采用酸水解法制备水解氨基酸样品溶液，以异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生化后进行HPLC分析。采用Ultimate Prime C18色谱柱（4．6mm×250mm，5tzm）；流动相A0．1mol·L-1醋酸钠溶液（调pH至6．5）-乙腈（93：7），流动相B乙腈-水（8：2）；流速1．0mL·min-1；柱温40oC；检测波长254nm；梯度洗脱。氨基酸衍生溶液在36h内保持稳定，16种氨基酸线性相关系数均大于0．9995，加样回收率在98．01％～101．8％。该方法操作简便，精密度和重复性良好，可用于鸡内金中16种水解氨基酸含量的测定。
为了拓展藤黄在中医临床的应用,研究其内服的毒性及炮制减毒的机制是必要的。通过巨噬细胞RAW264.7释放炎症介质(一氧化氮NO、肿瘤坏死因子TNF-α和白细胞介素IL-6)和灌胃给予藤黄生品和炮制品后大鼠胃和十二指肠组织的病理表现,判断其毒性作用;采用免疫组化和实时荧光定量PCR技术检测灌胃给药后,大鼠胃和十二指肠组织AQP3,AQP4蛋白和m RNA的表达,研究藤黄炮制减毒的机制。结果表明,藤黄生品可促进炎症介质NO,TNF-α和IL-6的释放,且与剂量呈相关性;藤黄制品组与生品组比较,NO和IL-6的释放量降低,TNF-α的释放量增加;藤黄生品可引起大鼠腹泻、白细胞升高、淋巴细胞降低,使胃黏膜充血水肿,肠黏膜坏死和炎细胞浸润,从多个角度证明内服生藤黄对胃和十二指肠组织的毒性为致炎毒性,致炎毒性与给药剂量呈相关性,炮制后藤黄的致炎毒性降低。在藤黄对胃和十二指肠组织致炎的同时,藤黄生品高剂量组大鼠胃和十二指肠组织水通道蛋白AQP3,AQP4 m RNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05),相应剂量藤黄制品组大鼠AQP3,AQP4表达量较生藤黄组低,说明AQP3,AQP4蛋白和m RNA表达量的高低与藤黄的致炎作用强弱有一致性。通过降低AQP3,AQP4的表达水平可能是藤黄炮制减毒的作用机制之一。
