公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-4

全选清除导出

排序方式：

化学修饰对嗜水气单胞菌弹性蛋白酶活性及稳定性的影响被引量：3: 2007年; 用10ku的截流膜超滤、30％～60％的硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析，获得纯化的嗜水气单胞菌胞外弹性蛋白酶。SDS-PAGE显示，该酶是分子量约为33ku的单体蛋白。用活化的右旋糖酐及单甲氧聚乙二醇（MPEG）分别对纯化的嗜水气单胞菌弹性蛋白酶进行化学修饰。修饰后的酶与原酶相比，修饰酶保留了天然酶的活性，两种修饰酶活性均能保留在60％以上，用MPEG修饰酶的保留活性更高（85．5％），而且两种修饰酶在耐热性、耐酸性等方面都优于天然酶，但修饰后酶的最适pH没变。修饰酶较天然酶稳定，具有较高的实用意义。; 孟喜龙刘永杰陆承平; 关键词：嗜水气单胞菌弹性蛋白酶右旋糖酐稳定性

嗜热四膜虫——具有发展潜力的功能基因组学研究模型被引量：3: 2006年; 在真核生物的分子生物学和遗传学研究方面,纤毛类原生动物嗜热四膜虫(Tetrahymenathermophila)已经被证明是一种有价值的生物学模型。通过对它的研究,人们发现并且掌握了核酶的分子机制、RNA的自我拼接、端粒的结构和功能、DNA序列重组等机理。这种原生动物的基因组功能分别由两个细胞核执行,即二倍体的小核与生殖过程有关,而多倍体的大核决定细胞的基因转录,并为转化基因的表达提供了强有力的手段。; 杨秋峰刘永杰; 关键词：嗜热四膜虫功能基因组学

四膜虫基因打靶载体的构建及其在虫体内的转化被引量：1: 2007年; 【目的】构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性。【方法】以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂,并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA,中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo,从而构建一个基因打靶载体。将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内,使其同源重组到四膜虫H4-I基因上。通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定。光学和电子显微镜观察抗性虫株形态变化。【结果】成功构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体,将其电击转化到四膜虫体内,抗性虫株的生长速度明显高于普通四膜虫,显微镜观察抗性虫株形态变小,大约是正常形态的1/20～1/30,抗性虫株表面光滑,未见纤毛。【结论】利用基因打靶载体将neo基因定向整合到四膜虫H4-Ⅰ基因内部,为今后在嗜热四膜虫体内表达外源蛋白奠定了基础。; 杨秋峰蒋蔚刘永杰陆承平; 关键词：嗜热四膜虫 NEO 同源重组

嗜水气单胞菌J-1株OmpA融合蛋白的高效表达及免疫原性分析被引量：7: 2008年; 以嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）J-1株基因组为模板，根据GenBank已发表的嗜水气单胞菌外膜蛋白的基因序列设计1对引物，扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段，定向克隆至表达质粒pET32a（＋）中，重组质粒经限制性酶切鉴定后测序。结果表明，插入片段长度为948bp，与NCBI上登录的几个相关序列相比，同源性在93．1％-95％之间，缺失4个氨基酸。将重组原核表达质粒pET32a-OmpA转化至大肠杆菌BL21（DE3），经诱导可表达分子量约57．4kD的蛋白，凝胶薄层扫描显示OmpA在转化菌中表达量占全菌蛋白的50％以上。用兔抗J-1株总外膜蛋白血清进行Western blot，在57．4kD处有明显反应条带。融合蛋白经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后免疫新西兰兔制备抗血清，ELISA效价达1：12800以上。Western blot检测结果显示，该血清与9株具有代表性的气单胞菌的分子量约35kD的外膜蛋白均有较强反应，说明所表达的融合蛋白不仅保持原有外膜蛋白的免疫原性，而且提示OmpA可能是嗜水气单胞菌的共同保护性抗原。[中国水产科学，2008，15（2）：301—306]; 蒋蔚刘永杰陆承平; 关键词：嗜水气单胞菌免疫原性

全选清除导出

共1页<1>

国家自然科学基金(30400332)