中山大学教育部更多>>
发文基金:国家教育部博士点基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇血管
  • 1篇蛋白
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇多克隆抗体制...
  • 1篇新生血管
  • 1篇选择性
  • 1篇血管内皮
  • 1篇血管内皮细胞
  • 1篇视网膜
  • 1篇视网膜微血管
  • 1篇视网膜微血管...
  • 1篇牛视网膜
  • 1篇牛视网膜微血...
  • 1篇网膜
  • 1篇微血管
  • 1篇微血管内皮
  • 1篇微血管内皮细...
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞培养

机构

  • 2篇教育部
  • 2篇中山大学

作者

  • 2篇戴智育
  • 2篇高国全
  • 2篇程锐
  • 1篇李磊
  • 1篇陈大伟
  • 1篇黄莉钧
  • 1篇陈易斐
  • 1篇杨霞
  • 1篇陈少波
  • 1篇齐炜炜
  • 1篇王征

传媒

  • 1篇解剖学研究
  • 1篇热带医学杂志

年份

  • 1篇2012
  • 1篇2011
2 条 记 录,以下是 1-2
排序方式:
抗新生血管蛋白KBP多克隆抗体的制备及鉴定被引量:2
2011年
目的激肽释放酶结合蛋白(Kallikrein-binding protein,KBP)具有抑制血管新生的高活性,但目前尚无KBP的特异性抗体,限制其进一步研究。本研究拟制备高灵敏度和高特异性的KBP抗体并对其进行初步评估。方法构建含大鼠源性KBP序列的pET-28a重组载体的大肠杆菌BL21(DE3),在此基础上,扩增表达菌,经异丙基B.D一硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA色谱柱亲和层析纯化获得KBP重组蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot方法对KBP进行鉴定。以纯化产物为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗KBP血清,亲和纯化获得多克隆抗体。应用Elisa和Western-blot方法检测纯化抗体的效价和特异性。结果 KBP融合蛋白得到高表达,且纯度大于85%。用该融合蛋白免疫大白兔后得到的抗KBP抗体,效价达1∶512 000,并特异性识别大鼠和人组织中天然的KBP蛋白。结论以纯化的KBP重组蛋白为抗原,获得KBP多克隆抗体,具有较好的效价和特异性,为KBP功能和作用机制的深入研究提供了必要的工具。
陈易斐黄莉钧李磊戴智育程锐杨霞高国全
关键词:多克隆抗体制备
一种高选择性、高效的牛视网膜微血管内皮细胞培养方法被引量:5
2012年
目的建立一种高效、可行、特异性高的牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)培养方法。方法取新鲜牛眼,分离视网膜并用DMEM进行冲洗、匀浆剪碎,过75μm筛,将滤网上滤渣转移至50ml离心管,用Ⅰ型胶原酶、DNaseⅠ及蛋白酶等多种酶混合液消化20min,人血清中和后,过46μm网筛并冲洗,离心5min,将组织扣在培养皿中,转入15ml离心管,用10%人血清含生长因子ECGS的DMEM培养液培养于25cm2,选择性培养视网膜血管内皮细胞,接种于明胶包被培养瓶中,采用ECGS配合肝素培养液促进内皮细胞生长,观察细胞形状生长特性,并用免疫化学荧光方法进行鉴定。结果选择性培养视网膜微血管内皮细胞成单层、镶嵌铺路石状生长,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测为阳性纯度均大于95%以上,将细胞种在凝固的基质胶表面,12~18h形成官腔结构。结论本方法过程简单、可靠,培养的内皮细胞纯度高,生长状态良好,稳定传代,为视网膜血管生成疾病研究建立了模型。
王征齐炜炜陈少波戴智育陈大伟程锐高国全杨霞
关键词:视网膜微血管内皮细胞细胞培养
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